Фармакокинетични взаимодействия и общи концепции за бионаличност и лекарствена еквивалентност. Бионаличност и биоеквивалентност на лекарства и методи за тяхната оценка

За да се осигури терапевтичен ефект, лекарственото вещество трябва да бъде доставено до онези органи или тъкани, в които се осъществява специфичното му действие (в биофазата). Когато се прилага интраваскуларно, лекарството незабавно и напълно навлиза в кръвния поток. При други начини на приложение (перорално, интрамускулно, подкожно и др.), преди да попадне в кръвния поток, лекарството трябва да премине през серия от биологични мембраниклетки (стомашна лигавица, чернодробни клетки, мускули и др.) и едва тогава част от него ще попадне в системния кръвоток. Ефектът на лекарството до голяма степен зависи от това каква част от приложената доза от лекарството навлиза в системното кръвообращение. Този показател характеризира бионаличността на продукта (F). Така по същество бионаличността на лекарството отразява концентрацията му в рецепторите, тоест в кръвта и тъканите на тялото след абсорбция. Естествено, бионаличността на едно и също лекарство ще бъде различна за всеки пациент. Очевидно е, че когато лекарството се прилага интравенозно, неговата бионаличност е приблизително 100%, но при други начини на приложение бионаличността почти никога не достига 100%.

Разграничете АБСОЛЮТНА И ОТНОСИТЕЛНА БИОНАЛИЧНОСТ. Абсолютната бионаличност е съотношението на лекарството, абсорбирано по време на екстраваскуларно приложение спрямо количеството му след интравенозно приложение.

Важен показател е ОТНОСИТЕЛНАТА БИОНАЛИЧНОСТ, която определя относителната степен на усвояване лекарствено веществоот тестваното лекарство и от лекарствата за сравнение. С други думи, относителната бионаличност се определя за различни серии от лекарства, за лекарства при промяна

изследвания в технологията на производство, за лекарства, произведени от различни производители, за различни лекарствени форми. За определяне на относителната бионаличност могат да се използват данни за нивото на лекарството в кръвта или екскрецията му в урината след еднократно или многократно приложение. Този термин е важен, когато се сравняват 2 лекарства едно с друго.

Сравнителната бионаличност на едни и същи лекарства, произведени от различни компании (пример: кокарбоксиназа с полски произход и произведена в Днепропетровск) се определя чрез сравняване на химична, биологична и терапевтична еквивалентност.

ХИМИЧНА ЕКВИВАЛЕНТНОСТ- това е съвпадение в лекарствата не само на химичната формула на лекарството, но и съвпадението на изомерията, пространствената конфигурация на атомите в молекулата на лекарственото вещество.

БИОЛОГИЧНА ЕКВИВАЛЕНТНОСТозначава същата, еднаква концентрация на активното вещество в кръвта при приемане на лекарството от различни компании.

накрая ТЕРАПЕВТИЧНА ЕКВИВАЛЕНТНОСТпредполага същия, еквивалентен терапевтичен ефект.

Ако изброените 3 характеристики са еднакви, се казва, че лекарствата имат еднаква бионаличност (бионаличност). Сега има много примери за подобни лекарства, които не са биологично еквивалентни поради разлики в бионаличността. Практикуващият лекар трябва да помни това, особено когато прехвърля пациент от едно лекарство към подобно лекарство от друга компания.

Разбира се, само новата наука може да отговори на всички тези въпроси – а именно КЛИНИЧНАТА ФАРМАКОЛОГИЯ. Това е самостоятелна наука със собствен предмет и цели на изследване. Защо се обособи като самостоятелен предмет? На първо място, защото, както се оказа, не всичко може да бъде изследвано в експерименти с животни. Например умствени процеси, които са силно характерни само за хората.

Бързото развитие на фармацевтичната индустрия доведе до създаването на огромен брой лекарства. Появи се лавина от лекарства, създавайки своеобразна лечебна джунгла. Сегашната ситуация много затруднява избора на правилното лекарство, дори и в една група лекарства, и не позволява на лекаря да се съсредоточи върху оптималното лекарство за конкретен пациент. Клиничната фармакология помага да се отговори на всички тези въпроси.

Пример е възможността за избор на лекарство за колагеноза (заболявания на съединителната тъкан, ревматоиден артрит, ревматизъм, системен лупус еритематозус и др.). От една страна, има ацетилсалицилова киселина (аспирин), но в същото време има и други съвременни ненаркотични аналгетици, които имат редица предимства в сравнение с аспирина: напроксен, пироксикам и др.

Какво е по-добре, кое лекарство ще бъде по-подходящо за този пациент, кое дава най-изразен терапевтичен ефект? Клиничната фармакология помага да се отговори на тези въпроси.

Основните задачи на клиничния фармаколог са:

1) Избор на лекарства за лечение на конкретен пациент.

2) Определяне на най-подходящите лекарствени форми за него и начина на тяхното приложение.

3) Избор на начин на приложение на лекарството.

4) Проследяване на ефекта на лекарството.

За тази цел са инсталирани сензори, които дават постоянна картина на концентрацията на лекарството в кръвта на монитора. Изследват се всички други аспекти на фармакокинетиката.

5) Проучване на нежелани реакции и странични ефекти от лекарства, тяхното отстраняване, както и изследване на последствията от лекарствени взаимодействия при даден пациент.

6) Трансфер на натрупаните знания чрез обучение.

7) Организация на лабораторни и информационни услуги, както и съвети относно планирането на изследвания (СЗО, 1971 г.).

ФАРМАКОДИНАМИКА(PD) е клон на фармакологията, който изучава

1) механизми на действие (т.е. същността на процесите на взаимодействие с тъканни, клетъчни или субклетъчни рецептори - специфични или неспецифични)1.

2) фармакологични ефекти (т.е. съдържанието и промените в ефекта на лекарството в зависимост от възрастта, пола на пациента, естеството и хода на заболяването, съпътстващата патология), както и 3) локализирането на действието на лекарствата. Накратко, PD може да се определи като клон на фармакологията, който изучава ефекта на лекарствата върху тялото.

Обикновено механизмът на действие на лекарството се изучава в експерименти с животни, тъй като те почти винаги са еднакви при животни и хора. Познаването на механизма на действие на лекарството позволява на лекаря интелигентно да избере необходимото лекарство за лечение.

Има много механизми на действие на лекарствата, но всички те могат грубо да се разделят на 2 групи.

Първата група механизми се свързва с онези случаи, когато лекарствата действат върху специфични рецептори - тоест това са РЕЦЕПТОРНИ МЕХАНИЗМИ.

Втората група механизми е свързана с лекарства, които поради своите физикохимични свойства не действат чрез рецептори. Тук, на първо място, можем да посочим ефекта на лекарствата върху специфични ензими, техния физикохимичен ефект върху клетъчните мембрани и директното химично взаимодействие с клетъчните вещества.

Пример за нерецепторни механизми е

случаят с анестезия, да речем с флуоротан. Той е отличен разтворител на мазнини, така че действа предимно върху мембраните на нервните клетки, причинявайки фармакологичен ефект - анестезия.

Нека да разгледаме основните, най-често срещаните рецептори и механизми на действие на лекарствата.

Рецепторите във фармакологично отношение са функционални биохимични макромолекулни мембранни структури, които са избирателно чувствителни към действието на определени химични съединения, а в нашия случай и към действието на лекарства. Изследванията през последните години показват, че фармакологичните рецептори са протеини или ензими (G-протеините са единична пептидна верига от 7 домена) - това е фундаменталната им разлика от морфологичните рецептори.

Селективната чувствителност на лекарство към рецептор означава факта, че лекарственото вещество може, първо, да се свърже с рецептора, тоест има афинитет или афинитет към него. С други думи, афинитет или афинитет означава способността на лекарственото вещество да се свързва с рецептор.

Афинитетът или афинитетът отразява кинетичните константи, които свързват лекарството, рецептора и реакцията на молекулярно ниво. Взаимодействието на лекарствата с рецептора води до редица биохимични и физиологични промени в организма, които се изразяват в един или друг ефект.

Втората характеристика на лекарственото вещество е способността му да предизвиква фармакологичен отговор, ефект след взаимодействие с рецептора. Тази способност се нарича присъща активност или сила на лекарството. До известна степен биологичният отговор се регулира чрез промяна на броя на рецепторите и тяхната чувствителност.

В процеса на еволюция са се образували рецептори, чувствителни към различни ендогенни регулатори. Според рецепторната теория механизмът на действие на лекарствата е да променят скоростта на функциониране на специфични системи на тялото, когато естествените медиатори или екзогенни вещества действат върху рецепторите.

Лекарства, чието действие е свързано с директно стимулиране или повишаване на функционалността (способностите) на рецепторите, се наричат ​​АГОНИСТИ, а веществата, които пречат на действието на специфични агонисти, се наричат ​​АНТАГОНИСТИ. С други думи, ако едно лекарствено вещество има и двете характеристики (т.е. както афинитет, така и присъща активност), тогава то е агонист. Следователно агонистът е вещество с висок афинитет към рецептора и висока присъща активност. Ако дадено вещество има само способността да се свързва с рецептора (т.е. има афинитет), но не е в състояние да предизвика фармакологични ефекти, тогава то причинява блокада на рецептора и се нарича антагонист.

Лекарства, които имат същия афинитет към рецептора като агониста или по-слаб, но имат по-слабо изразен присъщ

активност се наричат ​​частични агонисти или агонист-антагонист. Тези лекарства, използвани едновременно с агонисти, намаляват ефекта на последните поради способността им да заемат рецептора.

