Антинуклеарен фактор хомогенен тип. ANF ​​анализ: цел, класификация, декодиране. Какво означават резултатите?

Обща информация за изследването

Определянето на антинуклеарен фактор (ANF) е „златен стандарт“ за откриване на антинуклеарни антитела (ANA) и диагностициране на автоимунни заболявания.

Патогенезата на системните заболявания на съединителната тъкан (ССБТ) е тясно свързана с нарушения в имунната система и повишено производство на антитела към структурите на собствените клетки. Автоантителата към компонентите на клетъчното ядро ​​- антинуклеарни антитела - взаимодействат с нуклеинови киселини и ядрени протеини, цитоплазмени антигени, което се проявява с възпалителни промени в тъканите и органите, болки в ставите и мускулите, силна умора, загуба на тегло и кожни промени. ANA се срещат при много автоимунни заболявания, но са най-чести при системен лупус еритематозус (SLE). ANA се срещат при повече от 90% от пациентите със системни заболявания на съединителната тъкан; в момента са описани около 200 разновидности, които са обединени от едно име - антинуклеарен фактор.

При определяне на ANF чрез индиректна флуоресценция най-често се използва непрекъснатата линия от епителни клетки на човешки ларингеален аденокарцином HEp-2. HEp-2 клетките са много удобен субстрат за лабораторни изследвания, тъй като имат големи ядра и растат в един слой върху предметни стъкла. ANAs се откриват чрез свързване с вътреклетъчни антигени на HEp-2 клетки.

По време на изследването епителните клетки HEp-2 се отглеждат върху предметни стъкла, фиксират се и се инкубират с разреден серум на пациента. След отстраняване на излишния серум, клетките се инкубират с белязани с флуоресцеин антитела, след което се промиват отново и се изследват с помощта на флуоресцентен микроскоп. В този случай се определя титърът на антителата и видът на блясъка. Титър по-голям от 1:160 се счита за диагностично значим. По време на обостряне на ревматични заболявания той надвишава 1:640, а по време на ремисия намалява до 1:160-1:320. Колкото повече антитела, толкова по-висок е титърът. Въз основа на вида на сиянието е възможно да се идентифицират мишените на антинуклеарните антитела, което е от голямо клинично значение и определя тактиката за по-нататъшно изследване на пациента. Основните са периферен, гранулиран (малък/голям), нуклеоларен, центромерен и цитоплазмен тип ядрено оцветяване. Всеки тип блясък има много характерни характеристики, които позволяват да се разграничи една опция от друга.

Хомогенното (дифузно) оцветяване е свързано с наличието на антитела срещу двойноверижна ДНК, хистони и е характерно за SLE и медикаментозния лупус.

Периферната луминесценция се причинява от периферното разпределение на хроматина в ядрото, свързва се с антитела срещу ДНК и е специфична за SLE. Важно е да се разграничи този тип луминесценция от оцветяването на ядрената мембрана, което се случва при автоимунни чернодробни заболявания.

Грануларното (петнисто, ретикуларно) оцветяване е най-често срещаното и най-малко специфично; то се открива при много автоимунни заболявания. Автоантигените в този случай са нуклеопротеинови комплекси в ядрото (Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B антигени и PCNA).

Много високите титри на ANF с грубо-гранулиран тип луминесценция често показват смесено заболяване на съединителната тъкан.

Ядреното (нуклеоларно) оцветяване се причинява от образуването на антитела към компонентите на нуклеола (РНК полимераза-1, NOR, U 3 RNP, PM/Scl), открити при склеродермия, болест на Sjögren. Понякога ANA се повишава при ендокринни заболявания (захарен диабет тип 1, тиреоидит, тиреотоксикоза, полиендокринен синдром), кожни заболявания (псориазис, пемфигус), по време на бременност, след трансплантация на органи и тъкани, при пациенти на хемодиализа.

Центромерната луминесценция се появява в присъствието на антитела към центромерите на хромозомите и е характерна за форма на склеродермия - синдром на CREST.

Цитоплазменият тип луминесценция е свързан с антитела срещу tRNA синтетаза, по-специално към Jo-1, което е характерно за дерматомиозит и полимиозит. Този тип оцветяване се определя и при наличие на антитела към други компоненти на цитоплазмата при автоимунен хепатит и първична билиарна цироза.

Едновременното откриване на различни видове луминесценция показва наличието на различни видове антитела.

При здрави индивиди може да се открие фино-зърнеста луминесценция при ниски, умерени или високи титри на ANA, но обикновено не трябва да се откриват едрозърнести или хомогенни видове луминесценция.

В зависимост от резултатите от оценката на вида на блясъка се разработват допълнителни тактики за лечение на пациента и се предписват допълнителни изследвания за изясняване на спектъра на ANA.

За какво се използва изследването?

• За диагностика на системни заболявания на съединителната тъкан.
• За диференциална диагностика на ревматични заболявания.
• Да се ​​оцени ефективността на терапията при автоимунни заболявания.
• За проследяване на хода на системните заболявания на съединителната тъкан.

Кога е насрочено изследването?

• При симптоми на автоимунно заболяване (продължителна температура, болки в ставите, умора, загуба на тегло, кожни промени).
• При идентифициране на промени, характерни за системни заболявания на съединителната тъкан (повишена ESR, ниво на С-реактивен протеин, циркулиращи имунни комплекси).

Метод за изследване, използващ човешки епителни клетки HEp-2, който позволява откриването на антинуклеарни антитела - един от маркерите на системни заболявания на съединителната тъкан.

Синоними руски

ANF, антинуклеарни антитела, антинуклеарни антитела (ANA).

английски синоними

Антинуклеарни антитела (ANA), Hep-2 субстрат, ANA-Hep2, флуоресцентно откриване на антинуклеарни антитела (FANA).

Изследователски метод

Индиректна имунофлуоресцентна реакция.

Какъв биоматериал може да се използва за изследване?

Венозна кръв.

Как правилно да се подготвим за изследване?

Не пушете 30 минути преди кръводаряване.

Обща информация за изследването

Определянето на антинуклеарен фактор (ANF) е „златен стандарт“ за откриване на антинуклеарни антитела (ANA) и диагностициране на автоимунни заболявания.

