Съдържанието на статията

Шигела

Бактериите от рода Shigella са причинители на бактериална дизентерия или шигелоза. Дизентерията е полиетиологично заболяване. Наричат ​​го различни видовебактерии, наречени Shigella в чест на A. Shiga. В момента те са класифицирани в рода Schigella, който е разделен на четири вида. Три от тях - S. dysenteriae, S. flexneri и S. boydii - се разделят на серовари, а S. flexneri също се разделя на субсеровари.

Морфология и физиология

По своите морфологични свойства Shigella се различава малко от Escherichia и Salmonella. Те обаче нямат флагели и следователно са неподвижни бактерии. Много щамове Shigella имат пили. Различните видове Shigella са идентични по своите морфологични свойства. Причинителите на дизентерия са хемоорганотрофи, неизискващи към хранителните среди. Върху твърда среда, когато се изолира от тялото на пациента, обикновено се образуват S-форма колонии. Shigella видовете Schigella sonnei образуват два типа колонии - S-форма (I фаза) и R-форма (II фаза). Когато се субкултивират, бактериите от фаза I образуват и двата вида колонии. Shigella е по-малко ензимно активен от другите ентеробактерии: при ферментация на глюкоза и други въглехидрати те образуват кисели хранибез образуване на газ. Shigella не разгражда лактозата и захарозата, с изключение на S. sonnei, който бавно (на втория ден) разгражда тези захари. Невъзможно е да се разграничат първите три вида въз основа на биохимични характеристики.

Антигени

Shigella, подобно на Escherichia и Salmonella, имат сложна антигенна структура. Клетъчните им стени съдържат О-, а при някои видове (Shigella Flexner) и К-антигени. Тяхната химична структура е подобна на антигените на Escherichia. Разликите се състоят главно в структурата на крайните връзки на LPS, които определят имунохимичната специфичност, което прави възможно разграничаването им от други ентеробактерии и помежду си. В допълнение, Shigella има кръстосани антигенни връзки с много серогрупи на ентеропатогенни Escherichia, които причиняват главно заболявания, подобни на дизентерия, и с други ентеробактерии.

Патогенност и патогенеза

Вирулентността на Shigella се определя от техните адхезивни свойства. Те се придържат към ентероцитите на дебелото черво благодарение на тяхната микрокапсула. След това те проникват в ентероцитите с помощта на муциназа, ензим, който разрушава муцина. След колонизиране на ентероцитите, Shigella навлиза в субмукозния слой, където се фагоцитира от макрофаги. В този случай настъпва смъртта на макрофагите и освобождаването на голям бройцитокини, които заедно с левкоцитите предизвикват възпалителен процесв субмукозния слой. В резултат на това междуклетъчните контакти се нарушават и голям брой шигели проникват в активираните от тях ентероцити, където се размножават и разпространяват в съседни клетки, без да излизат във външната среда. Това води до разрушаване на епитела на лигавицата и развитие язвен колит. Shigella произвежда ентеротоксин, чийто механизъм на действие е подобен на термолабилния ентеротоксин на Escherichia. Shigella Shiga произвежда цитотоксин, който атакува ентероцитите, невроните и миокардните клетки. Това показва наличието на три вида активност - ентеротоксична, невротоксична и цитотоксична. В същото време при унищожаване на Shigella се освобождава ендотоксин - LPS от клетъчната стена, който навлиза в кръвта и оказва влияние върху нервната и съдова система. Цялата информация за факторите на патогенност на Shigella е кодирана в гигантски плазмид, а синтезът на Shiga токсин е кодиран в хромозомен ген. По този начин патогенезата на дизентерия се определя от адхезивните свойства на патогените, тяхното проникване в ентероцитите на дебелото черво, вътреклетъчното възпроизвеждане и производството на токсини.

Имунитет

С дизентерия, местни и общ имунитет. В локалния имунитет съществено значение има секреторният IgA (SIgA), който се образува през 1-вата седмица от заболяването в лимфоидните клетки на чревната лигавица. Като покриват чревната лигавица, тези антитела предотвратяват прикрепването и проникването на Shigella в епителни клетки. В допълнение, по време на инфекцията, титърът на серумните антитела IgM, IgA, IgG се увеличава, което достига максимум през 2-та седмица от заболяването. Най-голямо количество IgM се открива през 1-вата седмица на заболяването. Наличието на специфични серумни антитела не е индикатор за напрежение локален имунитет.

Екология и епидемиология

Местообитанието на Shigella е дебелото черво на човека, в чиито ентероцити се размножават. Източник на инфекцията са пациенти, хора и бактерионосители. Заразяването става чрез поглъщане на заразена храна или вода. По този начин основният път на предаване на инфекцията е хранителен. Въпреки това са описани случаи на контактно-битово предаване. Устойчивостта на различните видове Shigella към факторите на околната среда не е еднаква - S. dysenteriae е най-чувствителен, S. sonnei е най-малко чувствителен, особено в R-формата. Те остават в изпражненията за не повече от 6-10 часа.

дизентерия (шигелоза)

Дизентерия - остра или хронична заразна болест, характеризиращ се с диария, увреждане на лигавицата на дебелото черво и интоксикация на тялото. Това е едно от най-често срещаните чревни заболяванияв света. Причинява се от различни видове бактерии от рода Shigella: S.dysenteriae, S.flexneri, S.boydii, S.sonnei. IN следвоенни годинив индустриализираните страни дизентерията е по-често причинена от S.flexneri и S.sonne и. В Украйна те използват международна класификацияна тези бактерии, което отчита техните биохимични свойства и особености на антигенната структура. Има общо 44 серовара на Shigella Основният метод микробиологична диагностикадизентерията е бактериологична. Схемата за изолиране на патогена е класическа: инокулация на материала върху обогатителна среда и агар Ploskirev, получаване на чиста култура, изследване на нейните биохимични свойства и идентификация с помощта на поливалентни и моновалентни аглутиниращи серуми.

Вземане на материал за изследване

Положителният резултат от микробиологичния анализ до голяма степен зависи от навременното и правилно събиране на материала за изследване. Във всички случаи и бактерии те често вземат изпражнения, по-рядко - повръщане и промивна вода от стомаха и червата. Изпражненията (1-2 g) се вземат със стъклена пръчица от легло или пелена, включително парчета слуз и гной (но не и кръв). Най-добре е да вземете слуз (гной) от засегнатите области на лигавицата по време на колоноскопия за изследване. При събирането и засяването на материал е важно стриктно да се спазват определени правила. Бактериологични изследванияако е възможно, трябва да започне преди началото на етиотропното лечение. Преди събиране на изпражненията съдовете (съдове, тенджери, буркани) се попарват с вряща вода и в никакъв случай не се третират. дезинфекционни разтвори Shigella е много чувствителна. Изследваният материал трябва бързо (до леглото на пациента) да се засява в обогатяващата среда и успоредно с това върху селективен агар в петриево блюдо. Изпражненията могат да бъдат събрани, без да се чака движението на червата, като се използва памучен тампон или ректални епруветки на Ziemann.Събраният материал или инокулираната среда трябва незабавно да се достави в лабораторията. Ако е невъзможно да се култивира в болницата и бързо да се доставят изпражненията, те се съхраняват в консервант (30% глицерол + 70% фосфатен буфер) при 4-6 ° C за не повече от един ден.Патогените на дизентерия много рядко проникват в кръвта и урината и следователно тези обекти обикновено не се засяват Бактериологичният анализ на срезов материал трябва да се извърши възможно най-скоро след смъртта (дебело черво, мезентериален Лимфните възли, части от паренхимни органи). По време на огнища на дизентерия те също се изследват хранителни продукти, особено мляко, сирене, сметана.

