وصف

طريقة التحديدطخة مناعية.

المواد قيد الدراسةمصل الدم

زيارة منزلية متاحة

الأجسام المضادة للنواة هي عائلة من الأجسام المضادة الذاتية التي ترتبط بالأحماض النووية الريبية والبروتينات المرتبطة بها. تحدث في أكثر من 90% من المرضى الذين يعانون من أمراض النسيج الضام المنتشرة، وغالبًا ما يتم ملاحظتها أيضًا في أمراض الكبد المناعية الذاتية وعدد من الحالات الأخرى. حتى الآن، تم تشخيص حوالي 200 نوع من هذه العائلة من الأجسام المضادة الذاتية، ولكن لا يمكن استخدام جميعها في الممارسة السريرية.

تسمح الكتلة المناعية للأجسام المضادة للنواة بدراسة 15 نوعًا رئيسيًا من الأجسام المضادة للنواة في اختبار واحد في وقت واحد، مما يضمن التشخيص التفريقي للأمراض الروماتيزمية الجهازية الرئيسية. عادة ما يتم ملاحظة كل نوع من الأجسام المضادة الذاتية التي يتم اكتشافها باستخدام اللطخة المناعية في المرضى الذين لديهم صورة سريرية مميزة، وبالتالي فإن نطاق الأجسام المضادة الذاتية لا يسمح فقط بتشخيص المرض، ولكن أيضًا لتحديد خطر الإصابة بمظاهر سريرية معينة.

يُنصح باستخدام كتلة مناعية من الأجسام المضادة للنواة في المرحلة الثانية من الفحص المصلي إذا كانت نتيجة الاختبارات الأخرى إيجابية، مما يشير إلى وجود الأجسام المضادة للنواة في مصل المريض. وتشمل هذه الاختبارات تحديد الأجسام المضادة للنواة (فحص ELISA)، والكشف عن العامل المضاد للنواة (ANF) على خلايا Hep2 ()، والأجسام المضادة للنواة والأجسام المضادة للمستضد النووي القابل للاستخراج (ENA).

تتميز طريقة التطعيم المناعي للأجسام المضادة للنواة في تشخيص الأمراض الروماتيزمية الجهازية بالخصوصية السريرية العالية. لكن خصوصية الأجسام المضادة للنواة، حتى مع وجود عيارات عالية من ANF ()، لا يمكن دائمًا تحديدها، حيث أن عددًا من مستضدات الأجسام المضادة للنواة لا تزال غير مميزة. النتيجة المناعية السلبية في هذه الحالة لا تستبعد تشخيص الأمراض الروماتيزمية الجهازية. يمكن اكتشاف عدد من الأجسام المضادة للنواة باستخدام طخة مناعية - لوحة من الأجسام المضادة الذاتية الخاصة بالتهاب العضلات () وطخة مناعية - لوحة من الأجسام المضادة الذاتية لتصلب الجلد ().

الأدب

1. لابين إس. توتوليان أ.أ. التشخيص المختبري المناعي لأمراض المناعة الذاتية / دار النشر "مان" سانت بطرسبرغ - 2010. 272 ​​​​ص.
2. ناسونوف إي.إل.، ألكسندروفا إي.إن. المعايير الحديثة للتشخيص المخبري للأمراض الروماتيزمية. التوصيات السريرية / BHM, M - 2006.
3. كونراد ك، شلوسلر دبليو، هيبي إف، فيتزلر إم جيه. الأجسام المضادة الذاتية في أمراض المناعة الذاتية الخاصة بالأعضاء: مرجع تشخيصي/ PABST، دريسدن – 2011. 300 ص.
4. كونراد ك، شلوسلر دبليو، هيبي إف، فيتزلر إم جيه. الأجسام المضادة الذاتية في أمراض المناعة الذاتية الجهازية: مرجع تشخيصي/ PABST، دريسدن – 2007. 300 ص.
5. غيرشفين إم إي، ميروني بي إل، شوينفيلد واي. الأجسام المضادة الذاتية الطبعة الثانية./ إلسفير ساينس – 2006. 862 ص.
6. Shoenfeld Y., Cervera R, Gershvin ME معايير التشخيص في أمراض المناعة الذاتية / Humana Press – 2008. 598 ص.
7. تعليمات لمجموعة الكاشف.

تحضير

يفضل الانتظار لمدة 4 ساعات بعد تناول وجبتك الأخيرة، فلا توجد متطلبات إلزامية.