Патогенезата на системните заболявания на съединителната тъкан (ССБТ) е тясно свързана с нарушения в имунната система и повишено производство на антитела към структурите на собствените клетки. Автоантителата към компонентите на клетъчното ядро ​​- антинуклеарни антитела - взаимодействат с нуклеинови киселини и ядрени протеини, цитоплазмени антигени, което се проявява с възпалителни промени в тъканите и органите, болки в ставите и мускулите, силна умора, загуба на тегло и кожни промени. ANA се срещат при много автоимунни заболявания, но са най-чести при системен лупус еритематозус (SLE). ANA се срещат при повече от 90% от пациентите със системни заболявания на съединителната тъкан; в момента са описани около 200 разновидности, които са обединени от едно име - антинуклеарен фактор.

При определяне на ANF чрез индиректна флуоресценция най-често се използва непрекъснатата линия от епителни клетки на човешки ларингеален аденокарцином HEp-2. HEp-2 клетките са много удобен субстрат за лабораторни изследвания, тъй като имат големи ядра и растат в един слой върху предметни стъкла. ANAs се откриват чрез свързване с вътреклетъчни антигени на HEp-2 клетки.

По време на изследването епителните клетки HEp-2 се отглеждат върху предметни стъкла, фиксират се и се инкубират с разреден серум на пациента. След отстраняване на излишния серум, клетките се инкубират с белязани с флуоресцеин антитела, след което се промиват отново и се изследват с помощта на флуоресцентен микроскоп. В този случай се определя титърът на антителата и видът на блясъка. Титър по-голям от 1:160 се счита за диагностично значим. По време на обостряне на ревматични заболявания той надвишава 1:640, а по време на ремисия намалява до 1:160-1:320. Колкото повече антитела, толкова по-висок е титърът. Въз основа на вида на сиянието е възможно да се идентифицират мишените на антинуклеарните антитела, което е от голямо клинично значение и определя тактиката за по-нататъшно изследване на пациента. Основните са периферен, гранулиран (малък/голям), нуклеоларен, центромерен и цитоплазмен тип ядрено оцветяване. Всеки тип блясък има много характерни характеристики, които позволяват да се разграничи една опция от друга.

Хомогенното (дифузно) оцветяване е свързано с наличието на антитела срещу двойноверижна ДНК, хистони и е характерно за SLE и медикаментозния лупус.

Периферната луминесценция се причинява от периферното разпределение на хроматина в ядрото, свързва се с антитела срещу ДНК и е специфична за SLE. Важно е да се разграничи този тип луминесценция от оцветяването на ядрената мембрана, което се случва при автоимунни чернодробни заболявания.

Грануларното (петнисто, ретикуларно) оцветяване е най-често срещаното и най-малко специфично; то се открива при много автоимунни заболявания. Автоантигените в този случай са нуклеопротеинови комплекси в ядрото (Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B антигени и PCNA).

Много високите титри на ANF с грубо-гранулиран тип луминесценция често показват смесено заболяване на съединителната тъкан.

Ядреното (нуклеоларно) оцветяване се причинява от образуването на антитела към компонентите на нуклеола (РНК полимераза-1, NOR, U 3 RNP, PM/Scl), открити при склеродермия, болест на Sjögren. Понякога ANA се повишава при ендокринни заболявания (захарен диабет тип 1, тиреоидит, тиреотоксикоза, полиендокринен синдром), кожни заболявания (псориазис, пемфигус), по време на бременност, след трансплантация на органи и тъкани, при пациенти на хемодиализа.

Центромерната луминесценция се появява в присъствието на антитела към центромерите на хромозомите и е характерна за форма на склеродермия - синдром на CREST.

Цитоплазменият тип луминесценция е свързан с антитела срещу tRNA синтетаза, по-специално към Jo-1, което е характерно за дерматомиозит и полимиозит. Този тип оцветяване се определя и при наличие на антитела към други компоненти на цитоплазмата при автоимунен хепатит и първична билиарна цироза.

Едновременното откриване на различни видове луминесценция показва наличието на различни видове антитела.

При здрави индивиди може да се открие фино-зърнеста луминесценция при ниски, умерени или високи титри на ANA, но обикновено не трябва да се откриват едрозърнести или хомогенни видове луминесценция.

В зависимост от резултатите от оценката на вида на блясъка се разработват допълнителни тактики за лечение на пациента и се предписват допълнителни изследвания за изясняване на спектъра на ANA.

За какво се използва изследването?

• За диагностика на системни заболявания на съединителната тъкан.
• За диференциална диагностика на ревматични заболявания.
• Да се ​​оцени ефективността на терапията при автоимунни заболявания.
• За проследяване на хода на системните заболявания на съединителната тъкан.

Кога е насрочено изследването?

• При симптоми на автоимунно заболяване (продължителна температура, болки в ставите, умора, загуба на тегло, кожни промени).
• При идентифициране на промени, характерни за системни заболявания на съединителната тъкан (повишена ESR, ниво на С-реактивен протеин, циркулиращи имунни комплекси).

Какво означават резултатите?

Референтни стойности

Резултат: отрицателен.

Заглавие: 1:160.

Причини за повишен титър на ANF върху HEp-2 клетки:

• системен лупус еритематозус (в 95% от случаите),
• дерматомиозит/полимиозит,
• системна склеродермия (в 60-90% от случаите),
• Синдром на Sjögren (в 40-70% от случаите)
• смесено заболяване на съединителната тъкан (синдром на Шарп),
• Синдром на Рейно,
• дискоиден лупус,
• лекарствено индуциран лупус,
• ревматоиден артрит,
• некротизиращ васкулит,
• инфекциозна мононуклеоза,
• левкемия,
• злокачествени новообразувания (главно лимфоми),
• Миастения гравис,
• инфекциозен ендокардит,
• хроничен автоимунен хепатит,
• първична билиарна цироза на черния дроб,
• туберкулоза,
• пневмокониоза,
• интерстициална фиброза на белите дробове.

Видове блясък

Тип светене	За какво е характерно?
Хомогенна	За SLE, лекарствено индуциран лупус, системна склеродермия, хроничен активен хепатит
Периферен
гранулиран	За SLE, синдром на Sjögren, смесено заболяване на съединителната тъкан, ревматоиден артрит
Нуклеоларна	За полимиозит/дерматомиозит, склеродермия, синдром на Sjögren, SLE
центромерни	За синдром на CREST (кожна калциноза, синдром на Рейно, езофагеална дисфункция, склеродактилия, телеангиектазия)
Цитоплазмен	За дерматомиозит/полимиозит, автоимунно чернодробно заболяване, първична билиарна цироза

Какво може да повлияе на резултата?