Бактериологични изследвания

Инокулацията на изпражненията се извършва паралелно върху селективната среда на Ploskirev за получаване на изолирани колонии и винаги в селенитен бульон, за да се натрупат Shigella, ако има малко от тях в изследвания материал. Мукопурулентните парчета се избират с бактериологична бримка, старателно се изплакват в 2-3 епруветки с изотоничен разтвор на натриев хлорид, нанасят се върху средата на Ploskirev и се втриват в агар на малка площ със стъклена шпатула. След това шпатулата се отстранява от средата и остатъчният материал се втрива сух върху останалата неинокулирана повърхност. При сеитба в 2-3 чашки се прилага нова порция семена във всяка от тях. Части от слуз и гной се засяват в селенитния бульон без изплакване.При липса на мукопурулентни парчета, изпражненията се емулгират в 5-10 ml 0,85% разтвор на натриев хлорид и 1-2 капки от супернатанта се засяват върху средата на Ploskirev. Неемулгираните изпражнения се засяват в селенит бульон в съотношение 1:5. При култивиране на повръщане и вода за измиванеизползвайте селенитен бульон с двойна концентрация и осигурете съотношение на инокулума към средата 1:1. Културалната среда, инокулирана до леглото на пациента, се поставя директно в термостата. Всички култури се отглеждат при 37 ° C в продължение на 18-20 часа.На втория ден, с невъоръжено око или с помощта на лупа 5x-10x, разгледайте модела на растеж върху средата на Ploskirev, където Shigella образува малки, прозрачни, безцветни колони. Shigella Sonne може да произвежда колони от два вида: някои са плоски с назъбени ръбове, други са кръгли, изпъкнали, с влажен блясък. 3-4 колонии се изследват под микроскоп, всичко се унищожава и се презасажда в центъра на Олкеницки, за да се изолира чиста култура. Ако няма растеж върху агар на Плоскирев или няма характерни колонии от Shigella, посейте от селенитен бульон върху агар на Плоскирев или Ендо. Ако има достатъчен брой типични колонии, се извършва приблизителна реакция на аглутинация върху стъкло със смес от серуми Flexner и Sonne.На третия ден се взема предвид моделът на растеж върху средата на Olkenitsky. Шигел се обажда характерни променитри царевичен агар (колоната става жълта, цветът на наклонената частица не се променя, няма почерняване). Подозрителна култура се засява в среда на Hiss за определяне на биохимичните свойства или се използват ентеротестове.Серологичната идентификация на изолирани култури се извършва с помощта на реакция на аглутинация на стъкло, първо със смес от серуми срещу видове Flexner и Sonne, които често се срещат, и след това с моновидови и монорецепторни серуми. Напоследък се произвеждат търговски поливалентни и моновалентни серуми срещу всички видове патогени на дизентерия.Реакцията на коаглутинация също се използва за определяне на вида Shigella. Видът на патогена се определя чрез положителна реакция с протеин А на Staphylococcus aureus, върху който се адсорбират специфични антитела срещу Shigella. Капка сенсибилизиран с антитяло протеин А се нанася върху типична колония, съдът се разклаща и след 15 минути се наблюдава появата на аглутинат под микроскоп. Реакцията на коаглутинация може да се извърши още на втория ден от изследването, ако има такава достатъчно количестволактозо-отрицателни колонии.С цел бърза и надеждна идентификация на Shigella се провеждат и директни и индиректни реакции на имунофлуоресценция и ензимни антитела. Последният при дизентерия е високоспецифичен и се използва все повече в лабораторната диагностика на заболяването.За откриване на антигени в кръвта на пациентите, включително като част от циркулиращите имунни комплекси, хемаглутинационната агрегатна реакция и методът ELISA (диагностична тестова система Shigelaplast) могат използван. Антигените на Shigella в изпражненията и урината се откриват с помощта на RNGA, RSK и коаглутинация. Тези методи са високо ефективни, специфични и подходящи за ранна диагностика.За да се установи дали изолираните култури принадлежат към род Shigella, се прави и кератоничен тест на морски свинчета.В конюнктивата се поставя бримка от агарна култура или капка бульон торбичка Важно е да не се нарани роговицата. Новите инфекции с Shigella причиняват тежък кератит 2-5 дни след въвеждането на културата. Салмонелата също може да причини конюнктивит, но не засяга роговицата. Все пак трябва да се помни, че ентероинвазивните Escherichia coli (EIEC), особено серовари 028, 029, 0124, 0143 и др., също причиняват експериментален кератоконюнктивит при морски свинчета.Бактериологичният метод за диагностициране на дизентерия е надежден, но в различни лаборатории (в зависимост от върху квалификацията на бактериолозите и лаборантите) дава само 50-70% положителни резултати. В допълнение към диагностицирането на заболяванията се извършват и бактериологични изследвания за идентифициране на носители на бактерии, особено сред служители на хранителни предприятия, детски заведения и медицински заведения. За да се идентифицират източниците на инфекция, се определят фаговари и колициновари на Shigella.

Серологична диагностика

Рядко се извършва серологична диагностика на дизентерия. Инфекциозният процес не е придружен от значително антигенно дразнене, поради което титрите на антителата в серума на пациенти и реконвалесценти са ниски. те се откриват на 5-8 ден от заболяването. Повече антитела се образуват през 2-3-та седмица Реакцията на обемна аглутинация с микробна диагностика се извършва по същия начин, както реакцията на Widal при коремен тиф и паратиф. Кръвният серум се разрежда от 1:50 до 1:800. Диагностичният титър на антителата срещу S.flexneri при възрастни пациенти се счита за 1:200, при S.dysenteriae и S.sonnei - 1:100 (при деца, съответно - 1:100 и 1:50). се получават при стадиране на RNGA, особено при използване на метода на сдвоения серум. Увеличаването на титъра 4 или повече пъти има диагностично значение. Еритроцитните диагностикуми се произвеждат главно от антигени на S.flexneri и S.sonnei.Алергичният интрадермален тест с дизентерин на Цуверкалов (разтвор на протеинови фракции на Shigella Flexner и Sonne) също е от помощна стойност за диагностика. Става положителен при пациенти с дизентерия от 4-ия ден. Реакцията се записва след 24 часа. Когато се появи хиперемия и подуване на кожата с диаметър 35 mm или повече, реакцията се оценява като силно положителна, при 20-34 mm - умерена и при 10-15 mm - съмнителна.

Специфична профилактика и лечение

Получаването на различни ваксини (нагрети, формализирани, химически) не реши проблема специфична профилактикадизентерия, тъй като всички те са имали ниска ефективност. За лечение се използват флуорохинолони и по-рядко антибиотици.

е остра чревна инфекция, причинена от бактерии от рода Shigella, характеризираща се с преобладаваща локализация на патологичния процес в лигавицата на дебелото черво. Дизентерията се предава по фекално-орален път (с храна или вода). Клинично, пациент с дизентерия изпитва диария, коремна болка, тенезъм и синдром на интоксикация (слабост, слабост, гадене). Диагнозата дизентерия се установява чрез изолиране на патогена от изпражненията на пациента; за дизентерия Григориев-Шига - от кръвта. Лечението се провежда предимно амбулаторно и се състои от рехидратираща, антибактериална и детоксикационна терапия.