مؤشرات للاستخدام

يشار إلى الاختبار للتشخيص والتشخيص التفريقي للحالات التالية:

• الذئبة الحمامية الجهازية؛
• الذئبة الجلدية تحت الحادة وأنواع أخرى من الذئبة الجلدية.
• مرض النسيج الضام المختلط.
• متلازمة سجوجرن والأمراض المرتبطة بها.
• تصلب الجلد المنتشر والموضعي، متلازمة كريست.
• اعتلال عضلي التهابي (التهاب العضلات والتهاب الجلد والعضلات) ؛
• التهاب المفاصل المزمن للأحداث.
• التهاب الكبد المناعي الذاتي
• تليف الكبد الصفراوي الأولي والتهاب الأقنية الصفراوية المصلب.
• يشار إلى استخدام هذا الاختبار عند اكتشاف عيارات عالية من العامل المضاد للنواة، والأجسام المضادة للنواة، والأجسام المضادة للمستضد النووي القابل للاستخراج، والأجسام المضادة للحمض النووي، والأجسام المضادة للجسيمات النووية، والأجسام المضادة للفوسفوليبيد.

تفسير النتائج

يحتوي تفسير نتائج البحث على معلومات للطبيب المعالج وليس تشخيصًا. لا ينبغي استخدام المعلومات الواردة في هذا القسم للتشخيص الذاتي أو العلاج الذاتي. يقوم الطبيب بإجراء تشخيص دقيق باستخدام نتائج هذا الفحص والمعلومات الضرورية من مصادر أخرى: التاريخ الطبي، نتائج الفحوصات الأخرى، إلخ.

وحدات القياس: اختبار نوعي، وتعرض النتيجة على شكل “مكتشف” أو “لم يتم الكشف عنه”.

عندما يتم اكتشاف نطاق يميز وجود أي نوع من الأجسام المضادة، يتم وصف شدة لون النطاق بالإضافة إلى ذلك من خلال عدد الإيجابيات ("التقاطعات") لكل نوع من أنواع الأجسام المضادة المحددة. تعكس الزيادة في درجة الإيجابية بشكل غير مباشر محتوى الأجسام المضادة الذاتية وتقاربها.

القيم المرجعية: الأجسام المضادة لـ Sm، RNP/Sm، SS-A (60 كيلو دالتون)، SS-A (52 كيلو دالتون)، SS-B، Scl-70، PM-Scl، PCNA، CENP-B، dsDNA، Histone، Nucleosome لم يتم الكشف عن Rib P، AMA-M2، Jo-1.

يتم عرض نتيجة تحديد الأجسام المضادة الذاتية في "تقاطعات" لكل مستضد مناظر. تعكس الزيادة في درجة الإيجابية المصلية بشكل غير مباشر محتوى الأجسام المضادة الذاتية وتقاربها. فيما يلي خيارات نتيجة تقييم الإيجابية المصلية:

1. لم يتم الكشف عن الأجسام المضادة.
2. +/- - نتيجة الحدود؛
3. + - محتوى منخفض من الأجسام المضادة الذاتية لمستضد معين؛
4. ++ – متوسط ​​محتوى الأجسام المضادة الذاتية لمستضد معين؛
5. +++ – نسبة عالية من الأجسام المضادة الذاتية لمستضد معين.

الأمراض الرئيسية المرتبطة باكتشاف الأجسام المضادة للنواة:

في ممارسة التشخيص المختبري للأمراض المعدية، تكون هناك أحيانًا حاجة لتحديد الأجسام المضادة ليس لمسببات الأمراض بشكل عام، ولكن لبعض بروتيناتها (المستضدات)، أي مجموعة من الأجسام المضادة المحددة. إذا تم استخدام طريقة مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم لهذا الغرض، فمن الضروري في هذه الحالة أولاً عزل وتنقية المستضدات الضرورية من ثقافة العامل الممرض. يتم تطبيق البروتينات الناتجة بشكل منفصل على المرحلة الصلبة. في حالة استخدام لوحة 96 بئر، يتم وضع نوع واحد من المستضد في كل بئر. ثم يتم تحديد الأجسام المضادة المحددة بطريقة غير مباشرة.

من خلال وجود رد فعل إيجابي في البئر مع مستضد معين، يمكن الحكم على وجود الأجسام المضادة المحددة المقابلة. يتم تقديم هذه الأنواع من أنظمة اختبار الإنزيم المناعي من قبل شركات التصنيع، ولكن طريقة التطعيم المناعي (اللطخة الغربية) أصبحت منتشرة على نطاق واسع بسبب محتواها الأكبر من المعلومات وسهولة تنفيذ الدراسة نفسها.