Пример: атропин - има по-голяма активност от ацетилхолина (ендогенен медиатор). Атропинът взаимодейства с рецепторите, но тъй като няма вътрешна активност, няма да предизвика физиологичен ефект. Поради по-големия си афинитет към рецептора в сравнение с ацетилхолина, той ще пречи на действието на агониста, а именно ацетилхолина, и следователно ще бъде негов антагонист.

Лекарствата могат да действат подобно или противоположно на ендогенните медиатори. Ако лекарствено вещество действа като медиатор (ацетилхолин, норепинефрин и др.), такова вещество се нарича МИМЕТИК. Мим - корен "мим", пантомима, мимика. Оттук и холиномиметичният, адренергичен агонист.

Лекарствено вещество, което предотвратява взаимодействието на медиатор с рецептор, се нарича блокер (антихолинергичен блокер, адреноблокер, хистаминов блокер и др.).

В литературата можете да намерите термина "литичен" (лизис - разтваряне, физически процес). Терминът е доста стар, но понякога се използва (антихолинергични, адренолитични). По този начин термините "литик" и "блокер" се използват взаимозаменяемо.

В медицинската практика все повече се използва едновременното приложение на няколко лекарства. В същото време те могат да взаимодействат помежду си, променяйки тежестта и естеството на основния ефект, неговата продължителност или отслабвайки страничния и токсични ефекти. В тази връзка, специален раздел от фармакодинамиката е посветен на ЛЕКАРСТВЕНИТЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ, които са класифицирани както следва. Има ФАРМАКОЛОГИЧНО взаимодействие и ФАРМАЦЕВТИЧНО взаимодействие.

Фармацевтичните взаимодействия са свързани с фармацевтична несъвместимост на лекарствата по време на тяхното производство или съхранение, както и при смесване в една и съща спринцовка. В същото време съществуващата преди това фармакологична активност на лекарствата намалява или изчезва, а понякога дори се появяват нови, токсични свойства.

Фармакологичното взаимодействие на лекарствата е свързано с промени в тяхната фармакокинетика, фармакодинамика или се основава на химични и физикохимични взаимодействия в околната среда на тялото. Освен това лекарствата могат да взаимодействат помежду си на всеки етап от преминаването им през тялото на пациента: по време на абсорбция, във фазата на транспортиране, по време на метаболизма, както и екскреция (фармакокинетично взаимодействие).

Фармакодинамичното взаимодействие отразява промените в процесите, причинени от всяко лекарство поотделно, които са свързани с прилагането на ефекта. С други думи, фармакодинамичният тип взаимодействие се основава на особеностите на промените в механизмите и локализацията на действието на използваните лекарства, техните основни ефекти. Ако взаимодействието се осъществява на рецепторно ниво, то се отнася главно до агонисти и антагонисти на различни видове рецептори. В този случай едно лекарствено вещество може да засили или отслаби ефекта на друго. Ако лекарствените вещества действат еднопосочно по отношение на ефекта, това са синергични лекарства (syn – заедно, ergo – действат). По този начин синергията е придружена от увеличаване на крайния ефект. По правило тези лекарства действат върху едни и същи рецептори. Има 2 варианта за синергия:

1) Ефектите съвпадат по принципа на простата сума. Обобщено (или добавка, - лат. - additio - допълнение). Ефектът се наблюдава чрез просто добавяне на ефектите на всеки компонент. Например, така взаимодействат анестезиращите агенти (азотен оксид + флуоротан). Подобен вариант за адитивен ефект е при едновременната употреба на аспирин и аналгин. Защо трябва да знаете това? Ако пациентът е принуден да приема аспирин дълго време, тогава трябва да се има предвид, че аспиринът има улцерогенен ефект, т.е. причинява язви на стомашно-чревната лигавица, а аналгинът има такъв нежелан ефект като инхибиране на хемопоезата. Като се има предвид адитивният аналгетичен ефект, е възможно да се намали и значително да се намали дозата на двете лекарства, приемани от пациента, без значителен риск от появата му.

2) Вторият вариант за синергия е потенциране или усилване на ефекта. Тази опция възниква, когато при прилагане на две вещества общият ефект надвишава сумата от ефектите на двете лекарства. Примери включват взаимодействието на антипсихотици (аминазин) и анестетици, взаимодействие на антибиотици и антимикробни сулфонамиди.

Понякога се идентифицира трети (3) вариант на синергизъм - сенсибилизация. Сенсибилизацията е, когато едно лекарство в минимална доза засилва ефекта на друго в тяхната комбинация (използването на малки дози инсулин в комбинация с KCl повишава нивото на проникване на калий в клетките).

В допълнение към синергизма съществува феноменът на антагонизма. Способността на едно вещество да намалява ефекта на друго в една или друга степен се нарича АНТАГОНИЗЪМ, тоест в този случай едно лекарство пречи на действието на друго.

Има физически, химичен и физиологичен антагонизъм. Този вид взаимодействие най-често се използва в случаи на предозиране или остро лекарствено отравяне. Пример за ФИЗИЧЕСКИ антагонизъм е способността на адсорбентите да възпрепятстват абсорбцията на вещества от храносмилателния тракт ( Активен въглен, адсорбирайки отрова върху повърхността си; холестирамин).

Илюстрация на ХИМИЧНО взаимодействие може да бъде образуването на комплексони (йони на някои тежки метали - живак, олово - свързва пенициламин, EDTA), или взаимодейства по този начин солна киселинастомах и натриев бикарбонат (алкал).

ФИЗИОЛОГИЧНИЯТ антагонизъм е свързан с лекарствено взаимодействие на рецепторно ниво, чието естество вече беше обсъдено по-горе.

По аналогия със синергизма има ПРЯК (когато и двете лекарствени съединения действат върху едни и същи рецептори) и ИНДИРЕКТЕН ( различна локализациядействие на лекарствата) антагонизъм. На свой ред директният антагонизъм е КОНКУРЕНТЕН, а НЕ

КОНКУРЕНТЕН. При конкурентен антагонизъм лекарството влиза в конкурентни отношения с естествени регулатори (медиатори) за местата на свързване в специфични рецептори. Рецепторната блокада, причинена от конкурентен антагонист, може да бъде обърната от големи дози агонист или естествен медиатор.

Неконкурентният антагонизъм е ситуация, при която лекарственото вещество не може да измести естествения медиатор от рецептора, но образува ковалентни връзки с него (медиатора).

ТОЧКИ НА ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ НА ЛЕКАРСТВАТА.По-голямата част от рецепторите са разположени на външната и вътреклетъчни мембрани и техните органели. Най-честите точки на взаимодействие между лекарствата включват: 1) медиатори и хормонални рецептори; 2) ATP фаза на Na/K помпата, Ca, K и Na са интрамембранни канали.

Последното още веднъж доказва, че лекарствата действат върху наличните ключови механизми на биологични реакции, тоест върху филогенетично обусловени процеси, а не чрез създаване на някакви нови реакции.

Взаимодействието на лекарството с рецептора се осъществява на ниво химични или физикохимични процеси. Най-често естеството на реакцията, нейната сила, обратимост и продължителност се определят от свойствата на връзката между лекарството и рецептора. Силата на връзката зависи от разстоянието на електростатично взаимодействие между два атома. По правило естеството на взаимодействието е сложно, могат да се включат различни видове комуникация, което се определя от взаимното допълване на лекарството и рецептора и степента на тяхната близост един до друг.

Най-слабите връзки са връзките на Ван дер Ваалс (те определят спецификата на взаимодействието на веществата с реактивни системи). В повечето случаи възникват йонни връзки (обратими) между лекарството и рецептора.

Човек или животно (способността на лекарството да се абсорбира). Бионаличността е основният показател, характеризиращ размера на загубите, т.е. колкото по-висока е бионаличността на лекарственото вещество, толкова по-малко ще бъдат загубите му при абсорбиране и използване от тялото.

Да изследват бионаличността на лекарствата, които използват различни методи. Най-често се извършва сравнително изследванепромени в концентрациите на лекарството в изследванията и стандартните лекарствени форми в кръвната плазма и/или урината.

Определяне на бионаличността

Обикновено бионаличността се определя от количеството на лекарството в кръвта, т.е. количеството на приложената доза непроменено лекарство, което достига до системното кръвообращение и което е една от най-важните фармакокинетични характеристики на лекарството. При венозно приложениебионаличността на лекарството е 100%. (Но дори и в този случай бионаличността може да бъде намалена чрез въвеждане на друго лекарство). Ако лекарството се прилага по други начини (напр. перорално), неговата бионаличност е намалена в резултат на непълна абсорбция и метаболизъм при първо преминаване.

Бионаличността също е един от съществените параметри, използвани във фармакокинетиката, взети под внимание при изчисляване на режимите на дозиране за начини на приложение на лекарството, различни от интравенозно. Чрез определяне на бионаличността на лекарството ние характеризираме количеството терапевтично активно вещество, което е достигнало системния кръвен поток и става достъпно на мястото на неговото действие.

Абсолютна бионаличност

Абсолютна бионаличносте съотношението на бионаличността, дефинирана като площта под кривата концентрация-време (AUC), на активно лекарствено вещество в системното кръвообращение след приложение по начин, различен от интравенозно (орално, ректално, трансдермално, подкожно), към бионаличността от същото лекарствено вещество, постигнато след интравенозно приложение. Количеството лекарство, абсорбирано след неинтравенозно приложение, е само част от количеството лекарство, абсорбирано след интравенозно приложение.