Главна информация

е остра чревна инфекция, причинена от бактерии от рода Shigella, характеризираща се с преобладаваща локализация на патологичния процес в лигавицата на дебелото черво.

Характеристики на патогена

Причинителите на дизентерия - Shigella, в момента са представени от четири вида (S. dysenteriae, S.flexneri, S. boydii, S. Sonnei), всеки от които (с изключение на Shigella Sonne) на свой ред е разделен на серовари, от които в момента има повече от петдесет. Популацията на S. sonnei е хомогенна по антигенен състав, но се различава по способността си да произвежда различни ензими. Shigella е неподвижна грам-отрицателна пръчка, не образува спори, възпроизвежда се добре върху хранителни среди и обикновено не е много стабилна във външната среда.

Оптималната температурна среда за Shigella е 37 ° C, бацилите Sonne са способни да се размножават при температура 10-15 ° C, могат да образуват колонии в мляко и млечни продукти, могат да останат жизнеспособни дълго време във вода (като Shigella Flexner) , и са устойчиви на антибактериални средства. Shigella бързо умира при нагряване: моментално - при кипене, след 10 минути - при температура над 60 градуса.

Резервоар и източник на дизентерия е човек - болен или безсимптомен носител. Най-голямо епидемиологично значение имат пациентите с леки или изтрити форми на дизентерия, особено тези, свързани с хранително-вкусовата промишленост и заведенията за обществено хранене. Shigella се освобождава от тялото на заразен човек, като се започне от първите дни на клиничните симптоми, инфекциозността продължава 7-10 дни, последвано от период на възстановяване, през който обаче е възможно и освобождаването на бактерии (понякога това може да продължи няколко седмици и месеци).

Дизентерията на Flexner е най-предразположена към хронифициране; най-малка склонност към хронифициране се наблюдава при инфекция, причинена от бактерии Sonne. Дизентерията се предава от фекално-орален механизъмглавно хранителен (дизентерия на Sonne) или воден (дизентерия на Flexner) път. При предаване на дизентерия Григориев-Шига, пътят на предаване е предимно чрез контактно и битово предаване.

Хората имат висока естествена чувствителност към инфекция, след преболедуване от дизентерия се формира нестабилен типоспецифичен имунитет. Тези, които са се възстановили от дизентерия на Flexner, могат да запазят постинфекциозен имунитет, който предпазва от повтарящи се заболявания в продължение на няколко години.

Патогенеза на дизентерия

Shigella идва от храна или вода. храносмилателната система(частично умират под въздействието на киселинното съдържимо на стомаха и нормалната чревна биоценоза) и достигат до дебелото черво, като частично проникват в лигавицата му и предизвикват възпалителна реакция. Лигавицата, засегната от Shigella, е склонна към образуване на зони на ерозия, язви и кръвоизливи. Токсините, отделяни от бактериите, нарушават храносмилането, а наличието на Shigella разрушава естествения биобаланс чревна флора.

Класификация

В момента се използва клиничната класификация на дизентерия. Има остра форма (различаваща се в преобладаващите симптоми на типична колитична и атипична стомашно-чревна), хронична дизентерия (рецидивираща и продължителна) и бактериална екскреция (реконвалесцентна или субклинична).

Симптоми на дизентерия

Инкубационен период остра дизентерияможе да продължи от един ден до седмица, най-често 2-3 дни. Колитичният вариант на дизентерия обикновено започва остро, телесната температура се повишава до фебрилни нива и се появяват симптоми на интоксикация. Апетитът е значително намален и може да отсъства напълно. Понякога се отбелязват гадене и повръщане. Пациентите се оплакват от интензивна режеща болка в корема, първоначално дифузна, по-късно концентрирана в дясната илиачна област и долната част на корема. Болката е придружена от честа (до 10 пъти на ден) диария, изпражненията бързо губят консистенцията на изпражненията, стават оскъдни и съдържат патологични примеси - кръв, слуз и понякога гной („ректална изплювка“). Позивите за дефекация са изключително болезнени (тенезми), понякога фалшиви. Общият брой на дневните движения на червата обикновено не е голям.

При преглед езикът е сух, обложен, тахикардия, понякога артериална хипотония. Остра клинични симптомиобикновено започва да отшумява и накрая избледнява до края на първата седмица, началото на втората, но язвените дефекти на лигавицата обикновено се лекуват напълно в рамките на един месец. Тежестта на хода на колитичния вариант се определя от интензивността на интоксикацията и синдром на болкаи продължителността на острия период. При тежко протичанесе наблюдават нарушения на съзнанието, причинени от тежка интоксикация, честотата на изпражненията (като „ректално плюене“ или „месна помия“) достига десетки пъти на ден, болезнена коремна болка и се отбелязват значителни хемодинамични нарушения.

Острата дизентерия в стомашно-чревния вариант се характеризира с кратко инкубационен период(6-8 часа) и главно ентерални признаци на фона на синдром на обща интоксикация: гадене, многократно повръщане. Протичането наподобява това при салмонелоза или токсична инфекция. Болката при тази форма на дизентерия е локализирана в епигастрална области около пъпа, има спазмен характер, изпражненията са хлабави и обилни, няма патологични примеси; при интензивна загуба на течност може да възникне синдром на дехидратация. Симптомите на стомашно-чревната форма са бурни, но краткотрайни.

Първоначално гастроентероколитната дизентерия също наподобява по своето протичане хранителна токсична инфекция; впоследствие започват да се появяват колитични симптоми: слуз и кървави ивици по изпражненияо Тежестта на гастроентероколитичната форма се определя от тежестта на дехидратацията.

Дизентерия на изтрития курс днес се среща доста често. Има дискомфорт, умерена болка в корема, кашави изпражнения 1-2 пъти на ден, предимно без примеси, хипертермия и интоксикация липсват (или са изключително незначителни). Дизентерия, продължаваща повече от три месеца, се счита за хронична. Понастоящем случаите на хронична дизентерия в развитите страни са редки. Рецидивиращият вариант представлява периодични епизоди от клиничната картина на остра дизентерия, осеяни с периоди на ремисия, когато пациентите се чувстват относително добре.

Продължителната хронична дизентерия води до развитие на тежки храносмилателни разстройства и органични промени в лигавицата на чревната стена. Симптомите на интоксикация при продължителна хронична дизентерия обикновено липсват, има постоянна ежедневна диария, изпражненията са кашави и могат да имат зеленикав оттенък. Хронични разстройстваусвояването води до загуба на тегло, хиповитаминоза и развитие на синдром на малабсорбция. Обикновено след това се наблюдава реконвалесцентна бактериална екскреция остра инфекция, субклиничен - се случва, когато страдате от дизентерия в изтрита форма.

Усложнения

Усложнения на сегашното ниво медицински грижиса изключително редки, главно в случай на тежка дизентерия на Григориев-Шига. Тази форма на инфекция може да бъде усложнена от инфекциозно-токсичен шок, чревна перфорация, перитонит. Освен това е вероятно развитието на чревна пареза.

Дизентерия с интензивна дългосрочна диария може да бъде усложнена от хемороиди, анална фисура и ректален пролапс. В много случаи дизентерията допринася за развитието на дисбиоза.