يسمح النشاف المناعي للشخص بتحديد الأجسام المضادة في مصل الدم في وقت واحد وفي نفس الوقت بشكل تفاضلي لجميع البروتينات ذات الأهمية التشخيصية للعامل الممرض. الترجمة من الإنجليزية Western blot تعني النقل الغربي (حرفيًا - النشاف). تاريخ هذا المصطلح غير العادي هو كما يلي.

في عام 1975، اقترح عالم يُدعى إي. ساذرن لأول مرة طريقة لنقل أجزاء الحمض النووي المنفصلة كهربائيًا من مادة هلامية إلى غشاء. وبحسب المؤلف فإن الطريقة كانت تسمى "اللطخة الجنوبية" والتي تعني "النقل الجنوبي". طريقة نقل جزيئات الحمض النووي الريبي (RNA) أطلق عليها الخبراء لقب اللطخة الشمالية - "النقل الشمالي". في البداية على سبيل المزاح، ثم أصبح هذا الاسم راسخا في الأدبيات العلمية الرسمية.

في عام 1979، نشر ج. توبين نتائج التجارب الأولى على نشاف البروتين. استمرارًا لتقاليد الأسماء "الجغرافية" لطرق نقل الجزيئات البيولوجية، بدأ يطلق على هذه الطريقة اسم النقل "الغربي" - اللطخة الغربية.

تتضمن الخطوة الأولى من هذه الطريقة الفصل الكهربي لخليط من البروتينات المسببة للأمراض في هلام بولي أكريلاميد في وجود كبريتات دوديسيل الصوديوم (SDS). SDS، كونها مادة خافضة للتوتر السطحي، تغلف جزيئات البروتين بالتساوي وتمنحها جميعًا شحنة سالبة متساوية الحجم تقريبًا. ولذلك تتحرك الجزيئات في مجال كهربائي في اتجاه واحد، وتعتمد سرعة حركتها فقط على حجم الجزيء (الوزن الجزيئي) للبروتين.

نتيجة للإجراء الكهربي، يتم الحصول على لوحة هلامية، في سمك البروتينات الموجودة في شكل مناطق خطية رقيقة منفصلة. وفقًا لاتجاه الحركة، يتم تقسيمها بالترتيب التالي: البروتينات ذات الوزن الجزيئي الكبير، حوالي 120-150 كيلو دالتون، تقع بالقرب من البداية، والبروتينات ذات الكتلة 5-10 كيلو دالتون انتقلت إلى أبعد من ذلك. خط النهاية. في المرحلة الثانية، يتم وضع لوحة الهلام على ورقة من النيتروسليلوز ويتم وضع هذا الهيكل بين أقطاب مصدر التيار المباشر. تحت تأثير المجال الكهربائي، تتدفق البروتينات من الجل المسامي إلى غشاء أكثر كثافة، حيث يتم تثبيتها بقوة.

تتم معالجة اللطخة الناتجة بمحلول مانع يحتوي على بروتينات غير مستضدية و/أو منظفات غير أيونية (توين 20)، والتي تحجب المواقع الخالية من المستضد على الغشاء. يتم بعد ذلك قطع طبقة الغشاء إلى شرائح ضيقة بحيث يحتوي كل شريط على جميع أجزاء المستضدات. يتم تنفيذ الخطوات الموضحة من قبل الشركة المصنعة.

تحتوي أنظمة الاختبار التجارية للكشف عن الأجسام المضادة باستخدام النشاف المناعي على بقع (شرائط أو شرائط) جاهزة للاختبار. يحدد المستخدم النطاق الكامل للأجسام المضادة المحددة للبروتينات المسببة للأمراض باستخدام الطريقة غير المباشرة. يتم استخدام مادة عديمة اللون قابلة للذوبان ككروموجين لإجراء تفاعل لوني (إنزيمي)، حيث يكتسب منتجها اللون، ويصبح غير قابل للذوبان ويستقر (يرسب) على النيتروسليلوز.

نتيجة للتفاعلات المناعية والإنزيمية المتسلسلة، في وجود أجسام مضادة لبروتينات مسببات الأمراض في عينة الاختبار، تظهر خطوط عرضية داكنة على اللطخة، ويكون موقعها في منطقة بعض بروتينات مسببات الأمراض. يشير كل نطاق من هذه النطاقات إلى وجود أجسام مضادة محددة للمستضد المقابل. يتم تقديم نتيجة الدراسة التي تم إجراؤها عن طريق التطعيم المناعي في شكل قائمة من الأجسام المضادة لبروتينات معينة من العامل الممرض. على سبيل المثال: "تم اكتشاف أجسام مضادة للبروتينات p17 وp24".