Такова сравнение е възможно само след сравнение на дозите, ако са използвани различни дози за различни начини на приложение. От това следва, че всяка AUC се коригира чрез разделяне на подходящата доза.

За да се определи абсолютната бионаличност на определено лекарство, се провежда фармакокинетично изследване, за да се получи графика на концентрацията на лекарството спрямо времето за интравенозно и неинтравенозно приложение. С други думи, абсолютната бионаличност е AUC за коригираната доза, когато AUC, получена за неинтравенозно приложение, се раздели на AUC, получена след интравенозно (IV) приложение. Формулата за изчисляване на стойността на F за определено лекарство, приложено перорално, е както следва.

[AUC] по * ДОЗА IV F= ─────────────── [AUC] IV * ДОЗА по

Лекарство, приложено по венозен път, има стойност на бионаличност 1 (F=1), докато лекарство, приложено по други пътища, има абсолютна стойност на бионаличност по-малка от единица.

Относителна бионаличност

Относителна бионаличност- това е AUC на определено лекарство, сравнимо с друга рецептурна форма на същото лекарство, прието за стандарт или въведено в организма по различен начин. Когато стандартът представлява интравенозно приложено лекарство, имаме работа с абсолютна бионаличност.

[AUC] по * ДОЗА IV относителна бионаличност= ─────────────── [AUC] IV * ДОЗА по

За определяне на относителната бионаличност могат да се използват данни за нивото на лекарството в кръвта или екскрецията му в урината след еднократно или многократно приложение. Надеждността на получените резултати се увеличава значително при използване на метод на напречно сечение, тъй като това елиминира разликите, свързани с влиянието на физиологичните и патологично състояниетяло върху бионаличността на лекарството.

Фактори, които влияят върху бионаличността

Абсолютната бионаличност на някои лекарства, приложени по неваскуларен път, обикновено е по-малка от единица (F ‹ 1,0). Различни физиологични фактори намаляват бионаличността на лекарствата, преди да навлязат в системното кръвообращение. Тези фактори включват:

Индукцията от ензими се проявява като повишаване на скоростта на метаболизма, например фенитоин (антиепилептично лекарство) индуцира цитохромите CYP1A2, CYP2C9, CYP2C19 и CYP3A4.

Ензимното инхибиране се характеризира с намаляване на скоростта на метаболизма. Например, грейпфрутов сокинхибира функцията на CYP3A → това е придружено от повишаване на концентрацията на нифедипин.

Индивидуални вариации в разликите в метаболизма

• Възраст: Как общо правило, лекарствата се метаболизират по-бавно по време на развитието на плода, при новородени и в популациите в напреднала възраст.
• Фенотипни различия, ентерохепатална циркулация, диета, пол.
• Болезнено състояние, напр. чернодробна недостатъчност, лоша бъбречна дейност.

Всеки от тези фактори може да варира от пациент на пациент (интериндивидуална вариабилност) и дори при един и същ пациент за определен период от време (интраиндивидуална вариабилност). Има и други влияния. По този начин, дали лекарството се приема с или без храна ще повлияе на абсорбцията на лекарството. Лекарствата, приемани едновременно, могат да променят абсорбцията и метаболизма при първо преминаване. Чревната подвижност променя скоростта на разтваряне на лекарството и влияе върху скоростта на разрушаването му от чревната микрофлора. Болестните състояния, засягащи чернодробния метаболизъм или стомашно-чревната функция, също допринасят.

Относителната бионаличност е много чувствителна към естеството на лекарствената форма и се използва за характеризиране на биоеквивалентността на две лекарства, както е посочено от съотношението изследване/стандарт в APC. Максималната лекарствена концентрация, постигната в плазмата или серума (Cmax), обикновено се използва за характеризиране на биоеквивалентността.

Напишете отзив за статията "Бионаличност"

Бележки

Откъс, описващ бионаличността

Княз Андрей пристига в Санкт Петербург през август 1809 г. Това беше времето на апогея на славата на младия Сперански и енергията на революциите, които той извърши. През същия август суверенът, докато се возеше в карета, падна, нарани крака си и остана в Петерхоф три седмици, виждайки се ежедневно и изключително със Сперански. По това време се подготвяха не само два толкова известни и тревожни декрета за премахване на съдебните чинове и за изпитите за чинове колегиални заседатели и държавни съветници, но и цяла държавна конституция, която трябваше да промени съществуващите съдебни, административен и финансов ред на управлението на Русия от държавния съвет до областния съвет. Сега се осъществяваха и въплъщаваха онези смътни, либерални мечти, с които император Александър се възкачи на престола и които той се стремеше да осъществи с помощта на своите помощници Чарторижски, Новосилцев, Кочубей и Строгонов, които самият той шеговито наричаше comite du salut publique. [комитет за обществена безопасност.]
Сега всички са заменени от Сперански от гражданска страна и Аракчеев от военна страна. Принц Андрей, скоро след пристигането си, като камергер, дойде в двора и си тръгна. Царят, като го срещна два пъти, не го почете с нито дума. На княз Андрей винаги му се струваше, че е антипатичен на суверена, че суверенът е неприятен за лицето и цялото му същество. В сухия, далечен поглед, с който суверенът го погледна, принц Андрей намери потвърждение на това предположение дори повече от преди. Придворните обясниха на принц Андрей липсата на внимание на суверена към него с факта, че Негово Величество е недоволен от факта, че Болконски не е служил от 1805 г.
„Аз сам знам колко нямаме контрол върху нашите симпатии и антипатии“, помисли си княз Андрей и затова няма нужда да мисля лично да представя моята бележка за военните разпоредби на суверена, но въпросът ще говори сам за себе си. ” Той предаде бележката си на стария фелдмаршал, приятел на баща му. Фелдмаршалът, като определи час за него, го прие любезно и обеща да докладва на суверена. Няколко дни по-късно съобщават на княз Андрей, че трябва да се яви при военния министър граф Аракчеев.
В девет часа сутринта, в уречения ден, княз Андрей се появи в приемната на граф Аракчеев.
Княз Андрей не познаваше Аракчеев лично и никога не го беше виждал, но всичко, което знаеше за него, го вдъхваше с малко уважение към този човек.
„Той е министър на войната, довереник на императора; никой не трябва да се интересува от личните си имоти; той беше инструктиран да разгледа моята бележка, следователно само той може да я даде“, помисли княз Андрей, чакайки сред много важни и маловажни лица в приемната на граф Аракчеев.
Принц Андрей, по време на своята предимно адютантска служба, видя много осиновени важни личности и различните характери на тези осиновени му бяха много ясни. Граф Аракчеев имаше много особен характер в приемната си. Чувство на срам и смирение беше изписано върху маловажните лица, чакащи на опашка за аудиенция в приемната на граф Аракчеев; на по-официалните лица се изразяваше едно общо чувство на неловкост, скрито под прикритието на перчене и присмех към себе си, позицията и очакваното лице. Някои се разхождаха замислено напред-назад, други се смееха шепнешком, а княз Андрей чу прозвището [подигравателното прозвище] на войските на Андрей и думите: „чичо ще пита“, имайки предвид граф Аракчеев. Един генерал (важен човек), явно обиден, че трябва да чака толкова дълго, седеше с кръстосани крака и се усмихваше презрително на себе си.
Но щом вратата се отвори, всички лица моментално изразиха само едно нещо - страх. Княз Андрей помоли дежурния друг път да докладва за себе си, но те го погледнаха с насмешка и казаха, че неговият ред ще дойде навреме. След като няколко души бяха въведени и изведени от адютанта от кабинета на министъра, през ужасната врата беше пуснат офицер, който порази княз Андрей с унижения и уплашен вид. Аудиенцията на офицера продължи дълго. Изведнъж иззад вратата се чуха неприятни гласове и оттам излезе блед офицер с треперещи устни, хвана се за главата и мина през приемната.
След това принц Андрей беше отведен до вратата и служителят каза шепнешком: „надясно, до прозореца“.
Княз Андрей влезе в скромен спретнат кабинет и на бюрото видя четирийсетгодишен мъж с дълга талия, дълга, късо подстригана глава и плътни бръчки, с намръщени вежди над кафяви, мътни зелени очи и провиснал червен нос . Аракчеев обърна глава към него, без да го гледа.
-Какво питаш? – попита Аракчеев.
— Аз не… моля, ваше превъзходителство — каза тихо княз Андрей. Очите на Аракчеев се обърнаха към него.
— Седнете — каза Аракчеев, — княз Болконски?
„Не искам нищо, но императорът благоволи да препрати бележката, която подадох, на ваше превъзходителство...“
— Виж, драги, прочетох бележката ти — прекъсна го Аракчеев, като каза само първите думи нежно, отново без да го гледа в лицето и изпадаше все повече в нацупено-презрителен тон. – Нови военни закони ли предлагате? Закони има много, а старите няма кой да ги спазва. В днешно време всички закони са писани, по-лесно е да се пише, отколкото да се изпълнява.
— Дойдох по волята на императора, за да разбера от ваше превъзходителство какъв курс възнамерявате да дадете на изпратената бележка? - любезно каза княз Андрей.
„Добавих резолюция към бележката ви и я препратих на комисията.“ — Не одобрявам — каза Аракчеев, стана и взе лист от бюрото. - Тук! – подаде го той на княз Андрей.
На хартията от другата страна с молив, без главни букви, без правопис, без пунктуация беше написано: „неоснователно съставено като имитация, копирано от френския военен правилник и от военния член без необходимост от отстъпление“.
– До коя комисия е изпратена бележката? - попита княз Андрей.
- До комисията по военните правила и внесох предложение да запиша ваша чест като член. Просто без заплата.
Принц Андрей се усмихна.
- Не искам.
„Без заплата като член“, повтори Аракчеев. - Имам честта. Хей, обади ми се! Кой друг? - извика той, покланяйки се на княз Андрей.