• Фалшиво положителен резултат се дължи на:

• • възраст над 60-65 години (в 10-37% от случаите);
  • употреба на лекарства, които могат да доведат до лекарствено-индуциран лупус (ацетазоламид, карбидопа, хлоротиазид, хлорпромазин, клофибрат, етосуксимид, златни соли, гризеофулвин, хидралазин, изониазид, литиеви соли, метилдопа, орални контрацептиви, пеницилин, фенилбутазон, фенитоин, примидон, прокаинами де , пропилурацил, хинидин, резерпин, стрептомицин, сулфонамид, тетрациклин, тиазидни диуретици).

• Приемането на глюкокортикостероиди (преднизолон, дексаметазон, метипред) понякога води до фалшиво отрицателен резултат.

Важни бележки

• При 5% от случаите на SLE е възможен отрицателен резултат от този тест (ANF-отрицателен SLE). В такива ситуации, за да се изясни диагнозата, е необходимо да се определят антитела срещу SS антигени (Ro).
• Положителният резултат от теста не е абсолютно доказателство за автоимунно заболяване. При здрави хора в 3-13% от случаите титърът на ANF е повишен и достига 1:320.
• Резултатите от теста трябва да бъдат оценени във връзка с клиничните данни и други лабораторни параметри.
• Ако резултатът от теста е положителен, се препоръчва да се определи специфичността на ANA чрез имуноблотинг.

• Анти-двойноверижна ДНК (анти-dsDNA) скрининг
• Антитела към ядрени антигени (ANA), скрининг
• Антитела срещу екстрахируем ядрен антиген (ENA скрининг)
• Антитела срещу кардиолипин, IgG и IgM
• Антинуклеарни антитела (anti-Sm, RNP, SS-A, SS-B, Scl-70, PM-Scl, PCNA, CENT-B, Jo-1, хистони, нуклеозоми, Ribo P, AMA-M2), имуноблот

Принадлежи към групата на големите колагенози, които се характеризират с дифузно увреждане на съединителната тъкан и кръвоносните съдове. Ранното диагностициране на тази патология е сериозен проблем, тъй като SLE може да започне под „маската“ на други заболявания. Тъй като SLE е автоимунно заболяване, механизмът на неговите клинични прояви, според съвременните концепции, се обяснява от следните позиции:

• циркулиращи имунни комплекси (CIC), които включват антинуклеарни антитела, отложени в микроциркулаторната връзка, водят до развитие на васкулопатии и увреждане на тъканите;
• автоантитела към кръвни клетки водят до левко-, лимфотромбопения и анемия;
• антифосфолипидни антитела водят до развитие на антифосфолипиден синдром (APS).

Съвременните методи за имунологична лабораторна диагностика позволяват да се идентифицират всички компоненти на патогенезата на SLE и по този начин да се потвърди диагнозата на заболяването с изключителна, почти 100% точност. Въпреки това, наличието на каквито и да е промени в анализите им позволява да се интерпретират само като се вземе предвид индивидуалната клинична картина.

Трябва да се отбележи, че предишният метод за диагностициране на SLE чрез наличието на LE клетки в кръвта не издържа теста на времето, показвайки изключително ниска чувствителност и специфичност, поради което беше изоставен. LE клетките дори не са включени в системата от критерии за SLE.

Основните маркери на SLE са:

Показания за предписване на кръвен тест за маркери на системен лупус еритематозус

• кожен лупус;
• лекарствено индуциран лупус;
• тромбоцитопенична пурпура;
• еритродермия;
• тежко увреждане на черния дроб;
• CREST синдром;
• полимиозит;
• дерматомиозит;
• хроничен ювенилен артрит;
• автоимунен хепатит;
• склерозиращ холангит;
• полиневропатия;
• миелит;

Как се извършва процедурата?

Сутрин на празен стомах се взема кръв от лакътната вена.

Подготовка за анализ

Лупус антикоагулант

Лупусните антикоагуланти (LA) са един от важните скринингови и потвърдителни тестове за диагностициране на APS. ВА се образуват в организма в резултат на развитието на автоимунни процеси след инфекциозни въздействия и потискат реакцията на превръщане на протромбина в тромбин в кръвта. Когато тези антитела се открият в кръвта чрез удължаване на тестовете за коагулация, те се определят като „лупусен антикоагулант“.

Положителен резултат:

• тумори;

Антинуклеарен фактор

Антинуклеарен фактор върху клетъчната линия HEp-2 (ANF HEp-2, титри; ANA IF, титри). Положителен резултат от ANF се наблюдава при повече от 90% от пациентите със SLE и кожни форми на това заболяване, склеродермия, смесено заболяване на съединителната тъкан, синдром на Sjogren. Резултатът от определянето на ANF е титърът, който е стойността на крайното разреждане на серума, при което остава значителна ядрена флуоресценция. Колкото по-висок е знаменателят на фракцията, толкова по-голямо е разреждането на серума, толкова повече антитела има в серума на пациента. Чувствителността на този тест за SLE е 95%.

Високи титри на ANF (1/640 и повече):

• висока вероятност от системно ревматично заболяване;
• висока вероятност от автоимунно чернодробно заболяване;
• повишаването на титрите на ANF с течение на времето показва обостряне на системно заболяване;
• при SLE титърът корелира с тежестта на заболяването и намалява при ефективна терапия.

Ниски ANF титри (до 1/160):

• при 1-2% от здравите индивиди;
• при близки на пациенти със системни заболявания;
• много автоимунни, инфекциозни и онкологични заболявания.

Антитела срещу нуклеозоми

Нуклеозомните антитела (NCAs) са едни от първите антитела, образувани в тялото по време на развитието на SLE. Титрите на NCA корелират с активността на заболяването. Специфичността на определяне на тези автоантитела за диагностициране на SLE е повече от 95%.

Декодиране на резултата от анализа

Високи нива на антитела срещу нуклеозоми (положителни):

• лекарствено индуциран лупус;
• активен SLE, придружен от нефрит.

• ниска вероятност от SLE;
• нисък риск от увреждане на бъбреците при SLE.