يمكن تخزين بقع النيتروسليلوز جافة لفترة طويلة بعد التطور. ومع ذلك، فإن شدة اللون تضعف بشكل ملحوظ. يمكن تصوير البقع الرطبة أو يمكن إدخال صورها الرسومية في ذاكرة أجهزة الكمبيوتر الشخصية باستخدام الماسحات الضوئية. تتيح لك برامج الكمبيوتر الخاصة معالجة النتائج ومراقبة ديناميكيات طيف الأجسام المضادة بسرعة أثناء المراقبة الديناميكية

طخة مناعية(لطخة غربية) - طريقة للاختبار المعملي لمصل الدم لوجود الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية؛ إنه اختبار أكثر دقة من اختبار ELISA ويستخدم لتأكيد نتائج ELISA. ELISA - مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) - اختبار معملي يسمح لك بتحديد وجود الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية في الدم؛ اختبار الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية.

وفقا لتوصيات منظمة الصحة العالمية، يتم استخدام اللطخة المناعية (لطخة غربية) في تشخيص الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية كطريقة خبيرة إضافية، والتي ينبغي أن تؤكد نتائج ELISA. عادةً ما تقوم هذه الطريقة بالتحقق مرة أخرى من نتيجة ELISA الإيجابية، نظرًا لأنها تعتبر أكثر حساسية وتحديدًا، على الرغم من أنها أكثر تعقيدًا وتكلفة.

يجمع Immunoblotting بين مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) مع الفصل الكهربي الأولي للبروتينات الفيروسية في هلام ونقلها إلى غشاء النيتروسليلوز. يتكون الإجراء المناعي من عدة مراحل (). أولاً، يخضع فيروس نقص المناعة البشرية، الذي تم تنقيته مسبقًا وتدميره إلى مكوناته الأساسية، للرحلان الكهربائي، ويتم فصل جميع المستضدات الموجودة في الفيروس بالوزن الجزيئي. بعد ذلك، وباستخدام طريقة النشاف، يتم نقل المستضدات من الجل إلى شريط من مرشح النيتروسليلوز أو النايلون، والذي يحتوي الآن على طيف من البروتينات المميزة لفيروس نقص المناعة البشرية، غير مرئية للعين. بعد ذلك، يتم تطبيق مادة الاختبار (المصل، بلازما دم المريض، وما إلى ذلك) على الشريط، وإذا كانت هناك أجسام مضادة محددة في العينة، فإنها ترتبط بشرائط بروتين المستضد التي تتوافق معها تمامًا. ونتيجة للتلاعبات اللاحقة (على غرار ELISA)، يتم تصور نتيجة هذا التفاعل - جعلها مرئية. يؤكد وجود العصابات في مناطق معينة من الشريط وجود أجسام مضادة لمستضدات فيروس نقص المناعة البشرية المحددة بدقة في المصل الذي تم اختباره.

غالبًا ما يتم استخدام اللطخة المناعية لتأكيد تشخيص الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية. تعتبر منظمة الصحة العالمية الأمصال الإيجابية التي يتم فيها الكشف عن الأجسام المضادة لأي بروتينين مغلفين لفيروس نقص المناعة البشرية عن طريق التطعيم المناعي. وفقًا لهذه التوصيات، إذا كان هناك تفاعل مع بروتين واحد فقط من بروتينات الغلاف (gp160، gp120، gp41) مجتمعًا أو بدون تفاعل مع بروتينات أخرى، فإن النتيجة تعتبر مشكوك فيها ويوصى بإعادة الاختبار باستخدام مجموعة من سلسلة مختلفة أو من شركة مختلفة. إذا ظلت النتيجة مشكوك فيها حتى بعد ذلك، تستمر الدراسات كل 3 أشهر.

لتنفيذ النشاف المناعي، تتمثل الخطوة الأولى في فصل البروتينات الموجودة في مصل الدم في مادة هلامية وفقًا لوزنها الجزيئي وشحنتها باستخدام مجال كهربائي (الرحلان الكهربائي للهلام). ثم يتم وضع غشاء النيتروسليلوز أو النايلون على الجل و"نشفه" (هذا نشاف). ويتم ذلك في غرفة خاصة تسمح بالنقل الكامل للمادة من الجل إلى الغشاء. ونتيجة لذلك، يتم إعادة إنتاج نمط ترتيب البروتين الذي كان على الجل على الغشاء (لطخة)، والذي يمكن بعد ذلك التلاعب به بسهولة. في البداية، تتم معالجة الغشاء بأجسام مضادة للمستضد المطلوب، وبعد غسل المادة غير المرتبطة، تتم إضافة اتحاد ذو علامة إشعاعية يرتبط على وجه التحديد بالأجسام المضادة (كما هو الحال في ELISA). يتم تحديد موقع المجمع المترافق الناتج عن المستضد والجسم المضاد عن طريق التصوير الشعاعي الذاتي باستخدام فيلم الأشعة السينية. بعد ظهوره يصبح واضحا ما إذا كانت هناك مستضدات في الدم أم لا.