В очакване на съобщението за записването му като член на комисията княз Андрей поднови стари познанства, особено с онези лица, които, както той знаеше, бяха в сила и можеха да му бъдат необходими. Сега той изпита в Петербург чувство, подобно на онова, което беше изпитал в навечерието на битката, когато беше измъчван от неспокойно любопитство и неудържимо привлечен от по-високи сфери, там, където се подготвяше бъдещето, върху което се крепеше съдбата на зависят милиони. Чувстваше се от озлоблението на старите хора, от любопитството на непосветените, от сдържаността на посветените, от бързането и загрижеността на всички, от безбройните комитети, комисии, за чието съществуване всеки ден научаваше отново , че сега, през 1809 г., тук, в Санкт Петербург, се подготвяше някаква огромна гражданска битка, чийто главнокомандващ беше непознат за него човек, мистериозен и който му се струваше гениален - Сперански. И най-неясно известният въпрос за трансформацията и Сперански, главната фигура, започнаха да го интересуват толкова страстно, че въпросът за военните правила много скоро започна да минава на второстепенно място в съзнанието му.
Княз Андрей беше в едно от най-благоприятните положения да бъде добре приет във всички най-разнообразни и висши кръгове на тогавашното петербургско общество. Партията на реформаторите сърдечно го прие и примами, първо защото имаше репутация на интелигентен и начетен човек, и второ, защото с освобождаването на селяните той вече си беше направил репутация на либерал. Партията на недоволните старци, също като сина на баща им, се обърна към него за съчувствие, осъждайки реформите. Женското общество, светът го посрещнаха сърдечно, защото той беше младоженец, богат и знатен и почти ново лице с ореола на романтична история за него въображаема смърти трагичната смърт на съпругата му. Освен това общият глас за него от всички, които го познаваха преди, беше, че той се е променил много към по-добро през тези пет години, омекнал и узрял, че в него няма предишна преструвка, гордост и подигравка, а е имало онова спокойствие, придобито през годините. Заговориха за него, интересуваха се и всички искаха да го видят.

При интраваскуларно приложение лекарството напълно навлиза в кръвния поток. При перорално, мускулно, подкожно приложение той трябва да премине през редица биологични мембрани на клетки (лигавица на стомаха, черния дроб, мускулите и др.) и само част от него навлиза в системния кръвоток. Ефектът на лекарството до голяма степен зависи от това колко голяма е тази част. Този показател характеризира бионаличността на лекарството. При интравенозно приложение бионаличността е 100%. При други начини на приложение (дори мускулно и подкожно) бионаличността почти никога не достига 100%. Бионаличността на лекарственото вещество се влияе от начина на приложение на лекарството, индивидуалните характеристики на тялото на пациента, състоянието на стомашно-чревния тракт, сърдечно-съдовата система, черния дроб, бъбреците, както и биофармацевтичните фактори (дозирана форма, нейният състав , особености на технологията за производство на лекарства). Последните са особено важни при употребата на лекарства през устата (ентерално) под формата на таблетки и капсули. Като правило, помощните вещества, включени в лекарството, са безразлични и нямат фармакологичен ефект, но понякога те влияят на бионаличността на лекарството. За пресоване на таблетки и пълнене на капсули се използват вещества, които могат да повлияят неблагоприятно на скоростта на разтваряне на активното съединение. Разтварянето на лекарствени вещества може да бъде възпрепятствано от ниската диспергираща способност на частиците на пълнителя и тяхното разпадане се улеснява от повърхностно активни вещества или други вещества, които влияят на електростатичните свойства на частиците. Технологията на прахообразно гранулиране във фармацевтичните предприятия също влияе върху естеството на освобождаване на активното вещество от лекарствената форма. Характерът и съставът на покритието на таблетките и капсулите са от немалко значение за бионаличността на лекарствата.

Използват се различни методи за изследване на бионаличността на лекарствата. Най-често се извършва сравнително изследване на промените в концентрациите на лекарството в изследването и стандартните лекарствени форми в кръвната плазма и / или урината. Ако вземем разтвор за интравенозно приложение като стандартна лекарствена форма (която осигурява 100% бионаличност), тогава може да се определи абсолютната бионаличност. Относителната бионаличност се определя за различни серии лекарства, за лекарства при промяна на производствената технология, за лекарства, произведени от различни производители, за различни лекарствени форми. Обикновено относителната бионаличност се измерва при използване на същия начин на приложение на лекарството. Този показател обаче може да се определи и кога по различни начиниприлагане на лекарства. За определяне на относителната бионаличност могат да се използват данни за нивото на лекарството в кръвта или екскрецията му в урината след еднократно или многократно приложение. Надеждността на получените резултати се увеличава значително при използване на метод за кръстосано изследване, тъй като това елиминира разликите, свързани с влиянието на физиологичното и патологичното състояние на организма върху бионаличността на лекарственото вещество. Индикаторът за относителна бионаличност е от голямо практическо значение. В клиничната практика отдавна е забелязано, че лекарствата, съдържащи едни и същи лекарствени вещества, но произведени от различни фармацевтични компании, се различават значително в двете терапевтична ефективност, и по отношение на честотата на поява и тежестта на страничните ефекти.

Стана възможно напълно да се разбере и оцени ролята на характеристиките на производствената технология, качествения и количествения състав на ексципиентите на дозираната форма и много други фактори в действието на лекарствата едва през последните години в резултат на бързото развитие на биофармация и фармакокинетика. Оказа се, че в повечето случаи терапевтичната нееквивалентност на лекарства, съдържащи едни и същи лекарства, зависи от разликите в тяхната бионаличност. В тази връзка се появи нова концепция - биоеквивалентност. Лекарствата се наричат ​​биоеквивалентни в случаите, когато осигуряват еднаква концентрация на активното вещество в кръвта и тъканите на тялото.

При изследване на биоеквивалентни лекарства най-важните параметри са следните: 1) максимална или пикова концентрация на лекарството в кръвта; 2) времето за достигане на максимална концентрация и 3) площта под кривата на промените в концентрацията на веществото в плазмата или серума с течение на времето.

Стойността на пиковата концентрация на вещество в кръвта може да се обясни с помощта на Фиг.

Две криви изобразяват кинетиката на кръвната концентрация на едно и също лекарство, приложено в различни дозирани форми (1 и 2). Хоризонталната линия показва минималната ефективна концентрация, при която дадено вещество има терапевтичен ефект (например 4 μg/ml). Очевидно е, че при промяна на дозираната форма (2) лекарственото вещество, макар и напълно абсорбирано, не достига терапевтична концентрация и следователно няма терапевтичен ефект.

На фиг. Фигура 8 показва кинетиката на лекарствено вещество с минимална ефективна концентрация от 4 μg/ml и минимална токсична концентрация от 8 μg/ml, когато се използва в две дозирани форми (1 и 2). При използване на лекарствена форма 1 концентрацията на лекарственото вещество надвишава минималната токсична и следователно има токсичен ефект. Когато се използва дозирана форма 2, лекарството се съдържа в кръвта в терапевтична концентрация, но не достига токсична концентрация и няма увреждащ ефект върху тялото на пациента.

Вторият важен параметър е времето за достигане на максималната концентрация на лекарството. Този показател отразява скоростта на неговото усвояване и скоростта на настъпване на терапевтичния ефект. На фиг. 8 показва, че максималната концентрация на веществото при използване на дозирана форма 1 се постига след 1 час, а дозирана форма 2 - след 4 часа.За да разберете значението на този параметър, представете си, че лекарството е хипнотик. Той ще достигне минималната терапевтична концентрация и ще има хипнотичен ефект при използване на лекарствена форма 1 след 30 минути, а лекарствена форма 2 само след 2 часа.От друга страна, ефектът на хипнотичното вещество при използване на първата лекарствена форма продължава 5,5 часа, а вторият - 8 ч. Следователно, поради особеностите на фармакокинетиката на един и същ хипнотик, приготвен в различни лекарствени форми, показанията за тяхното приложение се различават. Дозирана форма 1 е по-подходяща за нарушения на съня, а дозирана форма 2 е по-подходяща за намаляване на продължителността на съня.

Третият и, очевидно, най-важният параметър на бионаличността е площта под кривата концентрация-време, която отразява количеството на лекарственото вещество, което влиза в кръвта след еднократна доза от лекарството. На фиг. 8, двете криви имат различни форми, различни пикове и различно време за достигане на максимална концентрация; но площите под тези криви са еднакви и следователно и двете дозирани форми осигуряват едно и също количество лекарство в кръвта

Резюме

Прегледът се фокусира върху изследванията на фармакокинетиката и бионаличността при създаването на нови оригинални лекарства с пептидна структура. Много внимание се обръща на методите количествено определянепептидни съединения в биоматериали, изследване на техните фармакокинетични характеристики, фактори, влияещи върху бионаличността на тези вещества, и също така предоставя някои фармакокинетични данни за тези, въведени в медицинска практикалекарства с пептидна структура.

Ключови думи: фармакокинетика, къси пептиди, бионаличност, помощни вещества

Въведение

тревожни разстройства – психични разстройства, характеризиращ се с обща упорита тревожност, патологичен страх, напрежение и нервност. Понастоящем разпространението на заболявания, свързани с тревожни разстройства, варира от 13,6 до 28,8% в западните страни и непрекъснато нараства поради с бързи темповебитови, екологични и социални напрежения.

