Фибробласти. Функции на фибробластите. Междуклетъчно вещество. Фибробласти, фиброцити и фиброкласти (клетки) Фибробластните клетки нямат постоянна клетъчна форма

Апоетът-роб от 11-ти век Ал-Маари веднъж възкликна горчиво: „Изглежда ни, че младостта няма износване, но годините се търкалят като камъни от склона.“ Оттогава минаха векове. Учените и лекарите не губят време: те работят, за да дадат на човечеството техники, които могат да забавят процеса на стареене. Една от най-модерните технологии против стареене е фибробластната терапия - надеждна и безопасна процедура, която осигурява невероятни резултати. Позволява ни да върнем пролетта на живота – времето, когато изглеждаме страхотно дори след безсънна нощ. Ако кожата ви се нуждае от истинско подмладяване и искате да изглеждате по-млади всеки ден, съвременните клетъчни технологии ще ви помогнат да постигнете желания резултат.

ПВодещите клиники в Европа и САЩ отдавна са възприели прогресивния метод за подмладяване на фибробластите. През последните 7 години няколко хиляди американци са участвали в клинични изпитания на тази технология, които показват невероятни ефекти против стареене, които се проявяват в рамките на няколко седмици при някои пациенти и само след няколко месеца при други. След въвеждането на фибробласти пациентите отбелязват дългосрочно подобрение на качеството на кожата, чиито положителни ефекти се натрупват до 18-24 месеца и остават стабилни в продължение на 7 или повече години. Резултатите от изследването бяха толкова убедителни, че процедурата беше одобрена от много реномирани медицински институции (например ISA (Агенция за контрол и администриране на лекарства)).

дДоскоро нашите сънародници трябваше да отидат в Англия, Швейцария или САЩ и да плащат там огромни суми, за да преминат курс на клетъчна терапия. Днес в Русия се предлагат процедури с използване на автоложни фибробласти.

ИПовече от една докторска дисертация е посветена на изучаването на фибробластите в нашата страна, много сериозни медицински институции ги изучават (например Института по хирургия на А. В. Вишневски на Руската академия на медицинските науки). Защо тези клетки на човешкото тяло привличат толкова голям интерес от страна на учените? Всичко се дължи на техния безпрецедентен подмладяващ потенциал. Те съдържат същата магическа формула на вечната младост, която хората се опитват да извлекат в продължение на много векове.

Какво представляват фибробластите и за какво служат?

Думата фибробласт съдържа два корена - "fibra", което означава "влакно", и "blastos" - "кълнове". Фибробластите са клетки на съединителната тъкан, които имат ядро ​​и се характеризират с кръгла или вретеновидна форма и множество израстъци. Това са най-ценните клетки на средния слой на кожата (дермата), които са част от стромално-васкуларната фракция, която основно се разделя на 2 групи:

1. Съдови (съдови) клетки: ендотелни, перицити, гладкомускулни, циркулиращи кръвни клетки - еритроцити, левкоцити, моноцити, макрофаги, Т-лимфоцити, преадипоцити.

2. Фибробластоподобни клетки, които включват самите фибробласти и техните прекурсори - стромални (известни още като мултипотентни, мезенхимни) стволови клетки.

Това не е публична оферта! Има противопоказания. Преди употреба е необходима консултация със специалист.

Въз основа на горната класификация става ясно, че фибробластите не са стволови клетки, а техните по-зрели и високо организирани последователи. За разлика от стволовите клетки, които могат да породят клетки от всяка тъкан в тялото ни, фибробластите могат да се превърнат само в нискоактивни фиброцити.

Без фибробласти поддържането на структурната цялост на съединителната тъкан не би било възможно, така че ролята на фибробластите е трудно да се надценява - това са мощни фабрики, които произвеждат и постоянно обновяват структурните компоненти на дермата и междуклетъчното вещество, както и много биологично активни вещества. вещества, които влияят на процесите на регенерация:

1. Именно фибробластите синтезират съставните компоненти на съединителната тъкан, за чието възпроизвеждане се разработват най-модерните и високотехнологични козметични процедури. Става дума за колаген, еластин и хиалуронова киселина - естествени вещества на дермата, които осигуряват нейния тургор, стегнатост, еластичност и влага. Благодарение на фибробластите се произвеждат и протеогликан, фибронектин, хондроитин сулфат, ламинин и други елементи на междуклетъчния матрикс, които са отговорни за красотата и здравето на кожата.

2. Фибробластите постоянно обновяват дермата и не позволяват на увредените влакна да се натрупват в нея. Ензимите, секретирани от фибробластите, унищожават остарелия, стар и повреден еластин, колаген и хиалуронова киселина, като същевременно ги заменят с нови и здрави. Процесът на разрушаване и възстановяване протича непрекъснато, осигурявайки обновяването на междуклетъчното вещество. Обмяната на хиалуронова киселина се извършва особено интензивно.

3. Фибробластите са уникалните лечители на нашето тяло. В случай на някакво увреждане, те „бягат“ с кръвния поток към мястото на нараняване и осигуряват възможно най-бързо възстановяване на увредените участъци, заздравяване на рани и епителизация (бързо възстановяване на епидермиса - повърхностния слой на кожата).

Това не е публична оферта! Има противопоказания. Преди употреба е необходима консултация със специалист.

П Първата задача, преследвана от фибробластите, е да възстановят бариерата за поддържане на постоянна вътрешна среда, т.е. „запълнете дупките“. Поради това те започват да се делят много активно и в авариен режим произвеждат молекули на съединителната тъкан, които в бързината образуват големи, груби, незрели, разположени хаотично в тъканите. Така се появява първият белег - червен, плътен, нееластичен, "слаб".

Е ибробластите се размножават много по-бързо от епидермалните клетки, следователно, ако увреждането на базалната мембрана е повече от 5 mm, белегът ще излезе на повърхността. Ако е по-малко, ще се възстанови пълната дебелина на кожата.

З Тогава фибробластите започват да произвеждат ензими, които разрушават влакната и постепенно ги заменят със зрели, еластични, структурни. И белегът бледнее, става еластичен, тънък, издръжлив.

4. Фибробластите са отговорни и за регенерацията на кожата (възстановяване, обновяване), тъй като те произвеждат много важни растежни фактори - регулаторни протеини (тъканни хормони), чиято функция е да стимулират деленето и растежа на дермалните и епидермалните клетки, както и образуването на на нови кръвоносни съдове. Ние изброяваме само някои от растежните фактори, произведени от фибробластите:

Основният фибробластен растежен фактор (bFGF) е отговорен за образуването и развитието на всички видове кожни клетки и кара фибробластите активно да произвеждат колагенови и еластинови влакна и хиалуронова киселина.

Трансформиращият растежен фактор (TGF-бета) е отговорен за бързото възстановяване на увредената дерма. Той привлича фибробластите към мястото на увреждане и активира производството им на колагенови влакна и фибронектин - вещества, които осигуряват възстановяването на увредената кожа.

Трансформиращите растежни фактори (TGF-алфа, a-NGF) причиняват неоангиогенеза, процесът на образуване на нови кръвоносни съдове в кожата.

Епидермалния растежен фактор (EGF) ускорява деленето и узряването на кератиноцитите.

Кератиноцитният растежен фактор (KGF) ускорява заздравяването и епителизацията на рани чрез стимулиране на пролиферацията и развитието на епидермалните клетки (кератиноцити).

5. Травмата е вид сигнал за фибробластите, принуждавайки ги да се делят с ускорени темпове и да произвеждат растежни фактори, които от своя страна привличат фибробласти и други клетки към мястото на увреждане, осигурявайки възстановяването на увредената тъкан.

Това не е публична оферта! Има противопоказания. Преди употреба е необходима консултация със специалист.

Уникални свойства на фибробластите

1. Клетките на нашето тяло не могат да се размножават безкрайно и техният брой намалява с приблизително 10-15% на всеки 8-10 години. Освен това процесът протича в геометрична прогресия. Това е така, защото всеки път, когато една клетка се дели, малка част от ДНК се губи. Първо се губят участъци от ДНК (теломери), които не носят важна информация за функционирането на клетката. С всяко деление дължината на теломерите намалява и когато те „свършат” и има заплаха от загуба на ДНК фрагменти, които носят значима информация за клетката, нейното делене спира. Максималният възможен брой деления е средно 50 ± 10 и се нарича "граница на Хейфлик" в чест на американския учен, открил този феномен през 1961 г. Отчитането на броя на деленията започва в ембрионалния период и след изчерпване на лимита започва стареенето на клетките, тъканите и организма като цяло.

2. Преди това имаше мнение, че с течение на времето фибробластите губят способността си да се делят и се превръщат във фиброцити - зрели клетки, характеризиращи се с ниска активност. Въпреки това, в резултат на научни изследвания беше установено, че въпреки факта, че броят на фибробластите намалява с възрастта, те не губят своите функционални качества и все още могат да се делят, но по някаква причина те спират да правят това, те просто „заспива“ и при необходимост може да се върне в активна форма. Очевидно причината за това се крие в наличието на ензима теломераза, който след всяко клетъчно делене възстановява дължината на теломерите, като по този начин увеличава броя на деленията на фибробластите. За първи път този механизъм, който осигурява способността за безкрайно делене, е открит в стволовите клетки.

д Това откритие доведе до разработването на техника за култивиране на автоложни фибробласти с последващата им трансплантация в дермата на пациента. Процедурата по същество е въплъщение на мечтата за вечна младост, тъй като включва не само премахване на признаците на възрастта, но и въздействие върху самата причина за стареенето на кожата.

Това не е публична оферта! Има противопоказания. Преди употреба е необходима консултация със специалист.

3. Възрастта на донора на фибробластите няма значение за продължителността на живота, функционалната активност и способността им за делене. Това явление се дължи на факта, че по време на процеса на отглеждане настъпва тяхното подмладяване. До този извод стигнаха Кристофало и съавтори след провеждане на дългогодишни изследвания. Според него в лабораторни условия клетките се връщат в състояние, характеризиращо се с висока функционална активност и техните свойства се доближават до мезенхимните стволови клетки.

4. Чрез изолиране на фибробласти от парче от кожата на пациента се получава първична клетъчна култура, съдържаща както млади, така и стари клетки. След това всички тези клетки се поставят в среда, съдържаща фетален серум, т.е. до условия, които се наблюдават в ембрионално състояние. Това стимулира деленето на млади клетки, които са запазили висока способност за растеж, и разреждането или измиването на културата на стари клетки, които са загубили способността си да пролиферират. Така културата сякаш се подмладява. Освен това, според Макинодан, старите клетки се реактивират при такива условия и впоследствие, когато бъдат въведени в дермата, те я заселват и интензивно синтезират целия комплекс от компоненти на извънклетъчния матрикс и растежни фактори, необходими за поддържане на кожата на пациента в оптимално физиологично състояние. .