IgG антитела срещу двойноверижна ДНК

Наличието на IgG антитела срещу двойноверижна ДНК (anti-dsDNA IgG; anti-dsDNA IgG) е силно специфично за SLE и в по-малка степен за други дифузни заболявания на съединителната тъкан или лекарствено индуциран SLE. Чувствителността на теста за SLE е 85%. Количественото определяне на анти-dsDNA IgG антитела е най-подходящо за проследяване на състоянието, прогнозата и контрола на терапията при пациенти със СЛЕ, тъй като корелира с неговата активност и тежестта на гломерулонефрита.

Декодиране на резултата от анализа

Вдигам ниво:

• Инфекция с вируса на Epstein-Barr;

Понижаване:

• норма.

Анти-кардиолипинови IgG антитела

Антикардиолипиновите IgG антитела (aCL IgG) са един от видовете автоимунни антифосфолипидни антитела, включени в патогенезата на антифосфолипиден синдром. Тяхното присъствие в кръвта се проявява чрез удължаване на фосфолипид-зависимите коагулограмни тестове (протромбин, aPTT), което се нарича "лупусен антикоагулант".

Декодиране на резултата от анализа

• лекарствено индуциран лупус;
• хепатит С;
• борелиоза;
• HIV инфекция.

Антитела срещу кардиолипин IgM

Антителата срещу кардиолипин IgM (aCL IgM), когато бъдат открити, показват висок риск от развитие на SLE; aCL IgM се откриват при 20-50% от пациентите със системен лупус еритематозус и 3-20% от пациентите с други системни ревматични заболявания.

Интерпретация

Положителен (открити антитела):

• хепатит С;
• борелиоза;
• HIV инфекция;
• системни заболявания на съединителната тъкан.

Норми

Индекс	норма
Лупусен антикоагулант (LA, Лупусни антикоагуланти, LA)	отрича се
Антинуклеарен фактор върху клетъчната линия HEp-2 (ANF HEp-2, титри; ANA IF, титри)	< 1:160
Антитела срещу нуклеозоми	< 20 отн. ед./мл
IgG антитела срещу двойноверижна ДНК	< 20 МЕ/мл (отрицательно)
Антикардиолипинови IgG антитела (aCL IgG)	отрицателен или< 12 GPL-ед./мл
Антикардиолипинови IgM антитела (aCL IgM)	< 12 MPL-ед./мл

Системни ревматични заболявания
Антинуклеарен фактор (ANF) и тип луминесценция

Определянето на антинуклеарен фактор (ANF) е основният метод за откриване на антинуклеарни антитела, който позволява откриването на повечето видове антинуклеарни антитела, включително автоантитела към нуклеинови киселини (dsDNA, ssDNA, RNA), конформационни и неразтворими антигени. Резултатът от определянето на ANF е наличието на автоантитела в диагностичния титър, крайния титър на серумното разреждане, отразяващ афинитета и концентрацията на автоантитела, както и вида на луминесценцията на клетъчното ядро (тест 01.02.15.005). Характеристиките на дадена техника зависят преди всичко от избора на субстрат, който може да варира от криосекции (черен дроб или бъбрек на плъх) до култивирани пролифериращи клетъчни линии (Hep2, Kb, HeLa), както и от метода на тъканна фиксация, който може да повлияе запазването на редица ядрени антигени ANA.

История на развитието на тестове за откриване на антинуклеарни антитела:

Началото на ХХ век - "хиалинни телца" в цитоплазмата на левкоцитите

1948 Hargraves, Richmond, Morton - метод за in vitro откриване на LE клетки по време на дългосрочна инкубация на левкемия от пациенти със SLE

1951 Lee, Michael, Vural - открива серумен фактор, който стимулира фагоцитозата на лимфоцитните ядра от левкоцитите на периферната кръв

1957 Holoborow, Weir, Johnson използват индиректния имунофлуоресцентен метод, разработен от Coons през 1950 г., за да открият ANF в криосекции на човешки черен дроб

1961 г. Beck - използва тъкан от лабораторни животни

1982 Tan - използва човешката непрекъсната клетъчна линия HEp-2, този тест се превърна в златен стандарт за откриване на ANA

1958 г. Джоунс - открива в кръвта на пациенти със синдром на Sjögren фактор, способен да утаява екстракти от клетъчни ядра, което служи като тласък за описанието на повечето разновидности на антинуклеарни антитела

Индиректна имунофлуоресценция върху непрекъсната клетъчна линия Hep2

Метод за откриване на ANF е разработен от Tan (1982), който използва човешката непрекъсната епителиоидна клетъчна линия HEp-2 (ATCC реф. № CCL-23) като субстрат. Тази клетъчна линия, получена от човешки ларингеален аденокарцином, е голяма полиплоидна некератинизираща плоскоклетъчна епителна клетка, която образува монослой върху пластмаса и стъкло.

Фигура: клетки от клетъчната линия HEp-2, оцветени с хематологично багрило.

Сравнителната непретенциозност на тази линия, големите ядра и наличието на всички човешки антигени направиха метода на индиректна имунофлуоресценция с помощта на непрекъсната клетъчна линия HEp-2 основният метод за откриване на ANF. В англоезичната литература няма едно наименование за този метод, понякога за краткост този метод се нарича FANA (Fluorescent AntiNuclear Antibody detection). Липсата на единство в номенклатурата доведе до объркване в наименованията на лабораторните изследвания. Понякога терминът "антинуклеарни антитела" се използва от имунологичните лаборатории за обозначаване на тестове, базирани на методи за ензимен имуноанализ и имунохимичен анализ, както и метода на имунофлуоресценцията. В рускоезичната литература считаме за необходимо да запазим местното име за този показател - „антинуклеарен фактор“ (ANF), за да разграничим имунофлуоресцентния метод от други тестове за откриване на ANA.

Необходимо е да се идентифицира ANF от клас IgG, тъй като откриването на ANF, представен от други класове имуноглобулини, няма независима диагностична стойност. Стандартните разреждания на серума на пациента се инкубират с тъканен субстрат, което позволява на антинуклеарните антитела от серума на пациента да се свържат с подходящи ядрени мишени. След това местата за свързване на автоантитела се откриват с помощта на белязан с флуоресцеин античовешки антисерум.

