طرق تحضير الاستعدادات الدقيقة في علم الأحياء. الموضوع: "تحضير ووصف الاستعدادات الدقيقة لخلايا الكائنات الحية المختلفة العمل المختبري تحضير الاستعدادات الدقيقة للخلايا

لإعداد شرائح مجهرية مؤقتة، يجب أن يكون لديك مجموعة من الشرائح ونظارات التغطية، وإبر التشريح، وشفرات الحلاقة، والمشارط، وقضبان الماء الزجاجية، والملاقط، وورق الترشيح، وبعض الكواشف.

يتم غسل الشريحة والغطاء الزجاجي بالماء وتجفيفهما بقطعة قماش ناعمة. يتم وضع جزء رفيع من جسم نباتي في قطرة ماء على شريحة زجاجية وتغطيته بغطاء. إذا كان السائل الموجود في المستحضر يبرز خارج حواف زجاج الغطاء، تتم إزالة الفائض باستخدام شرائح من ورق الترشيح. إذا لم يغطي الماء المنطقة بأكملها أسفل شريحة الغطاء، يتم وضع قطرة أخرى باستخدام ماصة بالقرب من حافة شريحة الغطاء، والتي يتم رسمها بنفسها تحت الزجاج.

إذا كان من الضروري إدخال أي كاشف تلوين، يتم امتصاص الماء من أسفل زجاج الغطاء باستخدام ورق الترشيح، ويتم وضع قطرة من الكاشف من الجانب الآخر على حافة زجاج الغطاء.

يمكن أن تكون كواشف الصباغة المواد التالية:

1) اليود المذاب في يوديد البوتاسيوم (لتلوين حبيبات النشا في الخلايا)؛

2) الكلور والزنك واليود (لتلوين أغشية خلايا السليلوز)؛

3) الفلوروجلوسينول وحمض الهيدروكلوريك (لتلوين الأصداف الخشبية)؛

4) الفوكسين (لتلوين السيتوبلازم)؛

5) الهيماتوكسيلين (لتلوين النوى)؛

6) الجلسرين (لتوضيح الدواء).

خلية– الوحدة الهيكلية والوظيفية الأساسية لجسم النبات. في النباتات وحيدة الخلية، تعمل الخلية ككائن حي كامل، وفي الكائنات متعددة الخلايا، يلاحظ تمايز الخلايا. ولذلك، فإن حجم وشكل وبنية الخلايا في هذه الكائنات متنوعة للغاية. تتكون الخلية النباتية الحية البالغة من بروتوبلاست، محاطة بغشاء الخلية وتحتوي على شوائب غير حية (مواد احتياطية ومنتجات نهائية لعملية التمثيل الغذائي).

جبلة مجردة- المحتويات الحية للخلية - تتكون من عضيات، أو عضيات، محاطة بالهيالوبلازم. العضياتيمكن تقسيمها إلى ثلاث مجموعات: غشاء مزدوج - النواة، البلاستيدات، الميتوكوندريا. غشاء واحد - الشبكة الإندوبلازمية (الشبكة الإندوبلازمية - ER)، جهاز جولجي (معقد)، فجوة، الجسيمات الحالة، البلازما. غير الغشاء - الريبوسومات، الأنابيب الدقيقة، الخيوط الدقيقة. الهيالوبلازماهي مرحلة غروانية مستمرة للخلية ذات لزوجة معينة. إنه يحيط بجميع العضيات ويضمن تفاعلها. يسمى الهيالوبلازم مع العضيات، باستثناء النواة والبلاستيدات السيتوبلازم.

جوهر- جزء أساسي من الخلية حقيقية النواة. هذا هو مكان تخزين واستنساخ المعلومات الوراثية. تعمل النواة أيضًا كمركز تحكم لعملية التمثيل الغذائي وجميع العمليات التي تحدث في الخلية تقريبًا. من الخارج، النواة مغطاة بغشاء مزدوج - غلاف نووي، تتخلله المسام، عند حوافها يمر الغشاء الخارجي إلى الغشاء الداخلي. المحتويات الداخلية للنواة هي الكاريوبلازم مع الكروماتين والنواة والريبوسومات المغمورة فيها.

الميتوكوندريا– موجود في جميع الخلايا حقيقية النواة الحية. يشكل غشاءها الداخلي امتدادات في تجويف الميتوكوندريا على شكل صفائح أو أنابيب تسمى أعراف. تمتلئ المسافة بين العرف بمصفوفة متجانسة. تحتوي المصفوفة على الريبوسومات والحمض النووي الخاص بها. وتتمثل المهمة الرئيسية للميتوكوندريا في توفير احتياجات الطاقة للخلية من خلال التنفس.