Диагностика

Бактериологичната диагностика е изключително специфична. Обикновено патогенът се изолира от изпражненията, а в случай на дизентерия на Григориев-Шига - от кръвта. Тъй като повишаването на титъра на специфичните антитела става доста бавно, серологичните диагностични методи (RNGA) имат ретроспективно значение. Все по-често лабораторната практика за диагностициране на дизентерия включва идентифициране на антигени на Shigella във фекалиите (обикновено се извършва с помощта на RCA, RLA, ELISA и RNGA с диагностикум на антитела), реакцията на свързване на комплемента и хемаглутинационния агрегат.

Като общи диагностични мерки се използват различни лабораторни техники за определяне на тежестта и степента на процеса, идентифициране метаболитни нарушения. Извършва се изследване на изпражненията за дисбактериоза и копрограма. Ендоскопско изследване(сигмоидоскопия) често може да предостави необходимата информация за диференциална диагнозав съмнителни случаи. За същата цел пациентите с дизентерия, в зависимост от клиничната форма, може да се нуждаят от консултация с гастроентеролог или проктолог.

Лечение на дизентерия

Леките форми на дизентерия се лекуват амбулаторно, стационарното лечение е показано за лица с тежка инфекция и усложнени форми. Пациентите също се хоспитализират по епидемиологични причини, в напреднала възраст, със съпътстващи хронични заболявания и деца през първата година от живота. Пациентите са предписани почивка на леглос треска и интоксикация, диетична храна(в острия период - диета № 4, когато диарията отшуми - таблица № 13).

Етиотропната терапия при остра дизентерия се състои в предписване на 5-7-дневен курс на антибактериални средства (флуорохинолони, тетрациклинови антибиотици, ампицилин, котримоксазол, цефалоспорини). При тежки и умерени форми се предписват антибиотици. Като се има предвид способността антибактериални лекарстваза влошаване на дисбактериозата, еубиотиците се използват в комбинация за курс от 3-4 седмици.

Ако е необходимо, се провежда детоксикационна терапия (в зависимост от тежестта на детоксикацията, лекарствата се предписват перорално или парентерално). Нарушенията на абсорбцията се коригират с помощта на ензимни препарати (панкреатин, липаза, амилаза, протеаза). Според показанията се предписват имуномодулатори, спазмолитици, адстрингенти и ентеросорбенти.

За ускоряване на регенеративните процеси и подобряване на състоянието на лигавицата по време на реконвалесценцията се препоръчват микроклизми с инфузия на евкалипт и лайка, масло от шипка и морски зърнастец, винилин. Хроничната дизентерия се лекува по същия начин като острата дизентерия, но антибиотичната терапия обикновено е по-малко ефективна. Препоръчва се предписване на терапевтични клизми, физиотерапевтично лечение, бактериални агентивъзстановяване нормална микрофлорачервата.

Прогноза и профилактика

Прогнозата е предимно благоприятна, с навременна комплексно лечениеПри острите форми на дизентерия хронифицирането на процеса е изключително рядко. В някои случаи след инфекцията могат да персистират остатъчни функционални нарушения на дебелото черво (постдизентериен колит).

Общите мерки за предотвратяване на дизентерия включват спазване на санитарните и хигиенните стандарти в ежедневието, в заведенията за производство на храни и обществено хранене, наблюдение на състоянието на водоизточниците и почистване на отпадъчни води (особено дезинфекция на отпадъчни води от лечебни заведения).

Пациентите с дизентерия се изписват от болницата не по-рано от три дни след клинично възстановяване с отрицателен единичен бактериологичен тест (материал за бактериологично изследване се събира не по-рано от 2 дни след края на лечението). Работниците в хранително-вкусовата промишленост и приравнените към тях лица подлежат на освобождаване след два пъти отрицателен резултатбактериологичен анализ.

ЛАБОРАТОРНА ДИАГНОСТИКА НА ДИЗЕНТЕРИЯ, АМЕБИЯ И БАЛАНТИДИАЗА

В съвременните условия, в отделни случаи или при дребноогнищни огнища на чревни заболявания, често протичащи с неясни симптоми, лабораторните методи на изследване придобиват важно практическо значение.

Изследване, проведено с диагностична цел, трябва да се извършва при стриктно спазване на установените препоръки и възможно най-рано.

Събирането на изпражнения за изследване се извършва в чисти съдове (нощни вази, нощни съдове), които не съдържат остатъци дезинфектанти, от лигавицата на ректума, материал за изследване се взема с тампони по време на сигмоидоскопия.

За бактериологично потвърждаване на диагнозата е по-добре да се вземат изпражнения от пациенти с дизентерия преди лечение с антибиотици и сулфонамиди и да се определи бактериалният носител - след лечение с тези лекарства.

Засяването върху петриеви панички трябва да се извърши веднага след вземане на материала.

На първо място се извършва макроскопско изследване на изпражненията, което може да открие: остатъци от храна - парчета месо, остатъци от мазнини, растителна хранаи патологични примеси - слуз с вискозна консистенция под формата на бучки (непрозрачни при дизентерия и прозрачни при амебиаза); непроменена кръв при дизентерия и язвени лезии на долната част на дебелото черво с друга етиология и променен цвят („малиново желе“) при амебиаза, балантидиаза; гной се открива при тежки продължителни форми на дизентерия.

Микроскопското изследване на изпражненията се използва за откриване на клетъчни елементи на кръвта, амеби, балантидии и техните кисти. Нативният препарат се приготвя по следния начин: бучка изпражнения се поставя върху предметно стъкло с примка и до него се капва изотоничен разтвор на натриев хлорид, разбърква се и се покрива с покривно стъкло. Разтворът на Лугол се използва за оцветяване на протозои.

За разграничаване на клетъчните елементи на кръвта, препаратите се третират с багрило Romanovsky-Giemsa или азур-еозин. При дизентерия в препарат, направен от слуз, се откриват много неутрофилни гранулоцити (над 90% от всички клетъчни елементи), единични еозинофилни гранулоцити (еозинофили) и различен брой еритроцити; при амебиаза има малко клетъчни елементи, чиято основна маса се състои от променени клетки с пикнотично ядро ​​и тесен ръб на протоплазмата. Откриват се еозинофилни гранулоцити и кристали на Charcot-Leyden.

Тъканните форми на амеба (Entamoeba histolytica) в неоцветен препарат са безцветни, подвижни (с помощта на псевдоподии), в удължено състояние достигат 50-60 микрона, често се намират в ендоплазмата с еритроцити и към периферията - ядро. Наличието на червени кръвни клетки в клетката прави възможно разграничаването на Entamoeba histolutica от непатогенните форми (E. hartmani, E. coli.).

Луминалната форма на амеба е по-малка по размер (до 20 микрона), неактивна и не съдържа червени кръвни клетки. Кистите са още по-малки по размер (10-12 микрона), кръгли по форма, неподвижни; На ранни стадииразвиващите се съдържат 2 ядра, а зрелите - 4. В препарати, оцветени с разтвор на Лугол, ядрата на амебите и техните цисти - светлокафяво(фиг. 6).

Балантидия(Balantidium coli) са големи реснички, понякога достигащи 200 микрона дължина и 50-70 микрона в диаметър, подвижни, поради наличието на реснички, и имат орални (перистомни) и анални (цитопиготни) отвори. В ендоплазмата се виждат големи (макронуклеози) и малки (микронуклеози) ядра, вакуоли и уловени еритроцити. Кистите на балантидиите са неподвижни, кръгли по форма, с диаметър 50-60 µm, имат двуверижна обвивка и съдържат макронуклеози и вакуоли вътре (фиг. 7).