Въпреки че други човешки клетъчни линии могат да се използват като субстрати, поради тяхната добра морфология и лекота на култивиране, Hep-2 се превърна в общоприет субстрат за индиректна имунофлуоресценция. Използването му подобрява чувствителността на теста поради ярката флуоресценция дори при значителни разреждания на серума на пациента, а голямото, богато на еухроматин ядро ​​позволява точно описание на типа флуоресценция. В допълнение, използването на клетъчната линия Hep-2 улеснява откриването на Ro/SS-A антитела, както и антитела срещу нуклеоларни антигени, които са лоши при използване на криосекции от лабораторна животинска тъкан. Други предимства на HEp-2 включват висока честота на клетъчно делене, което прави възможно откриването на антитела срещу антигени, експресирани само по време на клетъчното делене, и липсата на тъканна клетъчна матрица, което затруднява визуализирането на специфична луминесценция в сравнение с хистологичната секции.

Титри на антинуклеарен фактор

Титърът на ANF се определя като последното разреждане на серума на пациента, което има ясна флуоресценция на клетъчните ядра. Когато се използват тъкани от лабораторни животни, диагностичният титър на ANF е 1:8-1:10, докато при използване на клетъчна линия HEp-2 се препоръчва използването на начален титър от 1:80. В този случай нормалните титри на ANF са по-малки от 1:160.

При използване на титри по-малки от 1:160, честотата на слабо положителни резултати при клинично здрави индивиди ще бъде не повече от 5% и в същото време няма да позволи да се пропуснат значителни титри на ANA при пациенти с дифузни заболявания на съединителната тъкан.

За определяне на крайния титър обикновено се използва титруване на стъпки x2 (1:160-1:320 - 1:640 - 1:1280 - 1:2560 - 1:5120 и т.н. Може да се използва и по-грубо титруване. На фона при обостряне на ревматични заболявания обикновено се наблюдават титри на ANF над 1: 640, а по време на ремисия титрите намаляват до 1: 160-1: 320.

Има препоръки за оценяване на резултатите от идентифицирането на ANF, като съдържанието се посочва „в кръстовете“. Това позволява на лабораториите да пестят реактиви и да намалят разходите за труд за изследване. В този случай определянето на крайния титър не е възможно. Трябва да се има предвид, че крайният титър е по-важен от количеството на автоантителата, свързани със субстрата, тъй като е пряко свързан с афинитета на тяхното взаимодействие с антигена. Препоръчително е да се определи крайният титър при всички положителни пациенти, което дава възможност да се изясни наличието в серума на автоантитела с висок афинитет, които са по-тясно свързани с активността на процеса.

Тип луминесценция на ядрото на антинуклеарния фактор

Още в първия опит на клиничното използване на непряка имунофлуоресценция за откриване на ANF с помощта на криосекции на лабораторни тъкани беше отбелязано, че серумът на пациенти с автоимунни заболявания „оцветява“ клетъчните ядра по различен начин, което води до селективна луминесценция на някои ядрени структури. Изясняването на това явление доведе до описанието на така наречените "видове луминесценция" на ядрото в имунофлуоресцентния тест. Това се дължи на факта, че всеки тип ANA има специфични клетъчни мишени, в резултат на което типът луминесценция на ядрото, нуклеола и цитоплазмата на клетката отразява взаимодействието на ANA в серума на пациента с антиген-съдържащи структури вътре клетката. Видът на луминесценцията зависи от наличието на специфични автоантитела в кръвния серум на пациента, въз основа на което може да се направи предварително заключение относно видовете ANA, които присъстват в този серум. Въпреки това, използването на хистологични срезове от тъкан от лабораторни животни не позволява надеждно да се установи вида на луминесценцията. В същото време използването на непрекъснати клетъчни линии, като Hep-2, дава възможност да се опишат значителен брой варианти на ядрено и цитоплазмено оцветяване. Има три основни групи антигени, наличието на антитела към които определя различни видове луминесценция:

Типът луминесценция на клетъчното ядро ​​значително увеличава информационното съдържание за идентифициране на ANF и следователно трябва да се определя рутинно при определяне на този показател. Използването на HEp-2 клетки дава възможност да се характеризират повече от 20 различни варианта на ядрено оцветяване, които зависят от спектъра на ANA, присъстващи в изследвания серум. Въпреки това, за практическа лаборатория е достатъчно да се разграничат 6 основни варианта за свързване на автоантитела към антиген-съдържащи клетъчни структури.

Има хомогенен, периферен, гранулиран (малък/голям), нуклеоларен, центромерен и цитоплазмен тип ядрена луминесценция. Всеки тип луминесценция има много характерни характеристики, които позволяват да се разграничи една опция от друга, както и набор от антигени, с които реагират автоантитела в серумите на пациентите. Описанието на видовете луминесценция само по себе си предоставя ценна клинична информация, освен това типът луминесценция може да покаже необходимостта от определени лабораторни изследвания в бъдеще.

При хомогенен типсветят автоантителата реагират с тези антигени, които са разпределени дифузно в ядрото, т.е. са част от хроматина. Обикновено, когато се открие хомогенен тип луминесценция, кондензираните хромозоми са ярко оцветени в делящите се клетки. Основните структурни единици на хроматина са нуклеозомите - комплекси от ДНК и хистони. По този начин хомогенният тип луминесценция предполага наличието на антитела срещу нуклеозоми, dsDNA и антитела срещу хистони. Среща се при пациенти със СЛЕ и медикаментозен лупус, както и при пациенти със склеродермия. Обикновено откриването на висок титър на ANF с хомогенен тип луминесценция показва диагноза SLE.

Периферен тип сиянието често се изолира отделно, въпреки че е вид хомогенно сияние. Откриването му е артефакт на клетъчна фиксация, което води до преразпределение на хроматина в ядрото към периферията. Важно е да се разграничи периферният тип луминесценция от оцветяването на ядрената мембрана, което се наблюдава при автоимунни чернодробни заболявания. Периферният тип луминесценция се открива при пациенти с антитела срещу двойноверижна ДНК и се открива главно при пациенти със SLE.

Гранулиран тип е най-честата и в същото време най-неспецифичната. Понякога този тип блясък в руската литература се нарича „пъстър“ или „мрежа“. Името "гранулиран" отразява по-точно това явление, тъй като в този случай автоантителата реагират с гранули в ядрото, които са супрамолекулни нуклеопротеинови комплекси. Такива комплекси от протеини и нуклеинови киселини изпълняват редица функции в ядрото, които са необходими за нормалното функциониране на клетката. Такива комплекси, по-специално, включват сплайсозоми, които извършват пост-транскрипционно пренареждане на иРНК, необходима за протеиновия синтез върху рибозомите. Съставът съдържа много различни нуклеопротеини, което определя разнообразието от антигенни цели при откриване на гранулиран тип луминесценция. Основните автоантигени, антителата към които водят до визуализиране на гранулирания тип луминесценция, включват Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B антигени и PCNA. По време на процеса на клетъчно делене клетките губят повечето от образуваните нуклеопротеинови комплекси; следователно митотичните фигури в клетъчна линия с гранулиран тип луминесценция не се оцветяват. Гранулираният тип ядрена луминесценция се наблюдава при пациенти със SLE, SS, SS, DM/PM, RA и редица други автоимунни заболявания. Ниските титри на ANF от гранулиран тип преобладават в кръвните серуми на клинично здрави индивиди с ANF без признаци на системно заболяване.