Важно е да се отбележи, че говорим за собствените клетки на пациента, които, когато узреят, няма да бъдат абсорбирани от макрофагите, за разлика от трансплантираните донорни клетки.

5. По време на процеса на култивиране фибробластите губят чуждия ген и също така не могат да причинят рак, което прави възможно използването на „чужди“ донорни клетки за терапия, което вече е доказано от многогодишни клинични изпитвания. Техниката за култивиране на фибробласти се появява за първи път през 1968 г. и се използва за ускоряване на заздравяването на рани. През 1998 г. FDA одобри първия клетъчен продукт на базата на фибробласти, Apligraf, за използване в камбустиологията (лечение на изгаряния). И едва след това се появи ново направление в естетичната медицина, а именно фибробластна терапия при възрастови промени, а в стоматологията - лечение на възпаление на венците. Вярно е, че първоначално са използвани само донорски фибробласти.

Механизмът на действие на този метод е свързан със способността на фибробластите да синтезират колаген, еластин, хиалуронова киселина и други компоненти на междуклетъчното вещество, както и растежни фактори, което ускорява деленето и растежа на епитела и в крайна сметка води до възстановяването на повърхностния и средния слой на кожата - епидермиса и дермата.

Това не е публична оферта! Има противопоказания. Преди употреба е необходима консултация със специалист.

6. При всяко термично нараняване на кожата (изгаряне или измръзване) настъпва увреждане на кожата и тежесттавъзпалителни явления и продължителност (а понякога и способността за възстановяване) зависи от дълбочината на увреждането му:

I степен– зачервяване, подуване на кожата (отшумява след 3-4 дни) и болка (продължава 1-2 дни) поради обратимо увреждане на повърхностните слоеве на епидермиса. В козметологията такова увреждане на кожата се причинява специално с помощта на повърхностен химически или лазерен пилинг с цел подмладяване.

азI степен– образуване на мехури, пълни с прозрачно съдържание в резултат на смъртта на слоевете на епидермиса (до базалния, зародишния слой) и тяхното отделяне. Силна болка и парене продължават известно време на мястото на изгаряне, но в рамките на 10-14 дни целостта на епидермиса се възстановява напълно без белези. Отговаря на средни пилинги.

IIIа степен– непълна некроза на кожата със запазване на дермата и нейните производни – потни и мастни жлези, космени фоликули, от чийто епител епидермисът се възстановява самостоятелно в рамките на 4–6 седмици, понякога с образуване на кожни белези с участъци на хипер - и депигментация.

IIIб степен– пълна некроза на цялата дебелина на кожата.

IV степен– некроза на кожата и разположените под нея тъкани. Епителизацията в такива случаи е възможна само от ръбовете на раната и се извършва много бавно. Само малка рана може да заздравее сама, защото... възможността за възстановяване на епидермиса по краищата на раната е не повече от 5 mm.

Това не е публична оферта! Има противопоказания. Преди употреба е необходима консултация със специалист.

Важна характеристика, която разграничава степени IIIa и IIIb, е запазването на чувствителността към болка в първия случай. При деца преди пубертета подобни изгаряния доста често зарастват с образуването на хипертрофични белези. На това ниво се извършва дълбок лазерен пилинг или дълбок химичен пилинг на кожата. Може би това е само на лицето, което се характеризира с много голям брой кожни придатъци, висока способност за регенерация, много активен метаболизъм в клетките и кръвоснабдяване. В други области на кожата на нашето тяло подобни агресивни въздействия неизбежно водят до образуване на белези.

При повърхностни изгаряния от I, II и IIIа степен се прилагат фибробласти за комплексно лечение на големи по площ рани с цел ускоряване на епителизацията. За дълбоките - в комбинация с трансплантация на собствена кожа, което изисква много по-малко.

7. Автоложни (собствени) и донорски култивирани фибробласти не предизвикват алергични реакции или туморогенеза след трансплантация. Организмът ги разпознава като свои, а не като чужди клетки и затова не включва механизма за защита срещу тях.

Важен нюанс е, че подмладяващият ефект на собствените култивирани фибробласти е много по-продължителен от аналогичния ефект на донорните клетки. С течение на времето последните все още се разпознават и усвояват от имунните клетки на тялото ни, така че резултатът остава стабилен за не повече от 2 години.

Това не е публична оферта! Има противопоказания. Преди употреба е необходима консултация със специалист.

Характеристики на стареенето

А Американски учени публикуваха данни, според които след 44 години за жените (на базата на средна продължителност на живота от 78,8 години) и след 40 години за мъжете (на базата на средна продължителност на живота от 72,6 години) човек неизбежно започва да се сблъсква с болести. С други думи, почти половината от живота си той е обречен да избледнява, страдайки от болести и недъзи. Първите признаци на разрушителния процес на стареене се появяват още на 30-годишна възраст. Ситуацията се утежнява от съвременния ритъм на живот, свързан с психическо претоварване, което има най-пагубен ефект върху човешкото тяло.

ДА СЕ Както бе споменато по-горе, благодарение на активността на фибробластите, дермата непрекъснато се обновява поради баланса на два многопосочни процеса: унищожаване на остарели, стари влакна и синтез на нови. НО в определен момент по някаква причина (все още неизяснена, тъй като това явление може да започне при хора на различна възраст) способността на фибробластите да делят и синтезират вещества намалява. В същото време процесът на разрушаване на старите влакна ще продължи дълго време, което ще доведе до намаляване на обема на съединителната, мускулната, костната и други видове тъкани. Тоест процесът на разрушаване започва да надделява над процеса на съзидание.

Благодарение на клетъчния резерв, предоставен от природата, последствията от дисбаланса остават незабележими в продължение на няколко години. Междувременно след 40-45 години никой не може да избегне промените, свързани с възрастта, и понякога те ни застигат като лавина, а за много жени този период е свързан с началото на менопаузата и началото на хормоналното стареене. Ето защо Виктор Юго нарича тази възраст „старостта на младостта“. След известно време процесът на смърт на клетките и тъканите спира, отново се установява баланс между творческите и разрушителните процеси, но до тази възраст човек се превръща в „свит“ старец или жена. При стареенето на кожата дебелината на дермата намалява, съдържанието на влага в нея намалява, в резултат на това кожата губи своята стегнатост и еластичност. Последицата от това е разтягане на кожата и образуване на бръчки.

Това не е публична оферта! Има противопоказания. Преди употреба е необходима консултация със специалист.

П Процесите на обновяване и регенерация на тъканите се забавят, което води до неприятни последици:

- основният (зародишен, регенеративен) слой става по-тънък, образуват се по-малко кератиноцити;

Епидермалните клетки (рогови люспи) изтъняват;

Процесът на отстраняване на роговите люспи от повърхността на кожата се забавя, в резултат на което роговият слой става по-дебел;

Дермата бързо губи дебелина, броят и размерът на фибробластите, макрофагите, тъканните базофили и други дермални клетки намалява. Те престават да се справят с функциите си, което рано или късно води до дефицит на колаген, еластин и междуклетъчно вещество. Започвайки около 25-годишна възраст, синтезът на колаген и еластин – влакната, които правят кожата да изглежда стегната и здрава – намалява с 1% годишно.;

Структурата на еластиновите и колагеновите влакна се деформира: те стават по-дебели, по-твърди, отколкото трябва да бъдат нормално, подредеността на тяхното разположение е нарушена;

Тялото произвежда все по-малко хиалуронова киселина, което води до загуба на влага в дермата, което води до суха кожа, образуване на микропукнатини и бръчки по нея, намаляване на нейната еластичност и тургор;

Кръвоснабдяването и снабдяването с хранителни вещества на дермалните клетки се влошава;

Процесите на възстановяване са бавни.

Горните промени не могат да не повлияят на външния вид на кожата. Усещането за сухота и опъване на кожата постепенно се засилва, кожата става отпусната, тънка, нееластична, покрита с фини бръчици и старчески петна. С времето всички тези признаци на стареене се натрупват и стават по-изразени. Особено бързо стареят откритите участъци от кожата и гънките.

Това не е публична оферта! Има противопоказания. Преди употреба е необходима консултация със специалист.

Подмладяването на фибробластите спира процеса на стареене

ннасищането на дермата с млади фибробласти е най-естественият, ефективен метод за подмладяване и предотвратяване на стареенето, тъй като ви позволява да съживите структурата на дермата, а при по-възрастни пациенти това е заместителна терапия.

U Уникална процедура за клетъчно подмладяване на кожата, базирана на използването на автоложни фибробласти, спира процеса на намаляване на резервите на собствените клетки на дермата. Техниката не само коригира промените, свързани с възрастта, но ги засяга на ниво микротекстура: младите фибробласти подмладяват дермата отвътре и също така стимулират активността на онези фибробласти, които присъстват в тялото. В резултат на това се увеличава скоростта на делене на клетките, повърхностният слой на кожата се обновява по-бързо, образуват се нови млади колагенови и еластинови влакна и се увеличава съдържанието на хиалуронова киселина в дермата. Отново се наслаждавате на вида на сияйна, кадифена кожа и забравяте за дълго време за бръчките, разширените пори, старческите петна, лющенето и сухотата.

ДА СЕ Терапията с маруля се справя дори със стрии - дефекти, които е почти невъзможно да се премахнат с други минимално инвазивни техники. Фибробластите не само спират биологичния часовник, но го принуждават да върви в обратна посока. И ако след известно време тяхната активност намалее и те заспят, тогава простите методи на физическа травма, проникващи в дермата (като диодно и лазерно подмладяване на кожата с въглероден диоксид), ще ги събудят отново и ще ги принудят да работят дълго време, значително засилва подмладяващия ефект.

Това не е публична оферта! Има противопоказания. Преди употреба е необходима консултация със специалист.

INВъвеждането на фибробласти, култивирани в лабораторията, в дермата ви позволява да възстановите еластичността и стегнатостта, характерни за младостта на кожата. Освен това, ако в бъдеще правите козметични процедури или пластични операции, ще получите много по-изразен ефект от тези, които първо не са активирали собствените си фибробласти и не са попълнили запасите им.