يتم أخذ الدم من الوريد. ثم تستمر الدراسة وفق التعليمات:

• يتم وضع العينة في هلام للفصل الكهربي، مما ينتج عنه بروتينات محددة حساسة للفيروس؛
• يتم تطبيق ورق النيتروسليلوز على الجل المعالج.
• يتم وضع العينة المحضرة في جهاز النشاف.

لتحديد إنزيمات معينة، من الضروري إعداد الورق بشكل صحيح للاختبارات المعملية. للقيام بذلك، يتم تطبيق الأجسام المضادة والاقتران المشع المسمى عليه. يتم تقييم نتيجة الدراسة بصريًا، ويتم فحص سلاسل الإنزيمات المبنية.

فك تشفير النتائج

بعد التلاعب، تبقى الشرائط على الورق. وهي تقع في مكان حدوث الاقتران، أي أن الدواء المطبق يتفاعل مع بروتين الفيروس. بهذه الطريقة يمكنك اكتشاف أجزاء من البروتين:

• من قلب فيروس نقص المناعة البشرية-1 – ص17، ص24، ص55؛
• العامل الممرض فيروس نقص المناعة البشرية-2 – ص16، ص26، ص56.

تعتبر نتائج النشاف المناعي إيجابية إذا تم الكشف عن 2 من 3 بروتينات فيروس نقص المناعة البشرية-1 أو فيروس نقص المناعة البشرية-2. نظرًا لأن اللطخة الغربية (الاسم الثاني للدراسة) تُستخدم غالبًا لتأكيد اختبار ELISA إيجابي، يتم فحص التفاعل بحثًا عن بروتينات محددة: gp120/160، gp41 أو p24. وهي جزء من جينات الإيدز الثلاثة الرئيسية - gag، pol، وenv. أثناء التشخيص الأولي، يتم إجراء الاختبار فقط للبروتينات p25 وgp110/120 وgp160؛ وإذا أعطت نتيجة إيجابية، يتم إجراء الاختبار لـ p24. ويسمح هذا الجزء من البروتين باكتشاف الفيروس في مرحلة مبكرة.

النتيجة الإيجابية هي سبب للبحث عن تشخيصات أكثر تعقيدًا. ولا يصح إلا في ثلاث حالات:

• في المرضى الذين يعانون من مستويات عالية من البيليروبين.
• عند الاتصال بالمستضدات الفيروسية.
• لأمراض النسيج الضام.

إذا لم يكن لدى المريض خطوط تتوافق مع بروتينات الإيدز، فسيتم تقييم النتيجة على أنها سلبية. وهذا يعني أن الشخص غير مصاب بفيروس نقص المناعة البشرية أو أنه في فترة النافذة. وهذا الأخير يعني أن الفيروس كان من الممكن أن يدخل الجسم، لكنه لم يتطور فيه بعد. ولزيادة دقة التشخيص، يتم استخدام أنظمة الاختبار:

• المؤتلف-فيروس نقص المناعة البشرية؛
• مولد المضاد؛
• شاشة بيبتوسكرين.

وبعد فحصها تعتبر النتيجة سلبية إذا لم يتم العثور على البروتينات gp120، gp160، Sp4 في العينة.

هناك خيار تفسير آخر - نتيجة محايدة أو مشكوك فيها. ويحدث عند أولئك الذين لديهم اتصال جنسي مع شريك مصاب بفيروس نقص المناعة البشرية. تم العثور على الأجسام المضادة للبروتينات gp120 و gp160 في دمائهم. أيضًا، يتم تقديم إجابة مشكوك فيها أثناء النشاف عندما تكون العدوى بدون أعراض، أي أنها في حالة سبات.

من المهم التحقق بدقة من النتيجة المشكوك فيها. ولهذا الغرض، يتم استخدام دراسة ديناميكية لمصل الدم، أي إجراء فحوصات منتظمة باستخدام طرق التطعيم المناعي وELISA لمدة ستة أشهر. توصف أيضًا فحوصات إضافية، نظرًا لأن وجود الأجسام المضادة الذاتية والمجمعات المناعية في الدم قد يكون بسبب:

• أمراض معدية؛
• وجود أورام سرطانية.
• الحساسية.