Откриване на много високи титри на ANF (1:2560-1:10000) с тип груби гранули ядрената луминесценция обикновено показва диагноза смесено заболяване на съединителната тъкан и изисква допълнително изследване за идентифициране на RNP антигена, който е основният серологичен маркер на това заболяване.

Нуклеоларните антигени могат да действат като мишени на ANA, което води до откриването нуклеоларен типфлуоресценция. Идентифицирането на нуклеоларния тип блясък е характерно за склеродермията и нейните разновидности. Нуклеоларен тип флуоресценция определени при пациенти с антитела към компоненти на ядрото, като РНК полимераза 1, NOR, U 3 RNP, PM/Scl.

Центромерен тип флуоресценцията се забелязва, когато се появят антитела към центромерите на хромозомите и се открива само в делящи се клетки. Наличието му е характерно за CREST варианта на склеродермия.

Цитоплазмен тип сиянието показва антитела срещу tRNA синтетази, по-специално Jo-1, които се наблюдават при полимиозит. Освен това се открива при пациенти с ANA, насочена срещу други компоненти на клетъчната цитоплазма: антитела срещу актин при автоимунен хепатит, антитела срещу митохондрии при първична билиарна цироза.

Редица други видове луминесценция могат да бъдат характеризирани и тези видове оцветяване на клетъчното ядро ​​могат да бъдат характерни за определен тип ANA. По този начин антителата срещу Scl-70 в имунофлуоресцентен тест върху HEp-20 клетки дават фино оцветяване на ядрото и нуклеолите, анти-p80 - светещи точки в ядрото, които липсват в митотичните клетки. Необходимо е обаче да се отбележи рядкостта и разнообразието на подобни явления, което прави ненужно идентифицирането им при рутинни изследвания.

Често може да възникне комбинация от няколко вида луминесценция, например фино гранулирана и нуклеоларна, което е типично за антитела срещу Scl-70. Освен това често при ниски разреждания преобладава един вид флуоресценция, например гранулирана, а при по-нататъшни разреждания се откриват хомогенни или центромерни типове флуоресценция, което показва наличието на различни видове ANA в серума на пациента. Въпреки че видът на блясъка предоставя на лекаря определени данни в полза на определена диагноза, е необходимо да се вземе предвид неговата относително ниска специфичност и разнообразието от срещани явления, което изисква допълнително лабораторно изследване.

Откриването на ANA е основа за използването на други лабораторни изследвания, които изясняват спектъра на ANA в кръвта на пациентите. Като се има предвид изключителното информационно съдържание на този тест, по-нататъшното тестване и анализ на резултатите от последващо изследване трябва да се тълкуват в зависимост от резултатите от оценката на типа луминесценция и титъра на ANF.

Въпреки че липсата на значими титри на ANA почти винаги изключва диагнозата на активно системно ревматично заболяване, при използване на HEp-2 клетъчна линия, при 2-4% от пациентите, които отговарят на критериите за диагностициране на SLE, ANA не се откриват или титри са ниски. Тези пациенти понякога се класифицират като " ANF-отрицателен SLE„За изясняване на диагнозата при такива пациенти са необходими допълнителни изследвания, преди всичко идентифициране на антитела срещу SS-A антигени. Тези антигени са силно разтворими и могат да бъдат загубени от клетъчните ядра. За намаляване на тази категория пациенти се използва комплексно изследване, включващо определяне на антитела към екстрахирани ядрени антигени, т.нар. скрининг за заболявания на съединителната тъкан», тест 000723. Отрицателният резултат от такова изследване позволява с много голяма вероятност да се изключи диагнозата SLE и други системни ревматични заболявания.

Системни ревматични заболявания
Антинуклеарен фактор (ANF) и тип луминесценция

Определянето на антинуклеарен фактор (ANF) е основният метод за откриване на антинуклеарни антитела, който позволява откриването на повечето видове антинуклеарни антитела, включително автоантитела към нуклеинови киселини (dsDNA, ssDNA, RNA), конформационни и неразтворими антигени. Резултатът от определянето на ANF е наличието на автоантитела в диагностичния титър, крайния титър на серумното разреждане, отразяващ афинитета и концентрацията на автоантитела, както и вида на луминесценцията на клетъчното ядро (тест 01.02.15.005). Характеристиките на дадена техника зависят преди всичко от избора на субстрат, който може да варира от криосекции (черен дроб или бъбрек на плъх) до култивирани пролифериращи клетъчни линии (Hep2, Kb, HeLa), както и от метода на тъканна фиксация, който може да повлияе запазването на редица ядрени антигени ANA.

История на развитието на тестове за откриване на антинуклеарни антитела:

Началото на ХХ век - "хиалинни телца" в цитоплазмата на левкоцитите

1948 Hargraves, Richmond, Morton - метод за in vitro откриване на LE клетки по време на дългосрочна инкубация на левкемия от пациенти със SLE

1951 Lee, Michael, Vural - открива серумен фактор, който стимулира фагоцитозата на лимфоцитните ядра от левкоцитите на периферната кръв

1957 Holoborow, Weir, Johnson използват индиректния имунофлуоресцентен метод, разработен от Coons през 1950 г., за да открият ANF в криосекции на човешки черен дроб

1961 г. Beck - използва тъкан от лабораторни животни

1982 Tan - използва човешката непрекъсната клетъчна линия HEp-2, този тест се превърна в златен стандарт за откриване на ANA

1958 г. Джоунс - открива в кръвта на пациенти със синдром на Sjögren фактор, способен да утаява екстракти от клетъчни ядра, което служи като тласък за описанието на повечето разновидности на антинуклеарни антитела

Индиректна имунофлуоресценция върху непрекъсната клетъчна линия Hep2

Метод за откриване на ANF е разработен от Tan (1982), който използва човешката непрекъсната епителиоидна клетъчна линия HEp-2 (ATCC реф. № CCL-23) като субстрат. Тази клетъчна линия, получена от човешки ларингеален аденокарцином, е голяма полиплоидна некератинизираща плоскоклетъчна епителна клетка, която образува монослой върху пластмаса и стъкло.