СЪС Невероятният ефект от използването на автоложни фибробласти вече е оценен от много известни личности. В крайна сметка резултатите от процедурата са наистина невероятни: мрежа от малки бръчки изчезва без следа, дълбоките гънки се изглаждат. Ден след ден гледате в огледалото как кожата става по-сияйна и еластична, тонусът й се подобрява, мрежата от малки бръчици се изглажда, а тенът става здрав. Вратът и ръцете вече не показват възраст - кожата на тези части на тялото придобива тонизиран вид и пълнота. Трансплантацията на култивирани фибробласти повишава защитните бариерни свойства на кожата, което означава, че неблагоприятните фактори и стресът няма да могат да откраднат младостта и красотата.

T Терапията с автоложни фибробласти е много по-ефективна от инжекциите с ботокс, които при продължителна и честа употреба могат да причинят увреждане на нервните окончания и нарушаване на храненето на кожата.

П Освен това въвеждането на фибробласти е по-ефективно от заместителната терапия с хиалуронова киселина, която подмладява кожата за кратък период от време и след това трябва да се повтори. При честа употреба и с течение на времето тялото започва да произвежда антитела срещу изкуствената хиалуронова киселина и унищожаването на инжектираните лекарства става все по-бързо. В допълнение, въвеждането на излишък (особено преди 35-годишна възраст!) на хиалуронова киселина има инхибиторен ефект върху синтеза на структурните компоненти на кожата от фибробластите, като по този начин индиректно ускорява стареенето.

Това не е публична оферта! Има противопоказания. Преди употреба е необходима консултация със специалист.

Показания за фибробластна терапия:

Предотвратяване на стареенето - инжекциите могат да започнат на 40-годишна възраст, като по този начин се извършва заместителна терапия;

Подмладяването на кожата на лицето, шията, деколтето, ръцете премахва признаците на стареене: изтъняване, отпуснатост, намален тургор и еластичност, пигментация, атрофия и фини бръчки;

Подобряване на качеството на кожата на тялото: корем, гръб, бедра. Фибробластната терапия повишава еластичността и тонуса, като по този начин осигурява лифтинг ефект;

Премахване на пигментацията около очите;

Ускоряване на „узряването” на млади белези – на възраст до 12 месеца;

Лечение на белези след акне;

Лечение на стрии;

Подготовка за пластична операция и бързо възстановяване след нея;

Ускоряване на възстановяването след пилинги, лазерни процедури и др.

Противопоказания за фибробластна терапия:

Остри инфекциозни заболявания;

Обостряне на хронични заболявания;

Автоимунни заболявания на съединителната тъкан;

Склонност към келоидни и хипертрофични белези;

Онкологични заболявания;

Дългосрочна стероидна терапия;

Бременност, кърмене.

Фибробластна терапия

д Ако говорим за терапия с автоложни фибробласти просто, тя се състои от няколко етапа:

1. Вземане на парче кожа. Може да се вземе от всяка част на тялото, важно е само да се поддържа размерът - около 5 * 1,5 см. Броят на фибробластите, които ще бъдат получени в лабораторията на Покровската банка за стволови клетки (с която нашата клиника си сътрудничи) зависи от размера на взетата кожна област. За правилното насищане на кожата с млади клетки е необходимо в една процедура (по специална техника!) да се въведат достатъчен брой фибробласти (около 2-3 милиона на 1 ml). Затова лабораторните технолози искат по-голямо парче кожа.

Това не е публична оферта! Има противопоказания. Преди употреба е необходима консултация със специалист.

Най-често го отстраняваме чрез изрязване на здрава кожа по протежение на съществуващите белези по тялото от предишни операции или наранявания, а при липса на такива - от областта на слабините. След заемане на необходимата площ раната се зашива послойно, завършвайки с интрадермален шев, който премахваме 7-10 дни след операцията. Впоследствие на това място ще остане тънък, незабележим шев, подобен на нишка, който лесно се прикрива дори в най-отворените бикини.

За да завършите този етап, трябва да вземете кръвни изследвания: общи клинични, биохимични (глюкоза, ALT, AST, билирубин, урея, креатинин) и коагулограма.

Кожата, отстранена по време на естетични операции (лифтинг на лицето, блефаропластика, абдоминопластика и др.), е подходяща за изолиране и култивиране на фибробласти. Много пациенти искат да повторят процедурата в бъдеще и технолозите незабавно култивират две порции фибробласти, едната от които се съхранява в криогенна камера до подходящия момент - така че следващия път да не се налага да премахват парче кожа.

2. Изолиране и култивиране на фибробласти в лабораторията на Покровската банка за стволови клетки: парче кожа се натрошава, третира се със специални ензими и се измива с физиологичен разтвор. След това освободените клетки се утаяват в центрофуга и се засяват върху специална хранителна среда. Те се размножават до необходимото количество, отстраняват се от субстрата, почистват се от остатъчни среди и се утаяват в центрофуга.

3. Системата за контрол на качеството на фибробластите, получени в резултат на култивиране, е много важна. За да направите това, клетките с онкогенен потенциал се наблюдават и отстраняват ежедневно от културата: ежедневно наблюдение на формата, структурата, активността на клетъчната пролиферация, както и ДНК тестване и, ако е необходимо, нивото на експресия (изолиране) на онкогенни маркери. Освен това контролът на качеството включва анализ за бактериално замърсяване и липса на вируси на ХИВ и хепатит. За всяка порция клетки се предоставя фибробластен паспорт, в който са посочени името на донора, дата, час на производство, брой клетки в 1 ml и отрицателни резултати от изследвания за онкогенност и инфекции.

Възможни са и други варианти - или се въвеждат във физиологичен разтвор по метода на мезотерапията (за подмладяване), или се поставят върху специален гелоносител (за зарастване на рани и изгаряния). Целият този процес може да отнеме от 4 до 6 седмици.

Това не е публична оферта! Има противопоказания. Преди употреба е необходима консултация със специалист.

4. Всяка порция клетки се подготвя не само за определена дата, но и за предварително определено време, защото... фибробластите извън човешката тъкан са уязвими и трябва да бъдат инжектирани в рамките на 6 часа, т.к. след това те ще умрат. Фибробластите се инжектират 5 пъти с интервал от 2 седмици чрез мезотерапевтична техника в горните слоеве на кожата. Тази техника осигурява стабилни резултати и подмладяващ ефект. В този случай правилото работи добре: колкото по-голяма е площта на третиране, толкова по-значително е подмладяването.

Р Резултатът от терапията със собствени фибробласти е кумулативен, проявява се на ниво усещане 1-1,5 месеца след началото на процедурите (обикновено на третия) и след това постепенно се засилва до 12-18 месеца, след което остава стабилен за 5 години или повече. Това е метод за естествено подмладяване на кожата, абсолютно безопасен, високоефективен и дълготраен. Въвеждането на фибробласти е насочено към подобряване на качеството на кожата, т.е. неговия тургор, тон, цвят, плътност и др., НО никога не води до повдигане!

д Ако започнете да забелязвате, че фибробластите намаляват своята активност, те могат лесно да бъдат стимулирани с лазерна терапия (CO, диоден, неодимов лазер, действащ над дермата), чийто ефект ще бъде много по-изразен и забележим.

ПОЛИПЛОИД - организъм, произлязъл от една или две родителски форми чрез удвояване на броя на хромозомите. Феноменът на увеличаване на броя на хромозомите се нарича. полиплоидия. Това удвояване може да бъде спонтанно или изкуствено предизвикано. Явлението полиплоидия е открито за първи път от И. И. Герасимов през 1890 г.

ПОЛИПЛОДИЯ еувеличаване на броя на наборите от хромозоми в клетките на тялото, кратно на хаплоидния (единичен) брой хромозоми; геномен тип мутации. Зародишните клетки на повечето организми са хаплоидни (съдържат един набор от хромозоми - n), докато соматичните клетки са диплоидни (2n).

Организми, чиито клетки съдържат повече от два набора хромозоми, се наричат ​​полиплоиди: три комплекта - триплоидни (3n), четири - тетраплоидни (4n) и др. Най-често срещаните организми с брой хромозомни набори, кратен на две, са тетраплоиди, хексаплоиди (6 n) и т.н. Полиплоидите с нечетен брой комплекти хромозоми (триплоиди, пентаплоиди и т.н.) обикновено не произвеждат потомство (стерилни), тъй като половите клетки, които образуват, съдържат непълен набор от хромозоми - не кратен на хаплоидният.

Полиплоидията може да възникне, когато хромозомите не се разделят мейоза. В този случай зародишната клетка получава пълния (нередуциран) набор от хромозоми на соматичната клетка (2n). Когато такава гамета се слее с нормална (n), се образува триплоидна зигота (3n), от която се развива триплоид. Ако и двете гамети носят диплоидния комплект, възниква тетраплоид.

Полиплоидните клетки могат да възникнат в тялото, когато митоза: След удвояване на хромозомите, клетъчното делене може да не настъпи и то завършва с два комплекта хромозоми. В растенията тетраплоидните клетки могат да дадат начало на тетраплоидни издънки, чиито цветове ще произвеждат диплоидни гамети вместо хаплоидни. Самоопрашването може да доведе до тетраплоид, докато опрашването от нормална гамета може да доведе до триплоид. По време на вегетативното размножаване на растенията плоидността на оригиналния орган или тъкан се запазва.

Полиплоидията е широко разпространена в природата, но е неравномерно представена сред различните групи организми. Този тип мутация е от голямо значение в еволюцията на диви и култивирани цъфтящи растения, сред които ок. 47% от видовете са полиплоиди. Характерна е висока степен на плоидност най-простият– броят на комплектите хромозоми в тях може да се увеличи стотици пъти. Сред многоклетъчните животни полиплоидията е рядка и е по-характерна за видове, които са загубили нормалния полов процес - хермафродити (виж. Хермафродитизъм), напр. земни червеи и видове, при които яйцата се развиват без оплождане (вж. Партеногенезата), напр. някои насекоми, риби, саламандри. Една от причините, поради които полиплоидията при животните е много по-рядко срещана, отколкото при растенията, е, че при растенията е възможно самоопрашване и повечето животни се размножават чрез кръстосано оплождане и следователно полученият полиплоиден мутант се нуждае от двойка - същият мутант - полиплоид от другия пол.Вероятността за такава среща е изключително ниска. Доста често при животните клетките на отделните тъкани са полиплоидни (например при бозайници - чернодробни клетки).

Полиплоидните растения често са по-жизнеспособни и плодородни от нормалните диплоиди. Тяхната по-голяма устойчивост на студ се доказва от увеличаването на броя на полиплоидните видове във високите географски ширини и високите планини.