Поради значителното нарастване на заболяванията, свързани с тревожни и депресивни разстройства, разработването и внедряването на нови анксиолитични лекарства е от значение. Днес лекарствата, които имат такъв фармакологичен ефект, са представени главно от група бензодиазепинови съединения, които се характеризират с умора, сънливост, нарушение на паметта, умствени и физически наркотична зависимост, синдром на отнемане, който намалява качеството на живот на пациентите. Един такъв анксиолитик, лишен от тези странични ефекти, е лекарството афобазол. Горното потвърждава необходимостта от търсене на други високоефективни лекарствабез нежелани реакции на бензодиазепините. Науката плаща голямо вниманиеендогенни пептиди. В момента инсталиран важна роляендогенен невропептид холецистокинин в патогенезата тревожни разстройства. Известно е, че холецистокининът, действайки върху CCK-B рецепторите, разположени в централната нервна система, проявява анксиогенна активност - предизвиква пристъпи на паника, взаимодейства с опиатната система и по този начин може да има антианалгетичен ефект. Възможно е също холецистокининът да играе роля в патогенезата на депресията и шизофренията.

Тъй като ендогенните невропептиди имат ниска ензимна стабилност, подлежат на хидролиза в стомашно-чревния тракт и са активни само след проникване през BBB, имаше нужда да се търсят потенциални анксиолитици (антагонисти на холецистокинин рецептор) с по-компактна и защитена структура, които са ефективен при системно приложение.

Въз основа на хипотезата, разработена от Gudasheva T.A. през 1985 г. относно възможността за симулиране на структурата на непептиден прототип с определена невротропна активност, както и на активния фрагмент от оригиналния пептид с подобна активност, нов дипептиден анксиолитик GB-115 (N-фенил-N -хексаноил-L-глицил-L амид) е синтезиран -триптофан) е ретроаналог на холецистокинин-4. Установена е фармакологичната активност на съединението: експериментално е доказано, че GB-115 проявява анксиолитични, антиалкохолни, антидепресантни и аналгетични свойства. Когато се прилага перорално, GB-115 демонстрира своята максимална анксиолитична активност при доза от 0,1 mg/kg. Лекарството спира анксиогенната реакция, предизвикана от спиране на етанол в доза от 0,2 mg/kg, p.o. Максимална аналгетична активност се проявява при доза от 10 mg/kg, а антидепресивен ефект при доза от 0,025-0,05 mg/kg i.p.

Провеждането на експериментални фармакокинетични изследвания на лекарствен продукт е необходима стъпказа по-нататъшното му развитие в медицинската практика. Подобряването на фармакокинетичните параметри позволява създаването на оптимална дозирана форма, която да се отличава с подходяща степен и скорост на абсорбция, характеристики на разпределение и пътища на метаболизъм и екскреция. Оценката на относителната бионаличност позволява да се направи избор в полза на дозирана форма с най-добри фармакокинетични параметри за изследваното съединение.

Фармакокинетиката е съвременна, бързо развиваща се наука, която изучава характеристиките на проникването на лекарствата в тялото, разпределението, биотрансформацията и елиминирането. Изследването на тези процеси, включително тяхната количествена оценка, е основната цел на фармакокинетиката.

Фармакокинетичното изследване на нови фармакологично активни вещества в експеримент е задължителна стъпка в изследването, разработването и внедряването им в медицинската практика. Ефективността на лекарството пряко зависи от процесите на абсорбция, разпределение и екскреция на лекарствата от тялото.

Фармакокинетичните данни позволяват да се определи пътя и начина на приложение, мястото на проникване на лекарството, приблизителния режим на дозиране, както и основните пътища за елиминиране на лекарството.

Абсорбцията, разпределението, метаболизмът и екскрецията на лекарственото съединение са взаимосвързани процеси. Всички те се влияят от много фактори: скоростта на абсорбция зависи от лекарствената форма на лекарството, концентрацията на активното вещество, рН на средата, в която веществото е разтворено, чревната подвижност и състоянието на абсорбционната повърхност. ■ площ. Индикаторите за разпределение и биотрансформация на лекарството се влияят от пола, възрастта, соматичното състояние на тялото на пациента, както и състоянието на ензимните системи на тялото, което често се дължи на индивидуални различия. По този начин скоростта на метаболизма на някои психотропни лекарства може да варира от 6 до 30 часа различни пациенти. Отстраняването на метаболитите от тялото може да бъде повлияно от придружаващи заболявания, както и влиянието на други лекарствени вещества.

За да се оценят различните фармакокинетични процеси на лекарства в тялото на животни и хора, се изчисляват съответните фармакокинетични параметри, включително бионаличност (F, %) - частта от дозата на лекарството, която достига системния кръвен поток след екстраваскуларното му приложение.

Важно е да се отбележат условията за провеждане на фармакокинетични експерименти при предклинични изпитвания на нови фармакологично активни съединения.

Изследваните фармакологични средства се считат за обект на изследване, което в предклиничната практика се провежда върху здрави животни: плъхове, мишки, зайци, кучета, маймуни и други, чието тегло не трябва да се различава от стандартното за всеки вид с повече от 10%.

Основните видове биологичен материал са кръвна серумна плазма, цяла кръв, различни органи и тъкани, урина, изпражнения.

Начинът на приложение се определя от формата на лекарството, препоръчана въз основа на фармакокинетични изследвания за по-нататъшно фармакологично изследване. Методите на приложение могат да бъдат различни: интравенозно, интраперитонеално, интрамускулно, подкожно, орално и др. Лекарството се прилага перорално на животните чрез фарингеален или дуоденална тръбана празен стомах, за да се избегне взаимодействието на лекарството с храната.

Приложението може да бъде многократно или еднократно. При еднократно приложение е необходимо да се изследва фармакокинетиката на активното вещество, като се използва поне три нивадози. Това е необходимо, за да се провери линейността на фармакокинетиката.

Продължителността на експеримента трябва да съответства на време 5 пъти по-дълго от полуживота.

Броят животни на точка (съответна стойност на концентрация) трябва да бъде най-малко 5, ако се взема само една проба от всяко животно от пробата (при опити с плъхове в случай на обезглавяване: едно животно - една точка).

Един от важни етапиФармакокинетичното и биофармацевтичното изследване на ново фармакологично активно съединение е изследване на неговата абсолютна и относителна бионаличност (виж раздел „Бионаличност на лекарства“).

• Аналитични методи за определяне на пептиди и техните производни

Съществуват различни методи за качествено и количествено определяне на аминокиселини, пептиди и техните производни. И е необходимо да се избере разумно оптимален методза анализ на пептидната структура на потенциално лекарство. Това ще ни позволи да постигнем чувствителен анализ и да получим точни и възпроизводими резултати, които биха показали фармакокинетиката на конкретно съединение.

Класификация:

• Методи за течна хроматография:

Тънкослойна течна хроматография

Високоефективна Течна хроматография

• Газова хроматография
• Имунохимични методи за анализ
• Капилярна електрофореза

1.2 Хроматография на аминокиселини и пептиди

Хроматографията е физикохимичен метод за разделяне на компонентите на анализирана смес, основан на разликата в коефициентите им на разпределение между две фази: неподвижна и подвижна. Най-обещаващите хроматографски методи са: газова хроматография (GC) и високоефективна течна хроматография (HPLC) в комбинация с масспектрометричен детектор - GC-MS и HPLC-MS. Тези методи се развиват с бързи темпове, което е свързано с нарастването на задачите, възникнали през последните години: протеомика, метаболомика, анализ на биогорива, определяне на биомаркери на заболявания, създаване и контрол на качеството на лекарства, контрол на качеството и безопасност на храните , както и тероризъм (определяне на токсични вещества, вредни веществаи бойци) и бързо определяне на последствията извънредни ситуации.

1.2.1 Методи за течна хроматография

1.2.1.1. Високоефективна Течна хроматография

HPLC е физикохимичен метод за разделяне на компонентите на смес от вещества, основан на различното им разпределение между две несмесващи се фази, едната от които е подвижна, а другата неподвижна. В зависимост от полярността на подвижната и неподвижната фаза HPLC обикновено се разделя на нормална фаза (стационарната фаза е по-полярна от подвижната) и обратна фаза (стационарната фаза е по-малко полярна от подвижната).

HPLC с обратна фаза често се използва за разделяне на аминокиселини и пептиди поради факта, че повечето аналити са силно разтворими във водни подвижни фази и имат ограничена разтворимост в повечето неполярни разтворители. Въпреки това, HPLC с нормална фаза се използва за хроматография на късоверижни аминокиселинни производни и пептиди с ниска хидрофобност, които не се задържат от стационарната фаза при HPLC с обратна фаза. HPLC с обърната фаза беше златен стандарт за разделяне и пречистване на пептиди преди прилагането на масовата спектрометрия в тази област. RP-HPLC има следните предимства пред другите методи за хроматографски анализ: възпроизводимост на резултатите, висока мощност на разделяне, селективност (способността да се диференцират пептиди с разлика от една аминокиселина), чувствителност, висока скорост на изпълнение и използването на малък обем летливи разтворители.

Селективността и качеството на пептидния анализ при обратнофазова HPLC зависи от правилния избор на фази: подвижна и неподвижна.