البلاستيدات- عضيات توجد فقط في الخلايا النباتية. يتم تمثيلها بواسطة البلاستيدات الخضراء (الخضراء)، والبلاستيدات الملونة (الأصفر والبرتقالي والأحمر البرتقالي) والبلاستيدات البيضاء (عديم اللون). تحتوي البلاستيدات الخضراء على غشاء ثنائي الغشاء. يبرز الغشاء الداخلي في تجويف البلاستيدات الخضراء ببضعة نتوءات. بين النواتج هناك سدى. تشكل النتوءات والسدى نظامًا معقدًا من الأسطح الغشائية في تجويف البلاستيدات الخضراء، مما يحدد الأكياس المسطحة الخاصة التي تسمى ثايلاكويداتأو صفائح. Tillakoids شكل مكدسات - بقوليات. تحتوي أغشية الثايلاكويد على الصبغة الرئيسية للنباتات الخضراء - الكلوروفيل والأصباغ المساعدة - الكاروتينات.

الشبكة الأندوبلازمية- نظام ثلاثي الأبعاد من الفجوات والأنابيب، على شكل أكياس أو صهاريج مسطحة. إن ER الخام هو موقع تخليق البروتين ومغطى بالعديد من الريبوسومات. خالية من الريبوسومات الملساء وتعمل كموقع لتكوين الدهون.

الفجوات- تجاويف في البروتوبلاست للخلايا حقيقية النواة. الفجوات هي مشتقات محاطة بغشاء من EPS. com.tonoplastومليئة بمحتويات مائية - عصارة الخلية. في الخلايا النباتية الصغيرة، الفجوات هي نظام من الأنابيب والحويصلات (الفجوات)؛ مع نمو الخلايا، فإنها تتوسع وتندمج في فجوة واحدة كبيرة. تشغل 70-90% من حجم الخلية، وتقع البروتوبلاست على شكل طبقة جدار رقيقة. في الأساس زيادة في حجم الخلية
يحدث بسبب نمو الفجوة. ونتيجة لذلك، ينشأ ضغط الامتلاء ويتم الحفاظ على مرونة الخلايا والأنسجة.

عصارة الخليةهو محلول مائي للأملاح المعدنية والمركبات العضوية المختلفة: الكربوهيدرات (أحادية وثنائية وعديد السكاريد) والبروتينات والأحماض العضوية وأملاحها (الأكثر شيوعًا هي أحماض الستريك والماليك والسكسينيك والأكساليك ومشتقاتها) والقلويات ( مركبات تحتوي على النيتروجين، وكثير منها سموم نباتية، وبعضها يستخدم من قبل البشر - الكافيين، الأتروبين، الكينين، المورفين، الكودايين)، العفص (مشتقات الفينول)، جليكوسيدات (مشتقات السكر). من بين المجموعة الأخيرة الأكثر إثارة للاهتمام هي مركبات الفلافونويد (هذه أصباغ ذات لونين رئيسيين: فلافونات - أصفر وأنثوسيانين - أحمر بنفسجي). في أغلب الأحيان، توجد مركبات الفلافونويد في الخلايا المحيطة بالزهور، والتي تعطيها مجموعة متنوعة من الألوان. ومن المثير للاهتمام أن الأنثوسيانين قادر على تغيير اللون اعتمادًا على تفاعل عصارة الخلية: عندما تكون حمضية قليلاً، تكون حمراء، وعندما تكون محايدة أو قاعدية، تكون زرقاء بنفسجية. يمكن ملاحظة تغير في لون الأنثوسيانين عندما تتفتح زهور النسيان أو نبتة الرئة أو السنفيتون الخشن. براعم هذه النباتات لها كورولا وردية اللون، والزهور المتفتحة لها كورولا زرقاء أو أرجوانية. بالإضافة إلى البتلات، يمكن احتواء الأنثوسيانين في أجزاء أخرى من النبات - الأوراق والسيقان والجذور، مما يمنحها لونًا مميزًا.

جهاز جولجييتكون من dictyosomes الفردية وحويصلات جولجي. الديكتيوزومات عبارة عن أكوام من الصهاريج المسطحة على شكل قرص، لا تتلامس مع بعضها البعض، ويحدها الأغشية. يتم فصل حويصلات جولجي من حواف الصفائح الجسيمية أو أطراف الأنابيب وتوجيهها نحو البلازما أو الفجوة. تقوم حويصلات جولجي بنقل السكريات الناتجة.