Тъй като полиплоидните форми често имат ценни икономически характеристики, изкуствената полиплоидизация се използва в растениевъдството за получаване на първоначален разплоден материал. За тази цел специални мутагени(напр. алкалоидът колхицин), които нарушават хромозомната сегрегация при митоза и мейоза. Получени са добивни полиплоиди от ръж, елда, захарно цвекло и други културни растения; стерилните триплоиди от диня, грозде и банани са популярни поради плодовете си без семена.

Приложение на дистанционно хибридизацияв комбинация с изкуствена полиплоидизация позволи на местните учени още през 1-вата половина. 20-ти век за първи път за получаване на плодородни полиплоидни хибриди на растения (G.D. Karpechenko, тетраплоиден хибрид на репичка и зеле) и животни (B.L. Astaurov, тетраплоиден хибрид на копринена буба).

(Полиплоидна серия)

Има:

- автополиплоидия(многократно увеличаване на броя на комплектите хромозоми от един вид), характерно, като правило, за видове с вегетативен метод на възпроизвеждане (автополиплоидите са стерилни поради нарушение на конюгацията на хомоложни хромозоми по време на процеса на мейоза) ,

-алополиплоидиясумирането на броя на хромозомите от различни видове в тялото), когато броят на хромозомите в безплоден диплоиден хибрид обикновено се удвоява и в резултат на това той става плодороден.

- ендополиплодия-просто увеличаване на броя на хромозомите в една клетка или в клетките на цяла тъкан (tapetum).

Както може да се види от диаграмата, митотичната полиплоидизация възниква в резултат на удвояване на броя на хромозомите в соматична клетка без последващо образуване на клетъчна преграда. При зиготна полиплоидизация образуването на зиготи протича нормално, но първото разделение според вида на митозата не е придружено от разделянето му на две клетки. В резултат на това клетките на получения ембрион ще имат двоен набор от хромозоми (4x). И накрая, мейотичната полиплоидизация се случва при липса на намаляване на броя на хромозомите в генеративните клетки (яйцеклетка, сперма).

Спонтанна полиплоидизация-явлението е много рядко. В проучвания най-често се използват топлинен шок и азотен оксид за получаване на полиплоиди. Истински напредък в изследването на полиплоидията обаче е постигнат след откритието на Blakeslee et al през 1937 г. колхоцин алкалоид(C 22 H 26 O 6), получен от colchicum. Оттогава успешно се използва за получаване на полиплоиди в стотици растителни видове. Колхицинът действа върху вретеното на делене в клетката, предотвратявайки разминаването на хромозомите към полюсите на етапа на анафазата, като по този начин насърчава удвояването на техния брой в ядрото: виж Фиг.

Апикалните меристеми са изложени на колхицин, което прави възможно получаването на напълно плодородни форми на растения с двоен брой хромозоми.

Полиплоидията е важна в еволюцията на култивирани и диви растения (смята се, че около една трета от всички растителни видове са възникнали поради полиплоидия), както и някои групи животни (предимно партеногенетични). Полиплоидите често се характеризират с големи размери, повишено съдържание на редица вещества и устойчивост на неблагоприятни външни фактори. среда и други икономически полезни характеристики. Те представляват важен източник на променливост и могат използва се като изходен материал за развъждане (на базата на P. са създадени високопродуктивни сортове селскостопански растения, устойчиви на болести). В широк смисъл терминът "P." разбират както множествени (еуплоидия), така и немножествени (анеуплоидия) промени в броя на хромозомите в клетките на тялото.

· Автополиплоидия- наследствена промяна, многократно увеличаване на броя на наборите от хромозоми в клетките на организъм от същия биологичен вид. Въз основа на изкуствена автополиплоидия са синтезирани нови форми и сортове ръж, елда, захарно цвекло и други растения.

Автополиплоид- организъм, възникнал чрез спонтанно или индуцирано директно удвояване на броя на хромозомите. Увеличаването на броя на хрома в автополиплоидната клетка води до увеличаване на размера на ядрото и клетката. в общи линии. Това води до увеличаване на размера на устицата, космите, съдовете, цветовете, листата, поленовите зърна и др. Увеличаването на броя на хрома е свързано с увеличаването на цялото растение като цяло и отделните му органи.

Към физиологичните особеностиавтополиплоидите трябва да се класифицират като:

Забавяне на деленето на клетките

Удължаване на вегетационния период

Ниско осмотично налягане

Намалена устойчивост на абиотични фактори на околната среда и др.

По правило автополиплоидите се характеризират с намалена плодовитост (това се дължи на характеристиките на мейозата).

Наследяването на белези при автополиплоиди и диплоиди също е различно, тъй като в генома на първите всеки ген е представен в четири дози. Следователно, например, хетерозиготен тетраплоид AAaa с пълно доминиране образува следните гамети: 1AA+4Aa+1aa. Съотношението (броят) на гаметите от определен тип зависи от вероятността за конюгиране на хроми, носещи гени A и a:

Тези пет генотипа се наричат:

- квадриплекс (AAAA)

- триплекс (AAAa)

- дуплекс (AAaa)

- симплекс (Аааа)

- nuliplex (аааа)

Според дозата на доминантните алели. Като цяло съотношението ще бъде 35:1, за разлика от менделската сегрегация при монохибридно кръстосване при диплоиди, което е 3:1.

В дивата природа, както и в културата, автополиплоидите се изолират от диплоидите чрез бариера на не-кръстосаност, обикновено определена от липсата на нормална кълняемост на поленовите тръби върху стигмата на пестиците и нарушеното развитие на ембриона и ендосперма.

Увеличаване на размера на растенията, размера на цветята, семената и др. доведе до използването на автополиплоиди в декоративното цветарство (сортове хризантеми, астри и др.) И селекцията на полски зърнени и фуражни култури.

· Алополиплоидия- многократно увеличаване на броя на хромозомите в хибридни организми. Възниква при междувидова и междуродова хибридизация.

Алоплоидът еорганизъм, получен в резултат на комбинация от хромозомни набори от различни видове.

Един от първите такива хибриди е получен от G.D. Карпеченко при кръстосване на репички със зеле. И двата вида имат диплоидно число chro-m = 18 и принадлежат към различни родове. Обикновено получените растения са стерилни, но в този случай гамети с нередуциран брой на хром спонтанно се комбинират, което води до плодородно растение с 2n=36 (18+18). Наричаха го хибрид репички-зеле.С откриването на колхицина получаването на такива хибриди не представлява проблем.

АНЕУПЛОДИЯ.

Анеуплоид еорганизъм с увеличен или намален, некратно хаплоиден брой на хром-m. Най-често срещаните видове анеуплоиди са:

Нулисомика 2n-2

Монозомика 2n-1

Тризомика 2n+1

Тетразомика 2n+2

Монозомия при котки. Липсва един хром (2n-1) и нулисомиците (2n-2) не оцеляват в повечето растения.

Нулизомиците се получават чрез самоопрашване на монозомици. Тези растения нямат и двата хомолога на определена хромозома.

Монозомиците имат намалена плодовитост. Това се обяснява с факта, че мъжките гамети (n-1) практически не оцеляват и по-малко от половината от яйцата оцеляват.

Тризомиците (2n+1) се получават чрез кръстосване на триплоиди с диплоиди. В същото време тризомиците оцеляват в растения с малък брой хром-m, докато монозомиците в тези растения не са напълно жизнеспособни.

Хаплоидия.

Хаплоидът е организъм, съдържащ в соматичните клетки пълен набор от нехомоложен хром (n) за даден вид. На външен вид хаплоидите съответстват на диплоидните растения, но са много по-малки, т.к имат малки клетки с малки ядра.

№ 52 ДИСТАНЦИОННА ХИБРИДИЗАЦИЯ.

Фибробласти(фибробластоцити) (от латински fibra - влакна, гръцки blastos - кълнове, зародиш) - клетки, които синтезират компоненти на междуклетъчното вещество: протеини (например колаген, еластин), протеогликани, гликопротеини.

В ембрионалния период се образуват редица мезенхимни клетки на ембриона диференциация на фибробластите, което включва:

· стволови клетки,

полустволови прогениторни клетки,

· неспециализирани фибробласти,

диференцирани фибробласти (зрели, активно функциониращи),

фиброцити (дефинитивни форми на клетки),

миофибробласти и фиброкласти.

Основната функция на фибробластите е свързана с образуването на основното вещество и влакна (което се проявява ясно, например, по време на заздравяване на рани, развитие на белег и образуване на съединителнотъканна капсула около чуждо тяло).

Нискоспециализираните фибробласти са малко обработени клетки с кръгло или овално ядро ​​и малък нуклеол, базофилна цитоплазма, богата на РНК. Размерът на клетката не надвишава 20-25 микрона. В цитоплазмата на тези клетки се намират голям брой свободни рибозоми. Ендоплазменият ретикулум и митохондриите са слабо развити. Апаратът на Голджи е представен от групи от къси тръби и везикули.
На този етап от цитогенезата фибробластите имат много ниски нива на протеинов синтез и секреция. Тези фибробласти са способни на митотично възпроизвеждане.

Диференцираните зрели фибробласти са с по-големи размери. Това са активно функциониращи клетки.

В зрелите фибробласти се извършва интензивен биосинтез на колаген, еластинови протеини, протеогликани, които са необходими за образуването на основното вещество и влакна. Тези процеси се засилват при условия на ниска концентрация на кислород. Стимулиращи фактори за биосинтезата на колаген са също йони на желязо, мед, хром и аскорбинова киселина. Един от хидролитичните ензими е колагеназа- разгражда незрелия колаген вътре в клетките, което регулира интензивността на секрецията на колаген на клетъчно ниво.

Фибробластите са подвижни клетки. В тяхната цитоплазма, особено в периферния слой, има микрофиламенти, съдържащи протеини като актин и миозин. Движението на фибробластите става възможно само след като те са свързани с помощта на поддържащи фибриларни структури фибронектин- гликопротеин, синтезиран от фибробласти и други клетки, осигуряващ адхезията на клетките и неклетъчните структури. По време на движение фибробластът се сплесква и повърхността му може да се увеличи 10 пъти.

Плазмалема на фибробластите е важна рецепторна зона, която медиира ефектите на различни регулаторни фактори. Активирането на фибробластите обикновено се придружава от натрупване на гликоген и повишена активност на хидролитичните ензими. Енергията, генерирана от метаболизма на гликогена, се използва за синтезиране на полипептиди и други компоненти, секретирани от клетката.

Въз основа на способността им да синтезират фибриларни протеини, семейството на фибробластите включва ретикуларни клетки на ретикуларната съединителна тъкан на хематопоетичните органи, както и хондробласти и остеобласти от скелетната разновидност на съединителната тъкан.