Фигура: клетки от клетъчната линия HEp-2, оцветени с хематологично багрило.

Сравнителната непретенциозност на тази линия, големите ядра и наличието на всички човешки антигени направиха метода на индиректна имунофлуоресценция с помощта на непрекъсната клетъчна линия HEp-2 основният метод за откриване на ANF. В англоезичната литература няма едно наименование за този метод, понякога за краткост този метод се нарича FANA (Fluorescent AntiNuclear Antibody detection). Липсата на единство в номенклатурата доведе до объркване в наименованията на лабораторните изследвания. Понякога терминът "антинуклеарни антитела" се използва от имунологичните лаборатории за обозначаване на тестове, базирани на методи за ензимен имуноанализ и имунохимичен анализ, както и метода на имунофлуоресценцията. В рускоезичната литература считаме за необходимо да запазим местното име за този показател - „антинуклеарен фактор“ (ANF), за да разграничим имунофлуоресцентния метод от други тестове за откриване на ANA.

Необходимо е да се идентифицира ANF от клас IgG, тъй като откриването на ANF, представен от други класове имуноглобулини, няма независима диагностична стойност. Стандартните разреждания на серума на пациента се инкубират с тъканен субстрат, което позволява на антинуклеарните антитела от серума на пациента да се свържат с подходящи ядрени мишени. След това местата за свързване на автоантитела се откриват с помощта на белязан с флуоресцеин античовешки антисерум.

Въпреки че други човешки клетъчни линии могат да се използват като субстрати, поради тяхната добра морфология и лекота на култивиране, Hep-2 се превърна в общоприет субстрат за индиректна имунофлуоресценция. Използването му подобрява чувствителността на теста поради ярката флуоресценция дори при значителни разреждания на серума на пациента, а голямото, богато на еухроматин ядро ​​позволява точно описание на типа флуоресценция. В допълнение, използването на клетъчната линия Hep-2 улеснява откриването на Ro/SS-A антитела, както и антитела срещу нуклеоларни антигени, които са лоши при използване на криосекции от лабораторна животинска тъкан. Други предимства на HEp-2 включват висока честота на клетъчно делене, което прави възможно откриването на антитела срещу антигени, експресирани само по време на клетъчното делене, и липсата на тъканна клетъчна матрица, което затруднява визуализирането на специфична луминесценция в сравнение с хистологичната секции.

Титри на антинуклеарен фактор

Титърът на ANF се определя като последното разреждане на серума на пациента, което има ясна флуоресценция на клетъчните ядра. Когато се използват тъкани от лабораторни животни, диагностичният титър на ANF е 1:8-1:10, докато при използване на клетъчна линия HEp-2 се препоръчва използването на начален титър от 1:80. В този случай нормалните титри на ANF са по-малки от 1:160.

При използване на титри по-малки от 1:160, честотата на слабо положителни резултати при клинично здрави индивиди ще бъде не повече от 5% и в същото време няма да позволи да се пропуснат значителни титри на ANA при пациенти с дифузни заболявания на съединителната тъкан.

За определяне на крайния титър обикновено се използва титруване на стъпки x2 (1:160-1:320 - 1:640 - 1:1280 - 1:2560 - 1:5120 и т.н. Може да се използва и по-грубо титруване. На фона при обостряне на ревматични заболявания обикновено се наблюдават титри на ANF над 1: 640, а по време на ремисия титрите намаляват до 1: 160-1: 320.

Има препоръки за оценяване на резултатите от идентифицирането на ANF, като съдържанието се посочва „в кръстовете“. Това позволява на лабораториите да пестят реактиви и да намалят разходите за труд за изследване. В този случай определянето на крайния титър не е възможно. Трябва да се има предвид, че крайният титър е по-важен от количеството на автоантителата, свързани със субстрата, тъй като е пряко свързан с афинитета на тяхното взаимодействие с антигена. Препоръчително е да се определи крайният титър при всички положителни пациенти, което дава възможност да се изясни наличието в серума на автоантитела с висок афинитет, които са по-тясно свързани с активността на процеса.

Тип луминесценция на ядрото на антинуклеарния фактор

Още в първия опит на клиничното използване на непряка имунофлуоресценция за откриване на ANF с помощта на криосекции на лабораторни тъкани беше отбелязано, че серумът на пациенти с автоимунни заболявания „оцветява“ клетъчните ядра по различен начин, което води до селективна луминесценция на някои ядрени структури. Изясняването на това явление доведе до описанието на така наречените "видове луминесценция" на ядрото в имунофлуоресцентния тест. Това се дължи на факта, че всеки тип ANA има специфични клетъчни мишени, в резултат на което типът луминесценция на ядрото, нуклеола и цитоплазмата на клетката отразява взаимодействието на ANA в серума на пациента с антиген-съдържащи структури вътре клетката. Видът на луминесценцията зависи от наличието на специфични автоантитела в кръвния серум на пациента, въз основа на което може да се направи предварително заключение относно видовете ANA, които присъстват в този серум. Въпреки това, използването на хистологични срезове от тъкан от лабораторни животни не позволява надеждно да се установи вида на луминесценцията. В същото време използването на непрекъснати клетъчни линии, като Hep-2, дава възможност да се опишат значителен брой варианти на ядрено и цитоплазмено оцветяване. Има три основни групи антигени, наличието на антитела към които определя различни видове луминесценция:

Типът луминесценция на клетъчното ядро ​​значително увеличава информационното съдържание за идентифициране на ANF и следователно трябва да се определя рутинно при определяне на този показател. Използването на HEp-2 клетки дава възможност да се характеризират повече от 20 различни варианта на ядрено оцветяване, които зависят от спектъра на ANA, присъстващи в изследвания серум. Въпреки това, за практическа лаборатория е достатъчно да се разграничат 6 основни варианта за свързване на автоантитела към антиген-съдържащи клетъчни структури.