Бактериологичното изследване на изпражненията за бактериална дизентерия е най-добре да се направи скоро след дефекация, като материал (слуз и гной) трябва да се вземе от последните порции изпражнения. Тестовият материал се инокулира с бримка върху петриеви панички с елективна среда (Ploskireva, Ploskireva + хлорамфеникол, Levin) и се поставя в термостат за 18-24 часа при температура +37 ° C. На следващия ден подозрителни (безцветни) колониите се субкултивират върху средата на Ressel и се поставят епруветки в термостат за един ден при температура от +370 С. На третия ден, след получаване на чиста култура, се приготвят намазки за микроскопия и изследване на подвижността (Shigella е неподвижна). Провежда се реакция на аглутинация върху стъкло със специфични за типа серуми, първо индикативна със серуми срещу преобладаващите в района типове, след което се разширява и се засява на „пъстър“ ред, за да се определят биохимичните свойства на изолираната култура.

Причинителите на дизентерия не ферментират лактоза и захароза (с изключение на Sonne), разлагат глюкозата (до киселина) и не образуват сероводород.

Окончателният отговор по време на бактериологичното изследване се дава на 5-ия ден. Понякога се изолират атипични щамове на патогена, култури, които са загубили аглутинност и с други характеристики. В такива случаи изследванията продължават за по-дълги периоди.

Съществуват и ускорени бактериологични методи - презасяване на съмнителни колонии от петриеви панички 18-20 часа от началото на изследването в 2 епруветки със среда на Ressel (наклонен агар с 1% лактоза и 0,1% глюкоза - в една и 1% захароза и 0,1% манитол - в друга). След 4 часа вече може да се появи растеж на колонии, от които се приготвят петна, оцветяват се по Грам, изследва се подвижността и се извършва приблизителна реакция на аглутинация със серуми срещу най-често срещаните патогени в района. Така още на втория ден може да се даде предварителен отговор. Окончателният отговор се дава на третия ден след отчитане на резултатите от сеитбата на „пъстрия“ ред и подробна реакция на аглутинация.

Степента на инокулация на патогени на дизентерия не винаги е една и съща; зависи от много фактори - метода на събиране на материал за изследване, качеството на средата и други причини, една от които е броят на патогените на единица обем изпражнения. Доказано е, че патогените на дизентерия се засяват в случаите, когато един грам изпражнения съдържа най-малко стотици милиони микробни тела. IN в редки случаиВъзможно е да се изолира причинителя на дизентерия от кръвта.

При наличие на флуоресцентен микроскоп и специфични серуми с флуорохроми, на студентите се показва методът на директна флуоресценция на антитела.

Възможно е също така да се извърши реакция на аглутинация с кръвен серум на пациента и диагностични тестове, но титрите на антителата при пациенти с дизентерия са ниски и в допълнение парааглутинационните явления са чести, което затруднява получаването надеждни резултати. По-чувствителна е реакцията на индиректна хемаглутинация (IRHA) със стандарт еритроцитни диагностикуми. Допълнителен метод на изследване е интрадермален тест за алергияс дизентерия според D. A. Tsuverkalov, което се взема предвид след 24 часа според размера на получената папула.

МАТЕРИАЛ ЗА ИЗСЛЕДВАНЕ: изпражнения, ректални тампони, изстъргвания от лигавицата.

ДИАГНОСТИЧНИ МЕТОДИ:

(диаграма 13.1.2). Изпражненията на пациента се инокулират върху диференциална диагностична среда (Endo, Ploskireva agar и др.). Ако в изследваните изпражнения има гнойни или лигавично-кървави бучки, те се избират с бримка, измиват се в изотоничен разтвор на натриев хлорид и се нанасят върху повърхността на хранителната среда, след което се смилат със шпатула. На 2-рия ден лактозо-отрицателните (прозрачни, безцветни) колонии се субкултивират върху среда на Ressel или върху къс "пъстър ред" с лактоза и глюкоза.

Среда на Ressel: хранителен агар, 1 % разтвор на лактоза, 0,1% разтвор на глюкоза и индикатор бромотимолово синьо. Средата се приготвя по такъв начин, че на дъното е под формата на колона и горна частимаше скосена повърхност. Изследваната култура се засява чрез инжектиране в колона и върху повърхността на средата. Когато въглехидратите ферментират, цветът на средата се променя (жълт цвят); Прекъсването на колоните показва образуване на газ. По време на ферментацията на лактоза се наблюдава промяна на цвета в целия обем на средата, по време на ферментацията на глюкозата се наблюдава само промяна на цвета, тъй като съдържанието му в средата е 10 пъти по-малко от лактозата. Вместо среда на Ressel можете да използвате среда с три захари (тя съдържа глюкоза, лактоза, захароза, урея, някои соли и индикатор за фенолово червено) или друга среда за диференциална диагностика, която ви позволява да разграничите бактериите по способността им да ферментират лактоза и глюкоза.

Останалата част от колониите се използва за извършване на приблизителна реакция на аглутинация върху стъкло със смес от серуми от дизентерия и смес от серуми срещу салмонела (за изключване на коремен тиф или салмонелоза). Окончателното заключение се дава на 4-ия ден въз основа на резултатите от ензимните тестове (Таблица 13.1.2) и реакцията на аглутинация. Изолираната чиста култура се използва за определяне на чувствителността на патогена Да сеантимикробни лекарства.

Биохимични и молекулярно-биологични изследвания. Тестовият материал, получен от източника на инфекция, се използва за откриване на ДНК на патогена чрез PCR. Ако се открият съответните молекули, може да се направи предварителна диагноза.

Таблица 13.1.2. Биохимични характеристики на бактериите от рода Шигела

S.dysenteriae _____ V -

S.flexneri- - + - - в -

S.boydii- - + - в в -

S. sonnei- [+] + [+] в - +

Легенда: (+) -положителна реакция; (^ - отрицателна реакция; [+] - късна реакция; c - променлива реакция.

Серодиагностика. Използва се за ретроспективно обосноваване на диагнозата дизентерия в изтрити и хронични форми. Извършва се подробна реакция на аглутинация по типа на Widal и RIGA реакция с еритроцитни диагностикуми Flexner и Sonne. За диагностичен титър за дизентерия, причинена от шигелите на Flexner, се приема разреждане 1:200, а за шигелите на Sonne - 1:100.

Микробиологична диагностика на хеликобактериоза

МАТЕРИАЛ ЗА ИЗСЛЕДВАНЕ: биопсия от засегнатата област на лигавицата на стомаха или дванадесетопръстника.

ДИАГНОСТИЧНИ МЕТОДИ:

Бактериологични изследвания. Откриване на патогена в хистологични препарати, оцветени по метода на Романовски-Гимза, Грам, хематоксилин-еозин и др., Както и с помощта на фазово-контрастна и електронна микроскопия. Helicobacter pylori- малки грам-отрицателни извити, S-образни или спираловидни (2-3 къдрици) бактерии. H. pyloriимат 4-6 флагела, разположени на един от полюсите - лофотрихи.