Фиброцити- дефинитивни (крайни) форми на развитие на фибробласти. Тези клетки имат вретеновидна форма с израстъци с форма на крило. [Те съдържат малък брой органели, вакуоли, липиди и гликоген.] Синтезът на колаген и други вещества във фиброцитите е рязко намален.

Миофибробласти- клетки, подобни на фибробластите, съчетаващи способността да синтезират не само колаген, но и контрактилни протеини в значителни количества. Фибробластите могат да се трансформират в миофибробласти, които функционално са подобни на гладкомускулните клетки, но за разлика от последните имат добре развит ендоплазмен ретикулум. Такива клетки се наблюдават в гранулационната тъкан на зарастващи рани и в матката по време на бременност.

Фиброкласти- клетки с висока фагоцитна и хидролитична активност участват в "резорбцията" на междуклетъчното вещество по време на инволюцията на органа (например в матката след бременност). Те съчетават структурните особености на фибрилообразуващите клетки (развит гранулиран ендоплазмен ретикулум, апарат на Голджи, относително големи, но малко митохондрии), както и лизозомите с техните характерни хидролитични ензими. Комплексът от ензими, които отделят извън клетката, разгражда циментиращата субстанция на колагеновите влакна, след което настъпва фагоцитоза и вътреклетъчно смилане на колагена.

Следните клетки от фиброзна съединителна тъкан вече не принадлежат към диференциацията на фибробластите.

Собственици на патент RU 2536992:

Изобретението се отнася до областта на биотехнологиите, по-специално до клетъчните технологии, и може да се използва в медицината. Методът включва мащабиране на диплоидни клетки от линията M-20 от криобанката на IPVE на името на. М.П. Чумаков на Руската академия на медицинските науки от ампула от банка от семенни клетки от пасаж 7, за да се получи банка от работещи клетки от пасаж 16. В този случай клетки от 20-33 пасажа, подходящи за използване за терапевтични и/или диагностични цели, се получават чрез култивиране в хранителна среда, съдържаща 10% фибринолитично активна плазма (FAP) на човек, съдържащ тромбоцитен растежен фактор PDGF в концентрация от 155 до 342 pg/ml. Изобретението позволява да се увеличи пролиферативната активност на диплоидни човешки фибробластни клетки. 1 заплата файлове, 2 мас.

Изобретението се отнася до биотехнология, имунология, медицина, по-специално до метод за повишаване на пролиферативните свойства на диплоидни човешки фибробластни клетки за използване на такива клетки за терапевтични и диагностични цели, включително за определяне на антивирусната активност на човешки интерферони, за клетъчно заместване терапия.

Човешките диплоидни клетъчни линии (HDCL) имат неоспорими предимства пред всички известни видове клетъчни култури в способността им да поддържат стабилни биологични и генетични характеристики по време на пасажи. Сертифицирането на LDCC, предназначено за производство на ваксини, се извършва в съответствие с единните изисквания, разработени от Световната здравна организация. Тези препоръки са взети като основа за националните критерии за сертифициране на ваксина LDKCH, разработени от Държавния изследователски институт по клинични инфекциозни болести на име. Ел Ей Тарасевич и Министерството на здравеопазването на СССР [Методически препоръки „Сертифициране на непрекъснати клетъчни линии - субстрати за производство и контрол на медицински имунобиологични препарати” RD-42-28-10-89. Министерство на здравеопазването на СССР. М., 1989. - С. 16]. Сертифицираната линия от човешки диплоидни клетки има ограничен живот и има стабилни биологични, културни и генетични характеристики, не съдържа замърсители (бактерии, гъбички, микоплазми, вируси) и не причинява образуване на тумори при имуносупресирани животни. Диплоидната клетъчна линия трябва да има сертифицирана банка от семенни клетки на ранни нива на пасаж (до пасаж 10), състояща се от най-малко 200 криовиала. Когато посевните клетки се пасират от един или повече криостъкло до 16-то ниво на пасаж, се получава работеща банка от клетки, от която могат да се получат необходимите продуцентски култури за производствена или изследователска работа. В Русия и в чужбина има само няколко линии човешки диплоидни клетки (Wi-38, MRC-5, M-22 и др.), Сертифицирани съгласно изброените изисквания. Сертифицираните LDCC се използват в производството на ваксини срещу полиомиелит, морбили, рубеола, бяс, респираторни и цитомегаловирусни инфекции, както и интерферон [T.K. Борисова, Л.Л. Миронова, О.И. Конюшко, В.Д. Попова, В.П. Грачев, Н.Р. Шухмина, В.В. Зверев. Домашни щамове на човешки диплоидни клетки са субстрат за производството на ваксини. Медицинска вирусология. Материали от научно-практическата конференция „Актуални проблеми на медицинската вирусология, посветена на 100-годишнината от рождението на М.П. Чумаков“. М. 2009. Том XXVI. стр. 305-307; Л.Л. Миронова, В.Д. Попова, О.И. Конюшко. Опит в създаването на банка от оригинални линии трансплантируеми клетки и използването им във вирусологичната практика. Биотехнология. 2000, стр. 41-47]. LDCH се използват широко in vitro за диагностика на вирусни инфекции, анализ на токсичността на различни лекарства и продукти, за заместителна терапия [Патент на РФ № 2373944, 23.06.2008 г. Метод за лечение на рана от изгаряне. КАТО. Ермолов, С.В. Смирнов, В.Б. Хватов, Л.Л. Миронов; С.В. Смирнов, В.Б. Хватов. Иновативни технологии за локално лечение на изгаряния в Научноизследователския институт по спешна медицина на име. Н.В. Склифосовски. В книгата: Нова икономика. Иновативен портрет на Русия. М., Център за стратегическо партньорство, 2009. стр. 388-390].

В IPVE im. М.П. Чумаков RAMS през 80-те години на 20 век са установени няколко линии диплоидни клетки от кожата и мускулите на човешки ембриони на възраст 8-10 седмици. Тази работа е посветена на модифицирането на производството на човешки диплоидни клетки за диагностични цели и клетъчна заместителна терапия, а именно производството на диплоидни човешки фибробластни клетки с повишени пролиферативни свойства.

Прототип. Патент на РФ № 1440029 от 22 март 1993 г. [Миронова Л.Л., Преображенская Н.К., Соловьова М.Н., Орлова Т.Г. Стобецки В.И., Крючкова Г.П., Кармишева В.Я., Кудинова С.И., Попова В.Д., Алпатова Г.А. ИПВЕ и НИИЕиМ им. Н.Ф. Гамалея. Щам от диплоидни човешки ембрионални кожни и мускулни клетки, използвани като тестова система за определяне на антивирусната активност на човешки интерферони и размножаване на вируса].

Този LDCC щам е обозначен като M-21, но фибробластната култура M-21 има недостатъчна пролиферативна активност, което намалява времето за образуване на монослой и увеличава потреблението на клетки и материали и това в крайна сметка води до пълното изчерпване на нейните резерви. В резултат на това възникна необходимост от нова клетъчна линия, подходяща за определяне на антивирусната активност на човешки интерферони и други медицински и биологични цели, по-рентабилна, характеризираща се с висока пролиферативна активност и притежаваща банки от семена и работещи клетки. Тази линия е обозначена с M-20. При ниво на преминаване 7 беше подготвена банка от семенни клетки. През 2012 г. от ампула на банката на пасаж 7 беше направена банка от работни клетки на ниво 16-ти пасаж. Банки от семена и работни клетки на нива 7 и 16 пасажи се съхраняват в Института за съдове по експериментална физика на името на. М.П. Chumakov RAMS и ни позволяват да осигурим както производствени процеси, така и научни изследвания.

Разликата между настоящото изобретение и най-близкия аналог (прототип) е повишаването на пролиферативната активност на М-20 клетки при използване на 10% фибринолитично активна плазма (FAP).

По този начин, обектът на изобретението е метод за повишаване на пролиферативните свойства на диплоидни човешки фибробластни клетки за медицински и биологични цели чрез култивиране на клетки от криобанката на Института по ветеринарна физика на името на. М.П. Чумаков на Руската академия на медицинските науки, в която се използват диплоидни клетки от характеризираната линия М-20, които се мащабират от ампулата на банка от семенни клетки от пасаж 7 и се получава банка от работещи клетки от пасаж 16, с клетки от пасажи 20-33, подходящи за използване за терапевтични и/или диагностични цели, получени чрез култивиране в хранителна среда, съдържаща 10% фибринолитично активна плазма (FAP) на човек. При култивиране на клетки за предпочитане се използва хранителна среда DMEM с 10% FAP.

Човешки диплоидни клетки от характеризираната М-20 линия, получени по горния метод, имат висока пролиферативна активност и са подходящи за използване за терапевтични и/или диагностични цели.

Схема на изпълнение на метода:

1. Използва се една криовиала от банката със семенни клетки от 7-ия пасаж на IPVE, кръстен след. М.П. Чумакова RAMS

2. Подготовка на банка от работещи клетки на ниво пасаж 16 на IPVE на име. М.П. Чумакова RAMS

3. Възстановяване на фибробласти от линията М-20 от банката на работещи клетки на пасаж 16 (IPVE на името на М. П. Чумаков, Руската академия на медицинските науки).

4. Получаване на монослойна култура от фибробласти линия М-20, пасаж 17.

5. Възстановяване на биологичните свойства на фибробластите от линията М-20 чрез трикратно пасажиране (до 20-ти пасаж включително) за възстановяване на евентуално увреждане на ДНК по време на процеса на криоконсервация.

6. Получаване на клетъчни култури за диагностични цели и клетъчно-заместителна терапия чрез репликация на фибробласти от линия М-20 от пасаж 20 до 33 с помощта на хранителна среда, съдържаща 10% фибринолитично активна плазма (със съдържание на PDGF от 155 до 342 pg/ml).

Предложеният метод осигурява производството на клетки с висока пролиферативна активност и подходящи за използване за диагностични и/или терапевтични цели.

Този технически резултат се постига чрез култивиране на човешки фибробласти от линия М-20 в хранителна среда с добавяне на 10% фибринолитично активна плазма (FAP), която има растежно-стимулиращ ефект и повишава пролиферативната активност на клетъчната култура.