Като неподвижна фаза се използват адсорбенти, които са силикагел, модифициран с различни производни на хлоросилан. Тази фаза има висока якост и безразличие към органични разтворители. Обратната фаза се отличава с характеристиките на матрицата - силикагел и структурата на присадения радикал, който се различава по състава и структурата на въглеродния фрагмент. При хроматография на пептиди изборът на обратна фаза се определя от размера и хидрофобността на пептидите: за пептиди с къса верига се използват хидрофилни пептиди, фази C8 (n-октил) и C18 (n-октадецил), за големи и хидрофобни - фаза С3 (триметил- или диметилпропил), С4 (n-бутил), С6 (фенил).

За правилен избор на подвижната фаза е необходимо да се вземе предвид pH, съставът и концентрацията на органичния разтворител:

За да се намали полярността на пептидите и да се осигури по-добро задържане от адсорбента, pH на елуента трябва да бъде в диапазона 2-3. Също така, за да се увеличи времето на задържане на пептидите, в подвижната фаза се въвеждат така наречените модификатори или реагенти на йонни двойки (противойони), които са способни да образуват йонни двойки с положително заредени пептидни групи. Основният йонен модификатор в RP HPLC е трифлуорооцетната киселина. Лесно се отстранява от елуатите чрез изпаряване, разтваря добре пептидите и е UV прозрачен в областта на късата дължина на вълната, което не създава допълнителни пикове по време на откриване. Мравчената киселина също се използва като модификатор и осигурява добро разделяне, но използването й е ограничено от силната абсорбция в UV областта.

Влиянието на органичния разтворител върху способността за елуиране на подвижната фаза е много голямо. И така, силата на елуиране на разтворителя нараства в следния ред: вода - метанол - ацетонитрил - етанол - диоксан - тетрахидрофуран - 2-пропанол - 1-пропанол. Тази последователност се дължи на намаляване на полярността органична материяв този ред. Ацетонитрилът най-често се използва като органичен компонент на подвижната фаза, тъй като е прозрачен в UV областта до 200 nm, има нисък вискозитет, е силно летлив, което позволява, ако е необходимо, лесно да се отстрани от събрания елуат фракция и се характеризира с добра селективност.

Разделянето на пептидни съединения може да се извърши при изократични условия, където концентрацията на органичния разтворител е постоянна, или чрез градиентно елуиране, в който случай концентрацията на органичния разтворител се увеличава с времето. Изпитваните вещества се елуират в ред на нарастване на хидрофобността.

1.2.1.2. Методи за откриване на пептиди във високоефективна течна хроматография: UV детекция, масспектрометрия.

За точно изпълнениекачество и количествен анализСлед разделянето на лекарствени вещества чрез HPLC е необходимо да се използва апаратура за тяхното детектиране, което от своя страна има следните изисквания: детекторите трябва да имат висока чувствителност (добър сигнал, без шум), скорост, широк линеен динамичен диапазон, стабилност и няма взаимодействие с подвижната фаза.

Един от най-разпространените методи за детекция във високоефективната течна хроматография е ултравиолетовата, което се обяснява с високата чувствителност на анализа, простотата и достъпността от икономическа гледна точка. UV откриването обаче е по-малко чувствителен метод от масспектрометрията. UV детекторите днес са представени от четири основни типа:

• с фиксирана дължина на вълната;
• с монохроматор, който ви позволява да променяте дължините на вълните в неговия диапазон;
• с автоматично регулируем монохроматор, който позволява детектиране на много вълни, много канали;
• диодно-матрични детектори, които позволяват получаване на пълна спектрална информация в даден диапазон.

Поради наличието на някои хромофори в състава на аминокиселините, както и самата пептидна връзка, стана възможно да се открият пептидни съединения с помощта на UV радиация, като се използва един от четирите вида оборудване, изброени по-горе.

Пептидните съединения са способни да абсорбират UV радиация в три области:

Над 250 nm (λ=280 nm), което се дължи на наличието на ароматни аминокиселини в анализираното съединение - триптофан (λ=278 nm), тирозин (λ=275 nm) и фенилаланин.

При 210-250 nm такъв сигнал може да бъде даден от други аминокиселини с вътрешно- и междумолекулни водородни връзки в протеиновите молекули.

При 190 nm, което се обяснява с наличието на пептидни връзки.

Въпреки това, откриването на изследваните съединения не се извършва при дължини на вълните под 210 nm поради влиянието на разтворителите, използвани в HPLC, които имат собствена абсорбция при дължини на вълните, по-къси от 210 nm, както и поради наличието на примеси. Следователно, когато се откриват пептидни вещества, често се използва обхват на дължина на вълната над 250 nm. Ако съединенията не съдържат хромофори, които биха абсорбирали UV радиация в тази област, тогава те прибягват до метода на дериватизация.

Дериватизацията е химическа модификация на аналит, за да се получи производно съединение, което е подобрено аналитични свойства. При работа с HPLC-UV чрез дериватизация е необходимо да се получи съединение, което да се регистрира в UV спектъра в област, удобна за анализ на биологичен материал. Така че в работата на Руденко А.О. При определяне на най-важните аминокиселини в сложни биологични матрици е използван метод на дериватизация на 16 аминокиселини. О-фталалдехидът се използва като дериватизиращ агент.

Масспектрометричният метод за откриване се състои от три етапа: йонизация, разделяне на базата на принципа на съотношението маса към заряд и последващо откриване с помощта на масов анализатор. За анализ на лекарствени съединения се използват "меки" йонизационни техники: йонизация с електроспрей, както и матрично-асистирана лазерна десорбция (MALDI). Тези методи представляват режим на щадяща йонизация, което е особено важно за термично нестабилни биомолекули. Тези видове йонизация обаче не са достатъчно информативни, така че често прибягват до тандемна масова спектрометрия (MS/MS), метод за записване на фрагменти от анализирани вещества. За да бъдем по-точни, този метод се състои от няколко етапа: първо, анализираните съединения се йонизират леко, преминават през първия анализатор, след това тяхната енергия се увеличава, поради което изследваните молекули се фрагментират и вторият анализатор записва получената маса спектър.

За количествено определяне на нови лекарствени съединения се използват следните видове масови анализатори:

Квадруполен (масов анализатор, базиран на три квадруполя), който е „златен стандарт” в изследването на нови лекарствени съединения;

Времето на полет (TOF), когато се използва, постига по-ниска чувствителност, отколкото когато се използват тройни квадруполни анализатори.

Йонен циклотронен резонанс и орбитален йонен капан, които са масови анализатори с висока разделителна способност и досега рядко се използват поради високата цена и сложността на такива устройства.

Използването на масспектрометрично откриване в комбинация с HPLC направи възможно постигането на високи скорости на анализ, увеличаване на границата на откриване на лекарствени съединения и значително подобряване на стабилността и точността на изследванията.

• Тънкослойна хроматография

Днес TLC се използва в много по-малка степен, тъй като са станали достъпни по-високотехнологични методи за разделяне на пептиди, като HPLC, течна колонна хроматография, йонообменна хроматография, електрофореза с протеинов полиакриламиден гел и капилярна електрофореза. TLC обаче се оказа количествен, високотехнологичен, сравнително евтин и лесно възпроизводим метод за времето си. Тънкослойната хроматография е популярна през 80-те години - аминокиселините се изолират от растения, животни и различни биологични течности.

За оферта:Ших Е.В. Бионаличност на перорални лекарства // Рак на гърдата. 2007. № 2. стр. 95

В контекста на интензивното развитие на фармацевтичната индустрия и огромното разнообразие от лекарства за орално приложение, специалистите трябва да актуализират знанията си за лекарствата от тази категория и процесите, протичащи в организма по време на тяхното усвояване.