Бактериологични изследвания. Засяване върху богати хранителни среди ("шоколадов агар" и др.), Съдържащи хемолизирана кръв, инфузия на мозъчно сърце, екстракт от дрожди и антимикробни лекарства (ванкомицин, налидиксова киселина и амфотерицин В) за потискане на растежа на съпътстващата микрофлора. Инкубацията на културите се извършва при 37 °C в микроаерофилни условия (в атмосфера, съдържаща не повече от 5% 0 2 и 10% CO 2) при висока влажност в продължение на 7 дни. Растежът на колониите обикновено се наблюдава на 3-4-ия ден. Идентифицирането на чиста култура се извършва въз основа на морфология, подвижност, култура, биохимия

ични признаци, чувствителност към антимикробни лекарства.

Типизирането на патогенни щамове за епидемиологичен анализ се извършва с помощта на ДНК рестрикционен анализ.

Експресни диагностични методи: имунохимични, биохимични и молекулярно-биологични изследвания: биохимични изследвания. Откриване на бактериалния ензим уреаза.

♦ Определяне на уреазната активност в биопсична проба.Биопсия
поставени в бульон, съдържащ урея и индикатор.
В положителни случаи настъпва промяна на цвета
индикатор в резултат на алкализиране на средата по време на
лизиране на урея за образуване на амоняк.

♦ Дихателен тест за уреаза.След перорално приложение
урея, белязана с радиоактивен изотоп 14 C, оп
определяне на наличието на маркиран въглероден диоксид 14 C0 2
в издишвания въздух. Появата на 14 C0 2 показва
за уреазната активност (резултат от хидролиза на белязани mo
чевина), което е косвен знакнастояще
Чрез в стомаха или дванадесетопръстника H. pylori.
Тестът се използва предимно за предварително
диагностика и проследяване на резултатите от лечението.

Молекулярно-биологични изследвания. Тестовият материал, получен от източника на инфекция, се използва за откриване на ДНК на патогена чрез PCR. Ако се открият съответните молекули, може да се направи предварителна диагноза.

Серодиагностика. Откриването на антитела към повърхностни антигенипатоген и урея-зе. Използвани методи: ELISA, RIA и RIGA.

Микробиологична диагностика на кампилобактериоза

МАТЕРИАЛ ЗА ИЗСЛЕДВАНЕ: изпражнения, ректални намазки, при генерализирана форма на инфекция - кръв, цереброспинална течност. Ако е необходимо съхранение, материалът се поставя в транспортна среда (буфериран физиологичен разтвор с добавяне на неутрален въглерод и метиленово синьо или тиогликолатен бульон) при температура 4 °C, което позволява на микробите да останат жизнеспособни до 4 дни .

ДИАГНОСТИЧНИ МЕТОДИ:

Бактериологична диагностика. Инокулацията се извършва върху специална плътна среда, обогатена с аминокиселини с добавяне на хемолизирана кръв или неутрален въглерод (за отстраняване на токсични метаболити на кислорода) и 3-5 антибиотика за потискане на растежа на съпътстващата микрофлора (обикновено ванкомицин, полимиксин, триметоприм,

Амфотерицин В и др.). Инкубацията на културите се извършва при 42 ° С в микроаерофилни условия - в атмосфера, съдържаща не повече от 5 % 0 2 и 10% C0 2. Растежът на колониите се наблюдава след 48-72 ч. Идентифицирането на чиста култура се извършва въз основа на морфологията: малки грам-отрицателни S-образни или спирално (2-3 къдрици) извити микроорганизми, моно- или амфитрични; Те използват тъмнополеви и фазово-контрастни изследователски методи за идентифициране на характерна подвижност - тирбушонови движения, културни, биохимични признаци, чувствителност към антимикробни лекарства. Разработени са също така биохимични (хемоидентификация) и молекулярно-биологични методи за идентификация (вж. Глава 3).

Експресни диагностични методи: имунохимични, биохимични и молекулярно-биологични изследвания. Биохимични и молекулярно-биологични изследвания. Тестовият материал, получен от източника на инфекция, се използва за откриване на ДНК на патогена чрез PCR. Ако се открият съответните молекули, може да се направи предварителна диагноза.

Серодиагностика. Използват се главно за ретроспективна диагностика - антителата се определят в сдвоени серуми в реакциите на RSK, RIGA и др.

Диагностични, профилактични и терапевтични лекарства

Аглутиниращи OB-серуми срещу патогенни Escherichia coli: OB-coli-серум 026:B6, OB-coli-серум 0111: B 4, OB-coli-серум 055:B5 и др. Получени чрез имунизиране на зайци със суспензия от Escherichia на съответния серовар и се използва в реакции на аглутинация за идентифициране на патогенни Escherichia.

Адсорбиран аглутиниращи серумиза идентифициране на Shigella. Има групови и моновалентни серуми. Получава се чрез имунизиране на зайци със специфични видове и серовари S.dysenteriae, S.flexnery, S.sonneiИ С.бойдипоследвано от адсорбция на междугрупови и други излишни антитела.

Поливалентен дизентериен бактериофаг. Съдържа фаги, които лизират Shigella Flexner и Sonne. Предлага се под формата на киселинноустойчиви таблетки. Използвани за предотвратяване на извънредни ситуациии лечение.

Ваксина срещу дизентерия, алкохол, суха. Съдържа Shigella Flexner и Sonne. Използва се за лечение на хронични форми на дизентерия.

Еубиотични препарати - колибактерин, бифидумбактерин, бификол, лактобактерин. Използва се за терапевтични и профилактични цели (вижте тема 13.2).

Антибиотици: полусинтетични пеницилини, цефалоспорини 2-4 поколение, хлорамфеникол, тетрациклини, флуорохинолини, сулфонамиди, полимиксин и др.

Тема 13.2. ПРИЧИНИТЕЛИ ЗА ТИФ, ПАРАТИФ И ЙЕРСИНИОЗА. ДИСБАКТЕРИОЗА

Съвременна класификациябактерии от рода Salmonella. Род

Салмонелавключва 2 вида: S. enterica(2307 серовара) и С.бон-гори(17 серовара). Преглед S. entericaвключва 5 подвида: ентерика(аз), салами(II), arizonae(Илия), диарисони(Illb) хутени(IV), индика(V), които са изолирани на базата на молекулярно-генетични характеристики (ДНК хибридизационен анализ) и фенотипно се различават по биохимични свойства. В рамките на подвида Salmonella се разделя на серовари според О- и N-антигениспоред класификацията на Кауфман-Уайт. Трябва да се помни, че представители на различни подвидове могат да имат общи или идентични антигени. По-голямата част от сероварите (1367) принадлежат към подвида ентерика.Според съществуващата по-рано класификация Salmonella - представители на различни серовари - се считат за независими видове и имат свои собствени видове. Понастоящем стари имена на видове се използват за обозначаване на биовари (серовари), например S. entericaподвид ентерикасеровар тифимурийотговаря S. typhimurium,серовар коремен тиф- S.typhi,серовар паратифи А - S.paratyphi Lи т.н. Естествен резервоар на бактерии S. entericaподвид ентерикаса топлокръвни животни, за останалите - студенокръвни животни и заобикаляща среда. Причинителите на човешките заболявания принадлежат към подвида ентерика.