FAP е клинично използвана трансфузионна среда, която се получава от кръвта на хора, починали внезапно от инфаркт на миокарда, остра сърдечна недостатъчност, мозъчен кръвоизлив, през първите 6 часа след смъртта [Заповед на Министерството на здравеопазването на СССР № 482 от юни 14, 1972 г. „За подобряване на осигуряването на лечебни и профилактични институции и клиники с трупни тъкани, костен мозък и кръв“. Кръвта след смъртта е пълна трансфузионна среда, която има редица биологични свойства - преди всичко повишен фибринолитичен потенциал. В тази връзка се предлага също да се нарича фибринолиза на кръвта след смъртта. Основните индикации за следсмъртно кръвопреливане: остра кръвозагуба, шок, анемия от различен произход, изгаряне, метаболитно заместване при екзогенно отравяне, запълване на изкуственото кръвообращение при използване на екстракорпорална циркулация в хирургията [E.G. Цуринова. Преливане на фибринолиза кръв. М., 1960, 159 с.; С.В. Рижков. Подготовка и възможности за използване на кръв за фибринолиза в зависимост от времето на вземане и причината за смъртта. Автореферат. док. дис. Л., 1968, 21 с.; Г.А. Пафомов. Биологични характеристики на кръвта на внезапно починали и нейното използване в хирургическата практика. дис. док. пчелен мед. Sci. М., 1971, 355 с.; К.С. Симонян, К.П. Гутионтова, Е.Г. Цуринова. Посмъртна кръв в аспекта на трансфузиологията. М., Медицина, 1975, 271 стр.]. Понастоящем се използват кръвни компоненти след смъртта: фибринолитично активна плазма, маса на червените кръвни клетки, маса на левкоцитите, маса на тромбоцитите [G.Ya. Левин. Хемокоагулационни свойства и клинична употреба на плазма и тромбоцити от трупна кръв. Автореферат. док. дис. М., 1978, 31 с.; В.Б. Хватов. Препарати с фибринолитично и антипротеназно действие от кръвна плазма на внезапно починали хора. дис. док. Med Sciences, 1984, 417 стр.; В.Б. Хватов Плазмакиназа - нов тромболитичен препарат от постмортална плазма В: Тромбоза и тромболиза изд. Е.И. Чазов, В.В. Смирнов). Consultants Bureau, N.Y., L, 1986, p. 283-310; В.Б. Хватов. Медицински и биологични аспекти на използването на посмъртна кръв. Бюлетин на Академията на медицинските науки на СССР, 1991, 9. стр. 18-24; В.Б. Хватов. Трупна кръв - история и актуално състояние на проблема. проблем хематол. и преливане. кръв, 1997, 1. С. 51-59]. Компонентите на трупна кръв, получени от донори на органи, също са получили клинична употреба [починало лице с биещо сърце съгласно „Инструкции за установяване на смъртта на лице въз основа на диагноза мозъчна смърт” от 20 декември 2001 г. № 460, МП рег. № 3170 от 17 януари 2002 г.] . Трансплантацията на органи, тъкани и клетки се извършва в съответствие със Закона на Руската федерация „За трансплантацията на човешки органи и (или) тъкани“ - с измененията. Федерални закони от 20 юни 2000 г. № 91-F3, от 16 октомври 2006 г. № 160-F3; В.Б. Хватов, С.В. Журавел, В.А. Гуляев, E.N. Кобзева, М.С. Макаров. Биологична полезност и функционална активност на клетъчните компоненти на кръвта на донорите на органи. Трансплантология, 2011, 4, с. 13-19; Хубутия М.Ш., Хватов В.Б., Гуляев В.А. и др. Метод за компенсиране на обема на глобуларната кръв и имуномодулиращи ефекти по време на трансплантация. RF патент за изобретение № 2452519, публ. 06/10/2012, бюлетин. № 16].

Фибринолитично активната плазма се получава от кръвта на внезапно починали хора, приготвена с консерванта Глюгицир (съотношение кръв:консервант 4:1) за запазване на фибринолитично активните й свойства. Отделянето на плазмата от клетъчните елементи на кръвта се извършва в стерилна кутия при спазване на всички правила за асептика и антисептика и е подобно на получаването на донорска плазма от консервирана донорска кръв. Клиничното използване на FAP в хирургията и травматологията разкрива ефекта на стимулиране на заздравяването на рани [I.Yu. Клюквин, М.В. Звездина, В.Б. Хватов, Ф.А. Бурдига. Метод за лечение на рани от ухапвания. Патент за изобретение на Руската федерация № 2372927, публикуван, 20 ноември 2009 г., бюлетин. № 32]. Свързахме този ефект с наличието на растежно-стимулиращи фактори във FAP, секретирани от активирани тромбоцити. Впоследствие идентифицирахме тромбоцитен растежен фактор (PDGF) във FAP. Стимулиращият растежа ефект на FAP в човешки клетъчни култури е показан в специални изследвания. Изследваните проби от FAP при концентрация от 10% се добавят към клетъчна суспензия от човешки фибробласти от линия М-20, съдържаща известен брой клетки, и 10 ml от получената смес се поставят в колби за култура с растежна повърхност от 25 cm 2 . Клетките се отглеждат в продължение на 3-4 дни в атмосфера от 5% CO 2 и при 37°С. След 3-кратно пасиране порасналите клетки се преброяват в камера на Fuchs-Rosenthal и се определя съотношението на броя на порасналите клетки към броя на засадените клетки - индексът на пролиферация (в таблица 1).

От проведените експерименти следва, че растежните свойства на FAP осигуряват висока пролиферативна активност и не се различават от тези на феталния говежди серум. Освен това FAP съдържа човешки тромбоцитни растежни фактори, т.е. алогенен тип, за разлика от феталния говежди серум - ксеногенен тип. Този факт е решаващ за клетъчна трансплантация по време на заместителна терапия. Имайте предвид, че стимулиращият растежа ефект върху клетъчната култура M-20 се дължи по-специално на присъствието на PDGF във FAP в концентрация от 155 до 342 pg/ml. Тези данни са получени с помощта на комплекта Qantikine, човешки PDGF-BB имуноанализ от R&D Systems и системата Multiskan Ascent от Thermo. Концентрацията на PDGF-BB във FAP е подобна на съдържанието му в кръвния серум. Така в серума на кръводарители и изследвани пациенти съдържанието на PDGF варира от 110 до 880 pg/l, средно 244 pg/ml, докато в плазмата съдържанието на PDGF варира от 0-2 pg/ml.

За по-добро разбиране на предложеното техническо решение „производство на човешки диплоидни клетки от линията М-20 за медицински и биологични цели“ предоставяме следния пример.

Клетки от линия М-20, пасаж 16, се възстановяват от работната банка. За да направите това, криопробирката с клетки се отстранява от течен азот и се поставя във водна баня при температура 38°C и след размразяване съдържанието се прехвърля в съд за култура с DMEM хранителна среда, съдържаща 10% FAP (със съдържание на PDGF от 155 до 342 pg/ml), добавете антибиотик гентамицин в размер на 1 ml 4% разтвор на 1 литър хранителна среда. За да се образува монослой, клетките се култивират в продължение на 4-5 дни при 37°C и 5% CO 2 в атмосфера. След образуването на монослой от клетки се извършват 3 последователни пасажа, необходими за възстановяване на ДНК след криоконсервация. След това клетките се репликират от пасаж 20 до пасаж 33. Клетките от тези пасажи са предназначени за биомедицински цели. Получената клетъчна линия се характеризира подробно в съответствие с изискванията на СЗО и GNIISiK MIBP на името на. Ел Ей Тарасевич, включително HLA типизиране на клетъчната линия M-20, както и изследване на нейния цитокинов спектър. Предоставяме сравнително описание на свойствата на линията M-20 и линията M-22 (Таблица 2). Линия M 22 (човешки диплоидни фибробласти) е лицензирана като субстрат за ваксина и одобрена за производство на всякакви видове медицински вирусни ваксини, а също така се използва за лечение на рани от изгаряния от II-IIIA степен [Патент на RF за изобретение № 2373944 , 23.06.2008 г. Метод за лечение на рана от изгаряне. КАТО. Ермолов, С.В. Смирнов, В.Б. Хватов, Л.Л. Миронова, О.И. Клнюшко, Е.А. Жиркова, B.C. Бочарова].

Линия M-20 е инсталирана на името на IPVE. М.П. Chumakov RAMS през 1986 г. от кожата и мускулите на 10-седмичен човешки ембрион, получен в резултат на аборт от здрава жена. Няма анамнеза за рак, полово предавани болести, хепатит или туберкулоза; В семейството не са наблюдавани генетични или вродени заболявания. Среда за клетъчна култура DMEM, допълнена с 10% FAP. Съотношението на посяване е 1:3-1:4 два пъти седмично с доза на засяване на клетки от 7×104 клетки/ml. Клетъчният монослой се състои от ориентирани хомогенни вретеновидни клетки с овални ядра, съдържащи 1-3 нуклеоли и малки бучки хроматин. В жизнения цикъл на линията могат да се разграничат 3 фази на развитие: формиране 1-3 пасажа, активен растеж 4-40 и стареене 41-52, след което настъпва смърт. Клетките от линията са с човешки кариотип 2m=46, XY. Линията се характеризира с висока генетична стабилност: 93,3-96,9% от клетките имат диплоиден набор от хромозоми, клетките с полиплоиден набор са не повече от 1,6%. Не са наблюдавани пропуски, прекъсвания или пръстенови хромозоми. Броят на лентите на изоензимите G-6PDE и LDE и тяхната електрофоретична подвижност съвпадат с тези за човешките еритроцити. G-6FDG бавен тип. При засяване върху селективни хранителни среди не е установено замърсяване с бактерии, гъбички или микоплазми. В допълнение, не е открито замърсяване с микоплазма чрез оцветяване с ДНК флуорохроми Hochst 33258 и оливомицин, както и чрез PCR. Не е установено заразяване с вируси при опити върху кърмачета и възрастни бели мишки, морски свинчета, зайци и пилешки ембриони, както и върху хомоложни и хетероложни клетъчни култури. Контрол на туморогенността. Когато клетките от линията се прилагат на имуносупресирани животни, тумори не се образуват. Не е открита обратна транскриптаза. HLA маркери: Клас I: A*(02.03)/B*(07.40)/CW*(03.07). Клас II: DRB1*(15.16)/DQB1*(05.06). Клетките от линията M-20 на ниво 20-ти пасаж произвеждат иРНК за α-интерферон (IFNα) и интерлевкини: IL1β, 2, 4, 6, 8, 10, 18.

По този начин предложената линия е диплоидна - има ограничена продължителност на живота, запазва кариотипа на нормалните човешки клетки през целия живот, не съдържа замърсители и няма онкогенен потенциал. Той е характеризиран за безопасност в съответствие с препоръките на СЗО и изискванията на GNIISiK MIBP на името на. Ел Ей Тарасевич. В IPVE im. М.П. Chumakov RAMS има банки от семена и работни клетки, които могат да отговорят на всички нужди на производството и научните изследвания. Клетките от линията М-20 са чувствителни към инфекция от различни вируси. Допълнително е изследван цитокиновият спектър на линия М-20. Познаването на цитокиновия спектър на клетките позволява по-точно да се оценят резултатите при определяне на интерфероновия статус на пациентите и да се дадат информирани препоръки за употребата на терапевтични и профилактични лекарства.