Има хомогенен, периферен, гранулиран (малък/голям), нуклеоларен, центромерен и цитоплазмен тип ядрена луминесценция. Всеки тип луминесценция има много характерни характеристики, които позволяват да се разграничи една опция от друга, както и набор от антигени, с които реагират автоантитела в серумите на пациентите. Описанието на видовете луминесценция само по себе си предоставя ценна клинична информация, освен това типът луминесценция може да покаже необходимостта от определени лабораторни изследвания в бъдеще.

При хомогенен типсветят автоантителата реагират с тези антигени, които са разпределени дифузно в ядрото, т.е. са част от хроматина. Обикновено, когато се открие хомогенен тип луминесценция, кондензираните хромозоми са ярко оцветени в делящите се клетки. Основните структурни единици на хроматина са нуклеозомите - комплекси от ДНК и хистони. По този начин хомогенният тип луминесценция предполага наличието на антитела срещу нуклеозоми, dsDNA и антитела срещу хистони. Среща се при пациенти със СЛЕ и медикаментозен лупус, както и при пациенти със склеродермия. Обикновено откриването на висок титър на ANF с хомогенен тип луминесценция показва диагноза SLE.

Периферен тип сиянието често се изолира отделно, въпреки че е вид хомогенно сияние. Откриването му е артефакт на клетъчна фиксация, което води до преразпределение на хроматина в ядрото към периферията. Важно е да се разграничи периферният тип луминесценция от оцветяването на ядрената мембрана, което се наблюдава при автоимунни чернодробни заболявания. Периферният тип луминесценция се открива при пациенти с антитела срещу двойноверижна ДНК и се открива главно при пациенти със SLE.

Гранулиран тип е най-честата и в същото време най-неспецифичната. Понякога този тип блясък в руската литература се нарича „пъстър“ или „мрежа“. Името "гранулиран" отразява по-точно това явление, тъй като в този случай автоантителата реагират с гранули в ядрото, които са супрамолекулни нуклеопротеинови комплекси. Такива комплекси от протеини и нуклеинови киселини изпълняват редица функции в ядрото, които са необходими за нормалното функциониране на клетката. Такива комплекси, по-специално, включват сплайсозоми, които извършват пост-транскрипционно пренареждане на иРНК, необходима за протеиновия синтез върху рибозомите. Съставът съдържа много различни нуклеопротеини, което определя разнообразието от антигенни цели при откриване на гранулиран тип луминесценция. Основните автоантигени, антителата към които водят до визуализиране на гранулирания тип луминесценция, включват Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B антигени и PCNA. По време на процеса на клетъчно делене клетките губят повечето от образуваните нуклеопротеинови комплекси; следователно митотичните фигури в клетъчна линия с гранулиран тип луминесценция не се оцветяват. Гранулираният тип ядрена луминесценция се наблюдава при пациенти със SLE, SS, SS, DM/PM, RA и редица други автоимунни заболявания. Ниските титри на ANF от гранулиран тип преобладават в кръвните серуми на клинично здрави индивиди с ANF без признаци на системно заболяване.

Откриване на много високи титри на ANF (1:2560-1:10000) с тип груби гранули ядрената луминесценция обикновено показва диагноза смесено заболяване на съединителната тъкан и изисква допълнително изследване за идентифициране на RNP антигена, който е основният серологичен маркер на това заболяване.

Нуклеоларните антигени могат да действат като мишени на ANA, което води до откриването нуклеоларен типфлуоресценция. Идентифицирането на нуклеоларния тип блясък е характерно за склеродермията и нейните разновидности. Нуклеоларен тип флуоресценция определени при пациенти с антитела към компоненти на ядрото, като РНК полимераза 1, NOR, U 3 RNP, PM/Scl.

Центромерен тип флуоресценцията се забелязва, когато се появят антитела към центромерите на хромозомите и се открива само в делящи се клетки. Наличието му е характерно за CREST варианта на склеродермия.

Цитоплазмен тип сиянието показва антитела срещу tRNA синтетази, по-специално Jo-1, които се наблюдават при полимиозит. Освен това се открива при пациенти с ANA, насочена срещу други компоненти на клетъчната цитоплазма: антитела срещу актин при автоимунен хепатит, антитела срещу митохондрии при първична билиарна цироза.

Редица други видове луминесценция могат да бъдат характеризирани и тези видове оцветяване на клетъчното ядро ​​могат да бъдат характерни за определен тип ANA. По този начин антителата срещу Scl-70 в имунофлуоресцентен тест върху HEp-20 клетки дават фино оцветяване на ядрото и нуклеолите, анти-p80 - светещи точки в ядрото, които липсват в митотичните клетки. Необходимо е обаче да се отбележи рядкостта и разнообразието на подобни явления, което прави ненужно идентифицирането им при рутинни изследвания.

Често може да възникне комбинация от няколко вида луминесценция, например фино гранулирана и нуклеоларна, което е типично за антитела срещу Scl-70. Освен това често при ниски разреждания преобладава един вид флуоресценция, например гранулирана, а при по-нататъшни разреждания се откриват хомогенни или центромерни типове флуоресценция, което показва наличието на различни видове ANA в серума на пациента. Въпреки че видът на блясъка предоставя на лекаря определени данни в полза на определена диагноза, е необходимо да се вземе предвид неговата относително ниска специфичност и разнообразието от срещани явления, което изисква допълнително лабораторно изследване.

Откриването на ANA е основа за използването на други лабораторни изследвания, които изясняват спектъра на ANA в кръвта на пациентите. Като се има предвид изключителното информационно съдържание на този тест, по-нататъшното тестване и анализ на резултатите от последващо изследване трябва да се тълкуват в зависимост от резултатите от оценката на типа луминесценция и титъра на ANF.

Въпреки че липсата на значими титри на ANA почти винаги изключва диагнозата на активно системно ревматично заболяване, при използване на HEp-2 клетъчна линия, при 2-4% от пациентите, които отговарят на критериите за диагностициране на SLE, ANA не се откриват или титри са ниски. Тези пациенти понякога се класифицират като " ANF-отрицателен SLE„За изясняване на диагнозата при такива пациенти са необходими допълнителни изследвания, преди всичко идентифициране на антитела срещу SS-A антигени. Тези антигени са силно разтворими и могат да бъдат загубени от клетъчните ядра. За намаляване на тази категория пациенти се използва комплексно изследване, включващо определяне на антитела към екстрахирани ядрени антигени, т.нар. скрининг за заболявания на съединителната тъкан», тест 000723. Отрицателният резултат от такова изследване позволява с много голяма вероятност да се изключи диагнозата SLE и други системни ревматични заболявания.