От епидемиологична гледна точка салмонелите, които причиняват заболявания при хората, се класифицират в три основни групи. Първата група включва 3 биовара: тиф, паратифиА и С, които са причинители на тежки антропонози (заразяват само хората и се предават от човек на човек директно или индиректно - чрез храна, вода). Втората група включва серовари, които са се адаптирали към определен животински вид. Някои от тези серовари са патогенни за хората (дъблин, gallinarum, schottmulleriи т.н.). Третата група включва повечето серовари, които нямат специфични гостоприемници и са способни да заразяват както хора, така и животни. Според клиничната класификация Salmonella се разделя на патогени на коремен тиф (биовар тиф)и паратифни трески (биовари паратифи A, C и schottmulleri)и патогени на салмонелоза, включително всички други биовари на салмонела, патогенни за хората. Повечето патогени на салмонелоза принадлежат към третата група според епидемиологичната класификация.

план

програма

1. Биологични свойства на причинителите на коремен тиф, паратиф и йерсиниоза. Тяхната патогенност, екология, характеристики на инфекцията и епидемиология на причинените заболявания. Дисбактериоза.

2. Лабораторна диагностика.

3. Диагностични, профилактични и терапевтични лекарства.

Демонстрация

1. Намазки от чисти култури на патогени на чревни инфекции: Salmonella entericaбиовари тифи, паратифи А, тифимуриум, Proteus vulgaris.Оцветяване по Грам.

2. Диагностични и лечебно-профилактични средства.

Задача за студенти

1. Микроскопирайте и вземете петна от чисти култури на патогени чревни инфекции.

2. Лабораторна диагностика на чревни инфекции.

2.1. Диагностика на коремен тиф и паратиф.
А. Бактериологична диагностика:

2) вземете предвид резултатите от първоначалното инокулиране на тестовия материал върху среда Rappoport;

3) вземете предвид резултатите от повторното засяване на бактерии от среда Rappoport в среда Endo. Опишете и скицирайте колониите, отглеждани върху среда Endo, и обосновете избора на подозрителни колонии за по-нататъшно изследване;

4) вземете предвид резултатите от повторното засяване на подозрителни колонии от среда Endo в среда Ressel;

5) вземат предвид резултатите от идентифицирането на изолираната чиста култура въз основа на биохимични свойства;

6) направете заключение и очертайте план за по-нататъшни изследвания.

Б. Серодиагностика. Анализирайте резултатите от реакцията на Widal.

2.2. Бактериологична диагностика на салмонелоза:

1) изберете материал за изследване;

2) вземете предвид резултатите от първоначалното инокулиране на тестовия материал върху бисмут-сулфитен агар. Опишете и скицирайте колониите и обосновете избора на подозрителни колонии за по-нататъшно изследване;

3) вземете предвид резултатите от субкултурата на подозрителни колонии върху средата на Ressel;

4) вземат предвид резултатите от идентифицирането на изолираната чиста култура въз основа на биохимични свойства;

5) направете заключение и очертайте план за по-нататъшни изследвания.

3. Запознайте се с диагностични, терапевтични и профилактични лекарства.

A Насоки

Микробиологична диагностика на коремен тиф и паратиф

МАТЕРИАЛ ЗА ИЗСЛЕДВАНЕ: въз основа на характеристиките на патогенезата на коремния тиф, през 1-вата седмица на заболяването, по време на периода на бактериемия, патогените се изолират от кръвта (получаване на кръвна култура), от 2-рата седмица на заболяването - от изпражнения (получаване на копрокултура), урина или жлъчка.

ДИАГНОСТИЧНИ МЕТОДИ:

Бактериологични изследвания(диаграма 13.2.1).

Получаване на кръвна култура. На първия ден се вземат 5-10 ml кръв от кубиталната вена на пациента и се инокулират в колба с 50-100 ml селективна среда Rappoport, съдържаща жлъчен бульон (за потискане на растежа на други бактерии), глюкоза, индикатор Andrede и поплавък за откриване на газ. Определените съотношения на кръвта и околната среда са необходими за потискане на бактерицидния ефект на кръвните протеини. Посевите се инкубират при 37 °C за 18-20 часа.На 2-ия ден при растеж на салмонела се наблюдава помътняване и обезцветяване на средата.При растеж на паратифни бактерии (биовар paratyphi A, Si schottmuelleri)Заедно с тези промени в поплавъка се появяват газови мехурчета. За да се ускори реакцията, се правят петна и препарати от висящи капки от средата на Rappoport. При наличие на чиста култура от грам-отрицателни подвижни пръчици и промяна в цвета на средата (или наличие на газ) се дава първият предварителен отговор. След това културата от средата на Rappoport се субкултивира в епруветка със среда Ressel, като се приема, че чиста култура е изолирана от кръвта и можете веднага да започнете да я идентифицирате. В същото време, започвайки от средата на Rappoport, културите се инокулират върху среда Endo, за да се получат изолирани колонии, за да се провери чистотата на изолираната култура.

На 3-ия ден се отбелязва ферментация на глюкоза върху средата на Ressel и се извършва приблизителна реакция на аглутинация върху стъкло. Въз основа на получените данни се дава втори предварителен отговор. За по-нататъшно изследване се избират няколко безцветни колонии от средата Endo и се субкултивират в средата на Ressel или наклонения хранителен агар (за контрол на получените резултати). Чистата култура се субкултивира върху среда с "пъстри" серии и се определя серотип в реакция на аглутинация на стъкло със смес от групови серуми и след това с

Тифи- K K - K + -

Паратифи А- KG KG - KG - -
Шотмюлери - KG KG - KG + +

Легенда: K - образуване на киселина; KG - образуване на киселина и газ; (+) - откриване на знак; (-) - липса на знак.

Биохимичните характеристики (разширени "пъстри" серии) позволяват да се разграничи Salmonella от подобни стях ентеробактерии: Citrobacter, Hafnia(Таблица 13.2.2).

Таблица 13.2.2. Диференциране на Salmonella и други ентеробактерии по биохимични характеристики

Салмонела± K(-) K K K - - -

Citrobacter- K(-) K K K K(±) K(±) K
Хафния + -- K K K (+) - K

Легенда: (+) - положителна реакция; (-) - отрицателна реакция; ± - променлива реакция; К - образуване на киселина; K(-) - образуване на киселина (рядко); K(±) - образуване на киселина (променлива).

За определяне на чувствителността към антимикробни лекарства се използва изолирана чиста бактериална култура.

Фаготипизиране. С помощта на набор от стандартни Ви-фагите определят до 78 вида фаги S. entericaбиовар коремен тиф.В този случай необходимо условие е наличието на FZ антиген в културата. Култури S. entericaбиовар паратифи B (schottmuelleri)диференциран На 11 фаготипа и подтипа.

Получаване на копрокултура. Изпражненията се инокулират върху една от диференциалните диагностични среди (Endo или Levin) или селективно обогатени среди (Muller, селен)

Товая или бисмутов сулфитен агар). За инокулиране, бримка от изпражнения се поставя в епруветка с изотоничен разтвор на натриев хлорид и се приготвя суспензия. След утаяване на големи бучки, суспензията се нанася в примка върху повърхността на агарната среда - върху едната половина на блюдото. Материалът се смила добре с шпатула, едната и след това другата половина на чашата, за да се получат изолирани колонии. Инокулациите се инкубират при 37 ° C в продължение на 18-20 часа.На 2-ия ден се изследва естеството на колониите, пораснали върху блюдата (фиг. 13.2.1; вмъкване), 2-3 безцветни колонии се субкултивират (от Endo или среда на Levin) или черни колонии (бисмутов сулфитен агар) върху среда на Ressel и в епруветки с наклонени хранителни агарни наклони. Ако няма подозрителни колонии върху плочите, плочите се инокулират от средата на Мюлер или селенитната среда върху плочи със среда Endo, за да се получат изолирани колонии. За да се ускори реакцията, се извършва приблизителна реакция на аглутинация върху стъкло с материал, взет от безцветна колония. След това продължете по същия начин, както при идентифициране на хемокултура.