Човешки диплоидни клетки - фибробласти от щам М-20 с повишена пролиферативна активност, получени по предложения метод, могат да се използват за диагностични цели, по-специално за определяне на активността на интерферон (IFN) в човешки кръвен серум, както и за медицински цели , например за локално лечение на рани от залежаване, рани от ухапвания, дълготрайни незарастващи рани и рани от изгаряния.

1. Метод за повишаване на пролиферативните свойства на диплоидни човешки фибробластни клетки, характеризиращ се с това, че диплоидни клетки от характеризираната линия М-20 от криобанката на Института по съдовете на името на. М.П. Chumakov RAMS се мащабира от ампула от банка от семенни клетки от пасаж 7 и се получава банка от работещи клетки от пасаж 16, докато клетки от пасажи 20-33, подходящи за използване за терапевтични и/или диагностични цели, се получават чрез култивиране в хранителна среда, съдържаща 10% фибринолитично активна плазма (FAP) човешка, съдържаща тромбоцитен растежен фактор PDGF в концентрация от 155 до 342 pg/ml.

2. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че при култивиране на клетки се използва хранителна среда DMEM с 10% FAP.

Подобни патенти:

Изобретението се отнася до фармацевтичната индустрия, а именно до използването на човешки плацентарни перфузатни клетки при производството на лекарство за потискане на пролиферацията на туморни клетки в индивида.

Групата изобретения се отнася до областта на биотехнологиите и онкологията. Методът включва: а) изолиране на постнатални тъканно-специфични мултипотентни автоложни стволови клетки (ASCs) и/или автоложни прогениторни клетки (APCs) за техните последващи протеомни и пълни транскриптомни анализи; b) изолиране на ASCs и/или APCs и/или мултипотентни алогенни HLA-хаплоидентични стволови клетки (HLA-CK) за последващо ремоделиране на техния протеомен профил; в) изолиране на CSC от тумора на пациента; d) протеомен анализ на ASC и/или APC и RSC; д) пълен анализ на транскриптоми на ASC и/или APC и CSC; f) определяне на набор от протеини, всеки от които се съдържа в протеомните профили на ASC и/или APC, и CSC; g) анализ на предварително определен набор от протеини за идентифициране на вътреклетъчни сигнални пътища в CSCs, които не са претърпели неопластична трансформация в резултат на карциногенеза, и за определяне на целеви протеини, които са мембранни акцептори на идентифицирани сигнални пътища; з) анализ на пълния профил на генна експресия на транскриптом на CSCs и потвърждение на целостта и функционалното значение на структурните компоненти на идентифицираните сигнални пътища в CSCs; i) идентифициране на лигандни протеини, способни да активират целеви протеини; j) сравнителен анализ на пълни транскриптомни профили на ASA и/или APC с транскриптомни профили, съдържащи се в известни бази данни с транскриптоми, за идентифициране на пертурбогени, способни да модифицират профила на генна експресия на ASA и/или APC и/или HLA-CK, изолирани за ремоделиране на техните протеоми профил, в посока на секреция на предварително определени лигандни протеини; k) ремоделиране на протеомния профил на ASC и/или APC и/или HLA-CK от пертурбогени за получаване на модифициран транскриптомичен профил на различни клетъчни системи, способни да упражняват регулаторен ефект върху CSC на пациента.

Изобретението се отнася до областта на биотехнологиите, по-специално до клетъчните технологии, и може да се използва в медицината. Популация от мононуклеарни клетки или неембрионални стволови клетки, обогатени с клетки от моноцитната линия, съдържащи промоноцити, се използва за лечение на исхемия в субект.

Изобретението се отнася до областта на биотехнологиите и клетъчните технологии. Изобретението, за което се претендира, е насочено към създаване на плурипотентни, мултипотентни и/или самообновяващи се клетки, които са способни да започнат да се диференцират в култура в различни типове клетки и са способни на по-нататъшна диференциация in vivo.

Изобретението се отнася до областта на медицината и може да се използва за селекция на сперма в методите на асистираните репродуктивни технологии. Методът включва поставяне на капка сперма и капка културална среда в петриево блюдо на разстояние не повече от 5 cm една от друга, свързване на капките с лента от вискозна среда с параметри на вискозитет от 1-4 Pa s, след това съдът със съдържанието се инкубира за 30-90 минути в условия, симулиращи естествената среда на цервикалния канал на женския репродуктивен тракт.

Изобретението се отнася до областта на медицината, биотехнологиите и клетъчните технологии. Метод за диференциране на плурипотентни стволови клетки, представляващи човешка клетъчна линия, в клетки, експресиращи маркери, характерни за образуваната ендодермална линия, включва третиране на плурипотентните стволови клетки със среда, характеризираща се с това, че не съдържа активин А и съдържа GDF-8 за определен период от време , достатъчно за плурипотентните стволови клетки да се диференцират в клетки, експресиращи маркери, характерни за линията на образуваната ендодерма.

Настоящото изобретение се отнася до областта на имунологията. Предложени са варианти на олигопептида, изолиран от протеина RAB6KIFL (KIFL20A), които са способни да индуцират цитотоксични Т лимфоцити (CTL) като част от комплекс с молекулата HLA-A*0201.

Изобретението се отнася до областта на хранително-вкусовата промишленост и представлява метод за варене на бира, който включва добавяне на термостабилна протеаза към пивната мъст след филтриране на пивната мъст, но преди кипене на мъстта, при което топлинната стабилност на протеазата означава, че активността на тази протеаза е най-малко 70% от неговата активност, измерена съгласно следния метод: протеазата се разрежда до концентрация от 1 mg/ml в аналитичен буфер, съдържащ 100 mmol янтарна киселина, 100 mmol HEPES, 100 mmol CHES, 100 mmol CABS, 1 mmol CaCl2, 150 mmol KCI, 0.01% Triton X-100 и рН, коригирано до 5.5 с NaOH; след което протеазата се инкубира предварително i) в лед и ii) 10 минути при 70°С; субстратът, към който протеазата е активна, се суспендира в 0,01% Triton X-100: за да започне реакцията, 20 μl протеаза се добавя към епруветката и се инкубира в термомиксер Eppendorf при 70°C, 1400 rpm за 15 минути; реакцията се спира чрез поставяне на епруветките в лед; пробите се центрофугират на студено при 14000 g за 3 минути и се измерва оптичната плътност OD590 на супернатантата; получената стойност на OD590 на пробите без протеаза се изважда от получената стойност на OD590 на пробите, третирани с протеаза; определяне на термостабилността на протеазата чрез изчисляване на процента на протеазната активност в проби, предварително инкубирани при 70°С, спрямо протеазната активност в проби, инкубирани върху лед като 100% активност.

Изобретението се отнася до областта на клетъчната биология, клетъчната трансплантология и тъканното инженерство. Метод за повишаване на ангиогенната активност на стромалните клетки на мастната тъкан в тъканите и органите включва изолиране на стромални клетки на мастната тъкан, култивиране на изолираните клетки в присъствието на тумор некрозис фактор-алфа в количества от 5 или 100 ng/ml за 24-72 часа , последвано от трансплантация в тъкани или органи .

Изобретението се отнася до областта на биотехнологиите, клетъчните технологии и тъканната хирургия. Методът за получаване на култура от гладкомускулни клетки се състои в изрязване на фрагмент от кръвоносен съд, смилането му на парчета до размер не повече от 2 mm във всяко измерение и инкубиране на парчетата в колба за култура с предварително нанесени драскотини към дъното на колбата, съдържаща културална среда, съдържаща 10% фетален серум, за най-малко 10 дни, но не повече от 24 дни, при температура 37°C в CO2 инкубатор, характеризиращ се с това, че споменатият фрагмент от кръвта съдът е фрагмент от възходящата гръдна аорта, изрязан по време на процедурата за присаждане на коронарен артериален байпас и споменатите парчета от фрагмент от възходящата гръдна аорта, преди инкубиране, се държат в културална среда, съдържаща 0,1% колагеназа за най-малко 30 минути , но не повече от 60 минути, при температура 37°C, след което клетките се промиват с хранителна среда.

Метод за получаване на мезенхимни стволови клетки от човешки плурипотентни стволови клетки и мезенхимни стволови клетки, получени по този метод // 2528250

Изобретението се отнася до областта на генното инженерство, тъканните технологии и медицината. Метод за получаване на мезенхимни стволови клетки от плурипотентни човешки стволови клетъчни линии включва получаване на ембриоидни тела от човешки плурипотентни стволови клетки, прикрепване на ембриоидни тела към петриево блюдо за индуциране на спонтанна диференциация на ембриоидни тела в мезенхимни стволови клетки, култивиране с пролиферация на мезенхимни стволови клетки, докато поддържане на идентичността на мезенхимните стволови клетки и където индукцията на спонтанна стадийна диференциация възниква чрез образуване на автоложни цитокинови бримки без добавяне на външен цитокин, също и съответните клетки, тяхното използване, набиране и метод на култивиране.

Изобретението се отнася до областта на молекулярната биология, биохимията и медицината. Предлага се състав за индуциране на миграция на възрастни стволови клетки от мастна тъкан, който съдържа като активна съставка човешки мезенхимни стволови клетки от възрастна мастна тъкан в количество от 1x107 до 1x1010, които експресират хемокин или рецептор на растежен фактор върху клетъчната повърхност, или секреторен продукт от тези стволови клетки включва хемокин или рецептор на растежен фактор; където секретираният продукт на възрастни стволови клетки от мастна тъкан е адипонектин; и където стволовите клетки от човешка мастна тъкан на възрастен са инициирани със смес, съдържаща хемокин или растежен фактор.

Изобретението се отнася до биотехнологиите и медицината. Предложен е метод за експанзия на мононуклеарни клетки от кръв от пъпна връв (pcBMC) ex vivo в присъствието на мултипатентни мезенхимни клетки (MMSC), който включва култивиране на MMSC от стромално-съдовата фракция на мастната тъкан до достигане на монослой при Концентрация на O2 в среда от 5%, добавяне на pcMNC суспензия към MMSC монослоя, култивиране в продължение на 72 часа при концентрация на O2 в средата от 5%, селекция на неприкрепени psMNCs и замяна на средата, продължаване на култивирането на MMSCs с прикрепени psMNCs в продължение на 7 дни при концентрация на О2 в средата 5%.