تعتمد الدراسات العملية في علم الأحياء على البحث باستخدام البصريات الرصدية للكائنات الحية وعلاقاتها بالبيئة. ولتحقيق هذه الأهداف، لا بد من الاستعداد لها مجهر. إنها جزء لا يتجزأ من عملية دراسة العالم المصغر، فهي تظهر بوضوح بنية الكائنات الحية الدقيقة على المستوى الخلوي. المستحضر الدقيق عبارة عن نسيج من أصل حيواني تم إعداده للعرض باستخدام جهاز مكبر، بالإضافة إلى كائن حي أو مستعمرة منه، غير مرئي للعين المجردة، ويتم وضعه في ركيزة مغذية.

ل تحضير للمجهرستحتاج في المنزل إلى نظارات خاصة بمقاسات موحدة، تستخدم في الأنشطة الطبية والعلمية:

طرق لصق القطع الزجاجية:

أنحف الأقسام

لتحضير المستحضر من الأنسجة البيولوجية، يتم استخدام جهاز يسمى الميكروتوم. في الفحص المجهري للهواة، يتم تنفيذه ببساطة: يتم وضع الشفرة في قالب بلاستيكي دائري يشبه العجلة. يتم إدخال قطعة من الأنسجة البيولوجية في الفتحة الموجودة داخل العجلة. من خلال تدوير المقبض البارز، يتم الحصول على مقطع عرضي أو طولي لا يزيد عن 40-50 ميكرومتر، لفحصه لاحقًا بتكبير 40-640 مرة.

المس

مناسبة لتباين الصور وتفصيلها بوضوح أثناء الفحص المجهري. يمكنك تحضير محلول لوغول الكلاسيكي: يذوب ملح البوتاسيوم، الذي يتكون من بلورات عديمة اللون، مع اليود في الماء بنسبة: 5:10:85. يمكنك أيضًا استخدام مسحوق الأيوسين الأخضر اللامع والمنغنيز والأزرق الميثيل والأحمر والبني كأصباغ. يتم التلوين عن طريق الترطيب بمادة ملونة مركزة أو تطبيقها بقطعة قطن.

تخزين طويل المدى

سيكون المستحضر متينًا إذا تم استخدام سائل التثبيت أثناء التحضير. تأثيره هو أن صلاحية عضيات العينة المجهرية التي تتم دراستها تتوقف تمامًا. مدة الحفظ من 10-15 دقيقة إلى ساعة. أثبت الكحول الإيثيلي والفورمدرون المحتوي على الفورمالديهايد فعاليتهما. عند العمل مع المثبتات، لا تسمح لها بالتلامس مع الجلد المكشوف.

يمكن العثور على مجموعات جاهزة من الشرائح الدقيقة في كتالوج المتجر عبر الإنترنت. وفي قسم المقالات والمراجعات على موقعنا، ستجد معلومات إضافية حول تحضير الاستعدادات للمجهر في المنزل: قطرة معلقة أو مسحوقة، ومسحة ثابتة، وبصمة وأكثر من ذلك بكثير.

وزارة التعليم والعلوم في الاتحاد الروسي

المؤسسة التعليمية الحكومية للتعليم المهني العالي

"معهد شادرينسك التربوي الحكومي"

قسم العلوم الطبيعية وطرق التدريس

طرق تحضير العينات الدقيقة في علم الأحياء

عمل الدورة

التخصص 050102 "علم الأحياء"

المنفذ:

جورشكوفا إيكاترينا أندريفنا

طالب في السنة الثالثة بدوام كامل

المستشار العلمي:

مرشح العلوم البيولوجية، أستاذ مشارك

شاريبوفا ناديجدا فلاديميروفنا

_________________________________

درجة __________________________

شادرينسك

2014

مقدمة ……………………………………………………………………….3

§ 1. خصائص المستحضرات الدقيقة واستخدامها………………….4

§ 2. المعدات اللازمة لتحضير الشرائح الدقيقة…….7

§ 3. تحضير المادة اللازمة لتحضير الشرائح الدقيقة ............... 12

§ 4. طرق تحضير الشرائح الدقيقة………………………….17

الاستنتاج ……………………………………………………………… 31

قائمة المراجع …………………………………………….32

ملحق ……………………………………………………………………………………………………………………….34

مقدمة

أهمية موضوع البحث. تعد الاستعدادات الدقيقة أداة تعليمية مرئية، وبالتالي فهي تستخدم على نطاق واسع في دروس علم الأحياء أثناء التمارين المعملية، عند دراسة المواد الجديدة والتعميمات والمقارنات والاستجواب.

نظرًا لعدم كفاية فصول علم الأحياء التي تحتوي على شرائح مجهرية جاهزة، والتي تعتبر ضرورية لدراسة أفضل للموضوع، يمكن صنعها بشكل مستقل.

وانطلاقا من أهميته اخترنا موضوع البحث التالي: “طرق تحضير التحضيرات الدقيقة في علم الأحياء”.