Съвременните фармацевтични технологии позволяват да се променят фармакокинетичните параметри на перорално приеманото лекарство в определен диапазон. Обикновено тези технологии са насочени към увеличаване на бионаличността на лекарството и/или намаляване на риска от нежелани реакции. Обективна характеристика на количеството абсорбирано вещество е площта под кривата концентрация-време (AUC).
На основните фармакокинетични параметри перорално взет наркотик(максимална концентрация, време за нейното достигане, полуживот, константа на скоростта на елиминиране и др.), в допълнение към неговите физикохимични свойства, състоянието на стомашно-чревния тракт на пациента и физиологични процесив храносмилателната система.
В това отношение изглежда важно да се вземат предвид факторите в човешкото тяло, които влияят върху бионаличността на дозираната форма, когато се приема перорално.
Физиологични процеси в стомашно-чревния тракт, влияещи върху бионаличността
орални лекарствени форми
Когато се приема перорално, активното вещество на таблетката (до разтваряне) преминава последователно през устната кухина, хранопровода, стомаха и тънките черва.
В устната кухина таблетката е покрита със слюнка. много лекарствени формиза перорално приложение покрити специална черупка, предотвратявайки действието на слюнчените ензими върху тях, така че лекарствата, предписани през устата, не се препоръчват да се дъвчат.
Дължината на тънките черва е 5 m (на дванадесетопръстника 27-30 cm). Храната остава в стомаха за 30 минути. до час и половина, в тънките черва - около 4 часа. По правило остават същите интервали от време за лекарствата, приемани през устата.
Процесът на усвояване на някои лекарства започва в стомаха. Не само киселинността на стомашния сок играе роля, но и времето на изпразване на стомаха. При пациенти с висока киселинност на стомашния сок, поради спазъм на пилорната област, изпразването на стомаха се забавя, в резултат на което се забавя и абсорбцията на лекарствата. В анацидно състояние изпразването на стомаха става бързо и това води до ускорена абсорбция на лекарствата и по-бързо начало на фармакодинамичния ефект.
От стомаха лекарството влиза дванадесетопръстника, където се отварят общият жлъчен канал и каналът на панкреаса. Компонентите на жлъчката допринасят за разтварянето на липофилни лекарства, покрития, капсули и таблетки с ентерично покритие. В червата активното вещество се освобождава от лекарствената форма и взаимодейства с чревния сок. В същото време жлъчните соли могат да образуват неразтворими комплекси с някои лекарства, което води до намаляване на тяхната бионаличност.
Повечето вещества, приети през устата, се абсорбират в тънките черва, които имат изключително развита повърхност (около 200 m2). Скоростта на навлизане в системното кръвообращение зависи от кръвоснабдяването на червата в зоната на абсорбция.
Процесът на усвояване на лекарствените вещества се влияе значително от храната. Повечето лекарства се характеризират с по-бавно усвояване под влияние на храната, свързано с по-бавно изпразване на стомаха. Горещи, кисели, мазни, прекалено солени или сладки храни, както и храни с гъста консистенция, особено забавят евакуацията на стомашното съдържимо. Но в някои случаи продължителното пребиваване на лекарства в стомаха допринася за по-пълното им разтваряне и след преминаването на химуса в тънките черва бионаличността може да се увеличи (например нитрофурантоин, хипотиазид). В тази връзка приемът на лекарства е свързан с диета.
Първо, храната може да действа като механична бариера, която предотвратява контакта на лекарството с чревния епител. Второ, редица храни могат да повлияят на pH на стомашното съдържимо. Трето, храната може да взаимодейства с лекарствата, за да образува хелатни комплекси.
Препоръчително е да приемате лекарството преди хранене, ако трябва бързо да създадете висока концентрация в кръвта. В други случаи се счита за препоръчително да се предписват лекарства след хранене. Лекарствата, характеризиращи се със значителна биотрансформация по време на първото преминаване през черния дроб, трябва да се приемат веднага след хранене, докато тяхната бионаличност се увеличава поради намаляване на пресистемното елиминиране.
Трябва да се отбележи, че намаляването на бионаличността при приемане с храна на някои лекарства не се счита за индикация за тяхното приложение преди хранене, тъй като в този случай лекарството може да има дразнещ ефект, да предизвика обостряне на гастрит, пептична язваи допринасят за развитието на диспептични явления.
Като се има предвид фармакокинетиката на витамините, препоръчително е да се приемат по време на хранене.
Ентералният (орален) път на приложение на лекарства е най-разпространеният в практическата медицина.
Той е най-удобният и относително безопасен за пациента. За самото лекарство обаче това е най-дългият и труден път, в резултат на което има естествена загуба на самото активно вещество, достигащо до рецепторния апарат. В тази връзка някои вещества нямат дозирана форма за перорално приложение, тъй като се унищожават от ензимите на стомашно-чревния тракт (например инсулин и други протеини) и киселинната среда на стомаха (например бензилпеницилин).
Смукателни механизми
Най-простият механизъм за транспортиране на лекарства е пасивната дифузия през мембраните на клетките на чревната стена (ентероцити). Скоростта на абсорбция в този случай е пропорционална на концентрационния градиент на веществата и значително зависи от тяхната разтворимост в мембраната (липофилните неполярни вещества се абсорбират най-лесно по този начин). По правило електролитите, които са в недисоциирано състояние, претърпяват дифузия. Разтворимостта и степента на йонизация на лекарството се определят от рН на съдържанието на стомаха и червата. Трябва да се подчертае, че лекарствата се абсорбират добре чрез пасивна дифузия не само в тънките черва, но и в дебелото и ректума, което служи като основа за разработването на много лекарства със забавено освобождаване на активното вещество, както и прилагане на лекарства по ректален път.
Водата, електролитите и малките хидрофилни молекули (например урея) се транспортират в кръвта по друг механизъм – филтрация през порите в чревния епител.
Активният транспорт, използвайки специализирани механизми на клетъчните мембрани и молекулите-носители, осигурява абсорбцията на хидрофилни полярни молекули, неорганични йони, аминокиселини и пиримидини. Изисква влагане на енергия за изпълнението си и се характеризира със селективност, насищане и възможност за транспорт срещу концентрационен градиент. По време на активния транспорт често има конкуренция между веществата за общо транспортен механизъм(например при усвояване на определени витамини и минерали). Степента на абсорбция зависи от дозата на лекарството, тъй като е възможно явлението "насищане на протеинов носител".
Основният механизъм на абсорбция на ксенобиотичните (синтезирани) лекарствени вещества е пасивната дифузия; активният транспорт се използва рядко. За вещества от естествен произход, като аминокиселини, витамини, есенциални микроелементи и др., организмът разполага със специализирани активни транспортни механизми. В този случай основният път на абсорбция е активен транспорт, а пасивната дифузия започва да играе роля само при много високи концентрации.
Лекарства с голяма молекула или комплекси от лекарство с голяма транспортна молекула се абсорбират чрез пиноцитоза. В този случай настъпва инвагинация на чревната епителна клетъчна мембрана и образуване на везикула (вакуола), пълна с уловена течност заедно с лекарството. Вакуолата мигрира през цитоплазмата на клетката към противоположната страна и освобождава съдържанието си в вътрешна средатяло. Пиноцитозата обаче не е от съществено значение за усвояването на лекарствата и се използва само при в редки случаи(например при смилане на комплекс от цианокобаламин с протеин - вътрешен факторКастла).
Филтрирането през порите е важно за абсорбцията на лекарства с молекулно тегло под 100 Da.
Съвременни технологии
контролирано освобождаване
в производството на лекарства
Съвременните аналитични методи позволяват да се определят свръхниски концентрации на изследваните лекарствени вещества в кръвната плазма, което позволява да се изгради фармакокинетична крива с голяма точност и съответно да се преценят нейните параметри с по-голяма сигурност. Това, съчетано с познаването на механизма на абсорбция на определено вещество, когато се приема през устата, позволява целенасоченото разработване на неговата дозирана форма.
За перорални таблетирани лекарства се използват следните технологични методи:
- използване на помощни вещества;
- гранулиране;
- микрокапсулиране;
- използване на специално пресоване;
- покритие с черупки и др.
С тяхна помощ можете да промените времето за разпадане на таблетката, скоростта на разтваряне или освобождаване на лекарството, мястото на освобождаване и продължителността на престоя в определена зона на стомашно-чревния тракт (над прозореца за абсорбция). И това от своя страна определя скоростта и пълнотата на абсорбция, динамиката на концентрацията на лекарството в кръвта, т.е. бионаличността на лекарството.
За съжаление, повечето технологии за производство на таблетни лекарства, използвани във фармацевтиката, не позволяват независимо влияние върху времето и мястото на абсорбция на активното вещество, тъй като обикновено лекарството непрекъснато се движи през стомашно-чревния тракт заедно с хранителен болусили химус. Това означава, че забавянето на времето за освобождаване на активното вещество неизбежно измества мястото на освобождаване по-ниско в храносмилателния тракт. За някои специфични лекарства се предлагат оригинални методи за решаване на този проблем: таблетки, направени от микрочастици с адхезивни свойства, които „залепват“ за лигавицата, или таблетки, които набъбват в стомаха толкова много, че плуват на повърхността и/или не могат да преминат през пилорния сфинктер в червата.
Скоростта, с която таблетките се разпадат в стомаха, се влияе от начина, по който са произведени. По този начин обикновените (компресирани) таблетки са по-здрави от стритите (формовани) таблетки. Скоростта на разпадане зависи и от ексципиентите, използвани за придаване на необходимите свойства на таблетната смес (течливост, пластичност, компресируемост, съдържание на влага и др.).
Ентеричните таблетки се приготвят чрез покриването им със стомашно-устойчиво покритие или чрез пресоване на гранули или микрокапсули, предварително покрити с такива покрития. Ако е необходимо, черупките могат да осигурят повече дълго забавянеразтваряне от 1 час, който таблетката прекарва в стомаха.
Обвивката може да бъде доста дебела, например захар, която понякога има по-голяма маса от сърцевината на таблетката, съдържаща лекарственото вещество. Тънки филмови обвивки (по-малко от 10% от теглото на таблетката) могат да бъдат направени от целулоза, полиетиленгликоли, желатин, гума арабика и др.
Чрез избора на обвивката и въвеждането на допълнителни вещества е възможно да се забави повишаването на концентрацията на активното вещество в кръвта, което е важно за намаляване на риска от развитие на нежелана реакция и / или изместване на времето за достигане на максимума с няколко часа, ако е необходимо да се удължи действието на лекарството и по този начин да се намали честотата на приложение, за да се повиши комплайънсът.
Таблетките с удължено освобождаване (ретард), например, обикновено се приготвят чрез компресиране на микрогранули от лекарството в биополимерна обвивка или разпределянето му в биополимерна матрица. С постепенното (слой по слой) разтваряне на основата или обвивката се освобождават последователни порции от лекарственото вещество.
Съвременните високотехнологични методи за доставяне позволяват постигането на постепенно, равномерно освобождаване на лекарството. Например чрез създаване на осмотично налягане вътре в капсулата с активното вещество. Въз основа на този принцип са създадени нови лекарствени форми на добре познатите лекарства нифедипин (Procardia XL, Pfeizer), оксибутин хлорид (Ditrophan XL, Ortho-McNeil), метилфенидат (Concerta, ALZA).
Контролирано освобождаване може да се постигне чрез използване на микрокапсули с лекарствено вещество, покрито със специален полимер в таблетки. След като външният слой се разтвори, течността започва да тече в капсулата и докато ядрото се разтваря, лекарството постепенно се освобождава и дифундира през мембраната на капсулата.
Основният фактор, ограничаващ производството и употребата на такива лекарствени форми, остава изискването за освобождаване на цялото активно вещество по време на преминаването на таблетката през основните места на абсорбция на лекарството в стомашно-чревния тракт - 4-5 часа.
Проблеми при използването на технологии за контролирано освобождаване за производство на комбинирани
лекарства
Специални технологични проблеми поставят пред разработчиците комбинирани лекарства, съдържащи няколко активни вещества, които изискват различни условия за оптимална абсорбция.
Разбира се, ако изискванията за мястото и времето на абсорбиране са еднакви за компонентите, можете просто да таблетирате сместа или, ако е необходимо (например, за да ограничите контакта между компонентите по време на съхранение), предварително да гранулирате и капсулирате компоненти.
Ако компонентите изискват различни части на стомашно-чревния тракт за оптимална абсорбция (стомаха и тънките черва или проксималните и дисталните части тънко черво), след което таблетките се пресоват от гранули с различни скорости на разтваряне. В този случай също така е възможно да се използват технологии за многослойно таблетиране или контролирано освобождаване (многокомпонентни).
Ако компонентите комплексно лекарствотрябва да се абсорбира в различно време(но на едно място от стомашно-чревния тракт), след това алтернативи отделен приемНе. Пример са някои орални контрацептиви.
Обикновено съставът на комбиниран лекарствен продукт не включва компоненти, които влияят отрицателно върху безопасността, абсорбцията или фармакологичното действие един на друг. С витаминно-минералните комплекси ситуацията е много по-сложна. Много от тях съдържат десетки компоненти в една таблетка, между които са възможни описаните антагонистични взаимодействия. Следните въпроси са естествени. Доколко е възможно да се съчетаят толкова голям брой биологично активни вещества в една таблетка? Могат ли съвременните фармацевтични технологии да създадат лекарствена форма, която да осигури оптимално усвояване на всички компоненти при едновременен прием?
Характеристики на усвояването на витамини
и микроелементи
Нека разгледаме характеристиките на абсорбцията на витамини в стомашно-чревния тракт (Таблица 1).
Всички витамини се делят на два класа в зависимост от тяхната разтворимост: мастноразтворими (липофилни) и водоразтворими (хидрофилни). Първият включва витамини А, D, Е и К, вторият - всички витамини от група В, витамини С и Н (биотин). Естествено, разтворимостта значително влияе върху абсорбцията.
Мастноразтворимите витамини могат да преминат във водната среда само като част от мицели, образувани по време на емулгирането на мазнини с жлъчка (жлъчни соли) в проксималните тънки черва. Там става и усвояването на тези витамини, т.е. тяхното освобождаване от мицели в клетките на чревната стена (ентероцити), транспортиране чрез специални гликопротеини (хиломикрони) от цитоплазмата на ентероцитите в лимфата и кръвта. Абсорбцията на мастноразтворимите витамини става главно чрез пасивна дифузия и зависи от наличието на мазнини в химуса.
При засмукване водоразтворими витаминипасивната дифузия играе значителна роля само при приемане на натоварващи (високи) дози. При прием на витаминни комплекси, съдържащи компоненти в профилактични дози, основно значение има активният транспорт. Транспортният механизъм е различен за различните витамини.
Съставът на профилактичните витаминно-минерални комплекси най-често включва следните макро- и микроелементи под формата на соли: калций, магнезий, желязо, мед, йод, селен, цинк, манган.
Подобно на витамините, тези минерали се абсорбират предимно в тънките черва. За активен транспорт във вътрешната среда повечето от тях изискват вектори. Спецификата на транспортния процес обаче не е толкова голяма, колкото при витамините. Следователно не е необичайно минералите да се конкурират за общ транспортен механизъм, когато присъствието на един минерал в червата намалява абсорбцията на друг. Така, в присъствието на калций и магнезий, усвояването на желязото може да намалее с 50%.
Минералите могат да намалят усвояването на някои витамини, да повлияят на тяхната разтворимост или да нарушат функционирането на специфични активни транспортни механизми. Така калциевите и магнезиевите йони намаляват разтворимостта на витамина; в присъствието на мед, цинк или желязо, абсорбцията на рибофлавин се намалява.
Има и примери за междувитаминови взаимодействия, когато един витамин инактивира друг или нарушава неговото усвояване.
Така витамин С окислява кобаламина вече в таблетката и блокира усвояването му, когато таблетката се разтвори в храносмилателния тракт.
Известни са десетки подобни негативни взаимодействия за основните микроелементи, включени в комбинираните витаминно-минерални препарати.
За съжаление, съвременните лекарствени форми на витаминно-минералните комплекси, разгледани по-горе, могат да предотвратят само някои от тези нежелани взаимодействия.
Най-лесният начин е да предотвратите нежелан контакт на компонентите по време на съхранение. Например отделното гранулиране на смеси, съдържащи витамини С и В12, спомага за защитата на последните от окисление.
Но ако е необходимо да се вземат предвид няколко такива взаимодействия, тогава усложняването на технологичния процес се оказва неприемливо по икономически причини.
Нежеланите взаимодействия на микроелементите в стомашно-чревния тракт, когато компонентите на антагониста имат различни места на абсорбция, могат да бъдат избегнати чрез използване на гранули, които се различават по време на разтваряне или приготвяне на многослойни таблетки при таблетиране. За съжаление, повечето микронутриенти се абсорбират най-добре в една и съща област на стомашно-чревния тракт - в проксималните тънки черва, през които химусът преминава за достатъчно време. кратко време(около 3 часа).
Например, за да се предотврати намалената абсорбция на желязо от таблетка с витаминно-минерален комплекс, беше предложено желязото да се постави в слабо разтворимото ядро ​​на таблетката и да се въведе калций и други двувалентни метали в разтворимия външен слой. За съжаление, методът се оказва неефективен, тъй като докато ядрото се освободи и разтвори, таблетката е напуснала оптималното място за абсорбция в стомашно-чревния тракт.
Почти невъзможно е да се използват технологични методи за намаляване на ефекта от негативните взаимодействия на витаминно-минералния комплекс върху метаболитните пътища на тялото. Това изисква координирана промяна във фармакокинетиката на компонентите.
Максимум ефективен методЗа да се предотвратят отрицателни взаимодействия между компонентите на витаминно-минералните комплекси днес е да се раздели приемът на антагонистични микроелементи на интервали от 4 часа.