Експресни диагностични методи: имунохимични, биохимични и молекулярно-биологични изследвания.Молекулярно-биологични изследвания. Тестовият материал, получен от източника на инфекция, се използва за откриване на ДНК на патогена чрез PCR. Ако се открият съответните молекули, може да се направи предварителна диагноза.

Серодиагностика. INВ лабораторната практика широко се използва подробна реакция на аглутинация на Widal, основана на откриването в човешки кръвен серум на антитела - аглутинини, които се появяват в края на 1-вата - началото на 2-рата седмица на заболяването. Реакцията се извършва едновременно с четири антигена: О- и Н-тифоидни, А- и В-паратифни диагностикуми. Монодиагностиките на коремен тиф се използват за установяване на стадия на заболяването, тъй като съдържанието на О- и Н-антитела в различните му периоди не е еднакво. О-антителата се появяват през първата седмица, натрупват се в разгара на заболяването и изчезват до момента на възстановяване. H-антителата се появяват в разгара на заболяването, натрупват се към края на заболяването и остават дълго време при преболедувалите. При хора, ваксинирани срещу коремен тиф и паратиф, също се наблюдава положителна реакция на Видал и в доста висок титър, така че "инфекциозният Видал" може да се разграничи от "ваксинацията" само чрез повишаване на титъра на аглутинините при пациенти по време на протичане на заболяването. Реакцията на Widal се провежда в четири реда епруветки, по 7 епруветки във всеки ред, от които 5 опитни и 2 контролни. За контрол на всеки диагностикум към епруветките се добавя 1 ml изотоничен разтвор на натриев хлорид, към който се добавят 2 капки от диагностикума. В контролна тръба с

1 ml серум (без диагностикум) не трябва да съдържа люспи. При спонтанна аглутинация реакцията не се взема предвид. Диагностичният титър на реакцията на Widal е 1:200. За серологично изследване на реконвалесценти и идентифициране на бактериални носители широко се използва реакцията на непряка I-хемаглутинация, с помощта на която се определя наличието на антитела срещу К антигена в човешки кръвен серум. Използваният антиген е еритроцитен P?-diagnosticum, който представлява суспензия от човешки еритроцити от група 1(0), обработени с формалдехид и сенсибилизирани с Fz"-антиген S. entericaбиовар коремен тиф.Пригответе разреждания на тестовия серум от 1:10 до 1:1280. Ако реакцията е положителна, червените кръвни клетки покриват дъното на епруветката под формата на диск с назъбени ръбове и супернатантата остава чиста. В случай на отрицателна реакция, както при контролата, червените кръвни клетки се утаяват на дъното на епруветката и се изгледдиск с гладки ръбове („бутони“). Титърът има диагностична стойност пасивна D-хемаглутинация, като се започне от 1:40 и нагоре. Всички лица, чийто кръвен серум дава положителен резултат в RNGA с еритроцитен F/f диагностикум, се считат за предполагаеми носители S. entericaбиовар коремен тифи се подлага на повторно бактериологично изследване.

Свързана информация.

Лабораторна диагностика на бактериална дизентерия

Дизентерията е антропонозна инфекциозна болест, причинена от бактерии от рода шигела, характеризиращ се с язвени лезии на дебелото черво и обща интоксикация на тялото. Класификацията на патогените на дизентерия (Shigella) е представена в таблица 12, микробиологичните диагностични методи в схема 13.

Таблица 13. Класификация на Shigella

Shigella видове Шигела серовари Shigella dysenteriae 1-12 Shigella flexneri 1a, 1b, 2a, 2b, 3a, 3b, 4a, 4b, 5,6, променлива X, променлива Y Shigella boydii 1-18 Shigella sonnei -

Схема 12. Микробиологична диагностика на дизентерия

Експресни методи (индикация за патогенна Е. coli или нейни продукти в тестовия материал) ДНК сонди или PCR за откриване на специфичен фрагмент от ДНК на Shigella, RIF

Микроскопски методза дизентерия не се използва поради морфологичното сходство на Shigella с други ентеробактерии.

Бактериологичен методе основният метод за лабораторна диагностика на дизентерия . Изследваният материал се инокулира върху среда Ploskirev и Endo в петриеви панички, както и върху среда за натрупване на селенит, от която след 16-18 часа се извършва повторно засяване върху определената плътна хранителна среда. Културите се отглеждат в термостат при 37 0 С за 18 - 24 часа.

На втория ден се изследва естеството на колониите. Безцветни лактозо-отрицателни гладки колонии от Shigella се субкултивират върху една от поливъглехидратните среди (Olkenitsky, Ressel, Kligler), за да се натрупа чиста култура. На 3-тия ден се взема предвид моделът на растеж върху поливъглехидратна среда и материалът също се субкултивира върху диференциална среда (Gissa et al.) за биохимична идентификация на изолираната култура. Антигенната структура на изолираната култура се определя с помощта на OPA, за да се идентифицира до видове и нива на серовар. На 4-ия ден се вземат предвид резултатите от биохимичната активност (Таблица 14).

Таблица 14. Биохимични свойства на Shigella

Shigella видове Ферментация индол глюкоза лактоза манитол дулцит ксилози орнитин S. dysenteriae Да се - - - - - - S. flexneri Да се - Да се - - - - S. boydii Да се - Да се - ± - - S. sonnei Да се ± Да се k + ± Да се +

Обозначения: „k” – ферментация на субстрата с образуване на киселина, „+” – наличие на характеристика, „-“ – липса на характеристика, „±” – нестабилна характеристика.

Shigella, за разлика от Escherichia, са неподвижни микроорганизми, те не ферментират лактозата, разлагат глюкозата без образуване на газ и не декарбоксилират лизин. За серотипиране първо RA се поставя върху стъкло със смес от серуми срещу видовете и вариантите на Shigella, които са разпространени в района, а след това RA се поставя върху стъкло със серуми на монорецепторни видове. Определя се и чувствителността на изолираната култура към поливалентен дизентериен бактериофаг и антибиотици. За епидемиологични цели се определят фаговар и колицинвар на изолирани шигели. Едно от свойствата на Shigella е способността им да причиняват кератит при морски свинчета (кератоконюнктивален тест)

Серологичен метод.За определяне на антитела в кръвта на пациенти с дизентерия (обикновено хронична форма) се използва RNGA с еритроцитни шигелни диагностикуми. Диагностични титри: за Shigella на Flexner при възрастни - 1: 400, при деца под 3 години - 1: 100, при деца над 3 години - 1: 200, за други Shigella - 1: 200. Реакцията обикновено се повтаря с кръвен серум, взет най-малко 7 дни по-късно; диагностична стойностима увеличение на титъра на антителата четири или повече пъти.

Експресни методиза дизентерия - директен и индиректен RIF, реакция на коаглутинация, ELISA, RNGA с антитяло еритроцитна диагностика за бързо откриване на Shigella в тестовия материал (обикновено във фекалиите), както и PCR.