Изобретението се отнася до областта на биотехнологиите и медицината. Предлага се състав, съдържащ стволови клетки от човешка амниотична течност с фенотип CD73+/CD90+/CD105+/CK19+, хранителна среда, еритропоетин, епидермален растежен фактор и колаген, взети в ефективно количество.

Изобретението се отнася до областта на медицината и клетъчните технологии. Предложен е клетъчен продукт, съдържащ популация от дуктални стволови клетки на субмандибуларната слюнчена жлеза, характеризираща се с CD49f+/EpCAM+ фенотип и след третиране с валпроева киселина в концентрация 0,1-40 mM и култивиране в колагенов гел, променящ профила на експресия до 1AAT+/PEPCK+/G6P+/TDO+/CYP P4503A13+ , както и придобиване на способност за синтез на урея и албумин.

Изобретението се отнася до областта на биотехнологиите, клетъчното и тъканно инженерство. Описан е метод за получаване на резидентни стволови клетки от сърце на бозайник, експресиращи повърхностни маркери c-kit, и/или sca-1, и/или MDR1, по време на който проби от миокардна тъкан се изолират, раздробяват, третират с колагеназа и трипсин и култивирани върху блюдо за култивиране с покрита с фибронектин чрез експлант култура на натрошени проби, последвана от имуноселекция.

Изобретението се отнася до областта на биохимията, биотехнологиите и медицината. Предложен е N-терминален фрагмент на разтворим супресор на имунния отговор с дължина 21 аминокиселини, притежаващ аминокиселинната последователност съгласно Seq ID NO: 1, което позволява стимулиране на образуването на регулаторни Т-лимфоцити, както и метод за стимулиране образуването на регулаторни Т-лимфоцити с N-терминален фрагмент на разтворим супресор на имунния отговор с Seq ID NO: 1, когато се прилага в концентрация 0.1-50 μg/ml.

Изобретението се отнася до фармацевтичната индустрия и представлява дерматологичен крем, предназначен за локално лечение на бактериални кожни инфекции и за зарастване на свързани рани, съдържащ фрамицетин сулфат и биополимер, включен в основата на крема, който съдържа поне едно вещество от всяка от следните групи: : консервант ; първичен и вторичен емулгатор, избран от групата, състояща се от кетостеарилов алкохол, кетомакрогол 1000, полисорбат-80 и Span-80; парафин като восъчен продукт; съразтворител, избран от групата, състояща се от пропилей гликол, хексилен гликол и полиетилен гликол-400; азотна киселина или млечна киселина и вода и споменатият биополимер е за предпочитане хитозан.

Изобретението се отнася до областта на биотехнологиите, по-специално до клетъчните технологии, и може да се използва в медицината. Методът включва мащабиране на диплоидни клетки от линията M-20 от криобанката на IPVE на името на. М.П. Чумаков на Руската академия на медицинските науки от ампула от банка от семенни клетки от пасаж 7, за да се получи банка от работещи клетки от пасаж 16. В този случай клетки от 20-33 пасажа, подходящи за използване за терапевтични и диагностични цели, се получават чрез култивиране в хранителна среда, съдържаща 10 фибринолитично активна човешка плазма, съдържаща тромбоцитен растежен фактор PDGF в концентрация от 155 до 342 pgml. Изобретението позволява да се увеличи пролиферативната активност на диплоидни човешки фибробластни клетки. 1 заплата файлове, 2 мас.

Основните клетки на съединителната тъкан са фибробласти (семейство фибрилообразуващи клетки), макрофаги, мастоцити, адвентициални клетки, плазмени клетки, перицити, мастни клетки, както и левкоцити, мигриращи от кръвта; понякога се откриват пигментни клетки.

Фибробласти (фибробластоцити) (от латински fibra - влакна, гръцки blastos - кълнове, зародиш) - клетки, които синтезират компоненти на междуклетъчното вещество: протеини (например колаген, еластин), протеогликани, гликопротеини. В ембрионалния период редица мезенхимни клетки на ембриона водят до диференциация на фибробласти, които включват: стволови клетки, полустволови прекурсорни клетки, неспециализирани фибробласти, диференцирани фибробласти (зрели, активно функциониращи), фиброцити (окончателни форми на клетки), миофибробласти и фиброкласти. Основната функция на фибробластите е свързана с образуването на основното вещество и влакна (което се проявява ясно, например, по време на заздравяване на рани, развитие на белег и образуване на съединителнотъканна капсула около чуждо тяло).

Фибробластите са подвижни клетки. В тяхната цитоплазма, особено в периферния слой, има микрофиламенти, съдържащи протеини като актин и миозин. Движението на фибробластите става възможно само след като те се свържат с поддържащите фибриларни структури с помощта на фибронектин, гликопротеин, синтезиран от фибробласти и други клетки, който осигурява адхезията на клетките и неклетъчните структури. По време на движение фибробластът се сплесква и повърхността му може да се увеличи 10 пъти. Въз основа на способността им да синтезират фибриларни протеини, семейството на фибробластите включва ретикуларни клетки на ретикуларната съединителна тъкан на хематопоетичните органи, както и хондробласти и остеобласти от скелетната разновидност на съединителната тъкан.

Фиброцитите са окончателните (крайни) форми на развитие на фибробластите. Тези клетки имат вретеновидна форма с израстъци с форма на крило. Те съдържат малък брой органели, вакуоли, липиди и гликоген. Синтезът на колаген и други вещества във фиброцитите е рязко намален.

Миофибробластите са клетки, подобни на фибробластите, съчетаващи способността да синтезират не само колаген, но и контрактилни протеини в значителни количества. Фибробластите могат да се трансформират в миофибробласти, които функционално са подобни на гладкомускулните клетки, но за разлика от последните имат добре развит ендоплазмен ретикулум. Такива клетки се наблюдават в гранулационната тъкан на зарастващи рани и в матката по време на бременност.

Фиброкластите - клетки с висока фагоцитна и хидролитична активност, участват в "резорбцията" на междуклетъчното вещество по време на инволюцията на органа (например в матката след бременност). Те съчетават структурните особености на фибрилообразуващите клетки (развит гранулиран ендоплазмен ретикулум, апарат на Голджи, относително големи, но малко митохондрии), както и лизозомите с техните характерни хидролитични ензими. Комплексът от ензими, които отделят извън клетката, разгражда циментиращата субстанция на колагеновите влакна, след което настъпва фагоцитоза и вътреклетъчно смилане на колагена. Следните клетки от фиброзна съединителна тъкан вече не принадлежат към диференциацията на фибробластите.

Макрофагите (или макрофагоцитите) (от гръцки makros - голям, дълъг, fagos - поглъщащ) са разнородна специализирана клетъчна популация от защитната система на организма.

Форми на проявление на защитната функция на макрофагите:

1. абсорбиране и по-нататъшно разграждане или изолиране на чужд материал;

2. неутрализирането му при директен контакт;

3. предаване на информация за чужд материал към имунокомпетентни клетки, способни да го неутрализират;

4. осигуряване на стимулиращ ефект върху други клетъчни популации на защитната система на организма.

Макрофагите имат органели, които синтезират ензими за вътреклетъчно и извънклетъчно разграждане на чужд материал, антибактериални и други биологично активни вещества (например: протеази, киселинни хидролази, пироген, интерферон, лизозим и др.).

Мастни клетки (или тъканни базофили, или мастни клетки). В цитоплазмата им има специфична грануларност, напомняща гранули от базофилни кръвни левкоцити. Мастните клетки са регулатори на локалната хомеостаза на съединителната тъкан. Те участват в намаляването на кръвосъсирването, повишаването на пропускливостта на кръвно-тъканната бариера, в процесите на възпаление и имуногенеза. При хората мастоцитите се намират навсякъде, където има слоеве от рехава фиброзна съединителна тъкан. Особено много тъканни базофили има в стената на стомашно-чревния тракт, матката, млечната жлеза, тимуса и сливиците. Те често са разположени на групи по протежение на кръвоносните съдове на микрокръговото легло - капиляри, артериоли, венули и малки лимфни съдове.

Плазмени клетки (или плазмоцити). Тези клетки осигуряват производството на антитела - гамаглобулини, когато антигенът се появи в тялото. Те се образуват в лимфоидни органи от В-лимфоцити, обикновено се намират в свободната фиброзна съединителна тъкан на собствения слой на лигавиците на кухите органи, оментума. Адипоцити (или мастни клетки). Това е името на клетките, които имат способността да натрупват големи количества резервна мазнина, която участва в трофиката, производството на енергия и водния метаболизъм. Адипоцитите са разположени на групи, по-рядко поединично и като правило в близост до кръвоносните съдове. Натрупвайки се в големи количества, тези клетки образуват мастна тъкан - вид съединителна тъкан със специални свойства.

Адвентициални клетки. Това са слабо специализирани клетки, които придружават кръвоносните съдове. Те имат сплескана или вретеновидна форма с леко базофилна цитоплазма, овално ядро ​​и малък брой органели. По време на процеса на диференциация тези клетки очевидно могат да се трансформират във фибробласти, миофибробласти и адипоцити. Перицити - (или клетки на Руже) клетки, обграждащи кръвоносните капиляри и образуващи част от техните стени.

Пигментни клетки (пигментоцити, меланоцити). Тези клетки съдържат пигмента меланин в цитоплазмата си. Има много от тях в рождените петна, както и в съединителната тъкан на хората от черната и жълтата раса. Пигментоцитите имат къси израстъци с неправилна форма и голям брой меланозоми (съдържащи меланинови гранули) и рибозоми.

Междуклетъчното вещество или извънклетъчната матрица (substantia intercellularis) на съединителната тъкан се състои от колагенови и еластични влакна, както и основно (аморфно) вещество. Междуклетъчното вещество както при ембрионите, така и при възрастните се образува, от една страна, чрез секреция от клетките на съединителната тъкан, а от друга - от кръвната плазма, навлизаща в междуклетъчните пространства.

Колагеновите структури, които изграждат съединителната тъкан на човешкия и животинския организъм, са неговите най-представителни компоненти, образувайки сложна организационна йерархия. Основата на цялата група колагенови структури е влакнест протеин - колаген, който определя свойствата на колагеновите структури. Еластични влакна Наличието на еластични влакна в съединителната тъкан определя нейната еластичност и разтегливост. Еластичните влакна отстъпват по сила на колагеновите влакна. Формата на напречното сечение на влакната е кръгла и сплескана. В разхлабената влакнеста съединителна тъкан еластичните влакна широко анастомозират помежду си.