Литература
1. Kharkevich D.A. Фармакология. Учебник за студенти по медицина образователни институции. Москва, издателство къща "ГЕОТАР-МЕД". 2001 г.
2. Тутелян В.А., Спиричев В.Б., Суханов Б.П., Кудашева В.А. Микроелементи в храненето здрав човек. Москва, Колос. 2002 г.
3. Коржавих Е.А., Румянцев А.С. Таблетки и техните разновидности, Руски аптеки, 2003 г., № 12.
4. О.С.Медведев под печат
5. Theeuwes F. Елементарна осмотична помпа. J. Pharm. Sci. 64, 1987-1991 (1975).
6. Theeuwes F. et al. Елементарна осмотична помпа за индометацин. J. Pharm. Sci. 72, 253-258 (1983).
7. Семенчук М. Р. Авинза Елан. Curr. мнение разследване. лекарства. 3, 1369-1372 (2002).
8. Джангуидо Ринди и Умберто Лафоренца. Чревен транспорт на тиамин и свързани с него проблеми: последни аспекти. Proc Soc Exp Biol Med 2000 224:246-255
9. Земплени Дж., Галоуей Дж.Р. и Маккормик Д.Б. Фармакокинетика на орално и интравенозно прилаган рибофлавин при здрави хора. Am J Clin Nutr 1996 63:54-66
10. Paul Holman M.A., B.Chir., M.R.C.Psych. Препечатано от. Вестник на Австралийския колеж по хранителна и екологична медицина том. 14 бр. 1; Юли 1995 г.: страници 5-16 ПИРИДОКСИН – ВИТАМИН B-6
11. ЕВРОПЕЙСКА КОМИСИЯ. ГЕНЕРАЛНА ДИРЕКЦИЯ "ЗДРАВЕОПАЗВАНЕ И ЗАЩИТА НА ПОТРЕБИТЕЛИТЕ". Дирекция C - Научни становища. C3 - Управление на научни комитети II; научно сътрудничество и мрежи. Научен комитет по храните. SCF/CS/NUT/UPPLEV/42 Финал. 28 ноември 2000 г
12. Traber M.G., Rader D., Acuff R.V., Ramakrishnan S., Brewer H.B., Kayden. Витамин Е
проучвания за отговор на дозата при хора, използващи деутериран RRR-алфа-токоферол. Am J Clin Nutr 1998; 68:847-53.
13. Pereira SP, Shearer MJ, Williams R, Mieli-Vergani G. Чревната абсорбция на смесен мицеларен филохинон (витамин К1) е ненадеждна при кърмачета с конюгирана хипербилирубинемия: последици за оралната профилактика на кървене от дефицит на витамин К. Арх. дис. дете. Фетален неонатален изд. 2003 г.; 88: F113-F118.
14. Патент на САЩ 4,752,479.
15. Ших Е.В. Витаминният статус и неговото възстановяване с помощта на фармакологична корекция витаминни препарати. Дисертация за научна степен доктор на медицинските науки. RAMS. Москва, 2002 г.