موضوع الدراسةهي الاستعدادات الدقيقة.

غرض طرق تحضير الشرائح الدقيقة.

الغرض من الدراسة: دراسة أنواع التحضيرات الدقيقة في علم الأحياء وطرق تحضيرها.

أهداف البحث:

1. دراسة وتحليل الأدبيات حول هذا الموضوع.
2. إعطاء خصائص التحضيرات الدقيقة ونصائح حول استخدامها في دروس علم الأحياء.
3. وصف المعدات اللازمة لإعداد الشرائح الدقيقة.
4. تعلم كيفية تحضير المواد اللازمة لإعداد الشرائح الدقيقة.
5. دراسة طرق تحضير الشرائح الدقيقة.

ولتحقيق الأهداف والغايات تم استخدام ما يليطرق البحث:تحليل الأدبيات العلمية والمنهجية حول موضوع البحث والعمل البحثي التجريبي وتعميم نتائجه.

هيكل الدورات الدراسية. يتكون عمل الدورة من مقدمة و 4 فقرات وخاتمة، ويتم تقديم قائمة مراجع تتضمن 16 مصدرًا وملحقًا واحدًا.

§ 1. خصائص التحضيرات الدقيقة واستخدامها

وتشمل المواد الطبيعية المحضرة الأعشاب والمستحضرات الرطبة والمستحضرات الدقيقة.

المستحضر الدقيق عبارة عن جزء رفيع من عضو كائن حي أو جسيم دقيق، محاطًا بلسم شفاف (زيت مغمور) أو مجفف، يوضع بين كأسين (شريحة وغطاء).

يبدأ أصل الشرائح الدقيقة باستخدام العاج أو العظام العادية كدعم للعينات، التي تم وضعها بين أقراص الميكا الشفافة. كان هناك تصميم مماثل شائعًا في إنجلترا الفيكتورية حتى قدمت الجمعية المجهرية الملكية شريحة مجهرية موحدة.

تتيح العينات الدقيقة إظهار البنية الخلوية الداخلية للكائنات الحية، مما يساعد الطلاب على تطوير المعرفة حول البنية الخلوية الموحدة للكائنات الحية. يمكن تقسيم الاستعدادات الدقيقة إلى مجموعتين:

• دائمة، مصنعة خصيصًا للتدريب؛
• مؤقتة، يعدها المعلم للدرس أو أثناء الدرس من قبل الطلاب أنفسهم لاستخدامها لمرة واحدة.

الاستعدادات الدقيقة الدائمة هي أنحف أقسام أنسجة الكائنات الحية وأعضائها. معظم الخلايا غير ملونة، وبالتالي، حتى مع التكبير العالي للمجهر، قد يكون من الصعب رؤية الهياكل داخل الخلايا، بما في ذلك النواة. وفي هذا الصدد، يتم صبغ الاستعدادات الدقيقة الخلوية بأصباغ خاصة لجعلها أكثر وضوحًا. يجب على المعلمين بالتأكيد تحذير الأطفال من أن اللون ليس طبيعيًا بالنسبة للبنى المجهرية. يتم استخدامها عند دراسة المواد الجديدة والتعميمات والمقارنات والتساؤلات.

سميت الأدوية المؤقتة بهذا الاسم لأنها لا تدوم طويلا. بعد التعرف على الكائنات الدقيقة، يتم غسل المستحضر المؤقت من الشريحة. يعد إعداد الشريحة الدقيقة أحد أنواع المهارات الإلزامية التي يتم تطويرها في دورة علم الأحياء بدءًا من الصف السادس.

لدراسة الخلايا الحية للكائنات الحية الدقيقة، يتم استخدام المستحضرات "القطرة المسحوقة"، "القطرة المعلقة"، "البصمة"، "فيلم أجار" ("الزراعة الدقيقة"). يتم فحص تحضيرات الخلايا الحية باستخدام "الأنظمة الجافة" للمجهر. يتم حفظ الاستعدادات التي تم الانتهاء من العمل بها بالفعل في محلول مطهر قبل غسلها.

تتيح الاستعدادات الدقيقة إجراء مجموعة واسعة من التجارب المنصوص عليها في المنهج الدراسي لدورة علم الأحياء المدرسية. وهي مصممة لدراسة مفصلة للهياكل المجهرية تحت المجهر.

قبل العمل باستخدام شريحة صغيرة، يجب على المعلم أن يشرح للطلاب بوضوح ما يجب عليهم رؤيته، باستخدام الجداول والرسومات والرسوم البيانية وما إلى ذلك.

أثناء الاستطلاع، غالبًا ما يستخدم المعلمون شرائح صغيرة "صامتة" (بدون تسميات). يتم تكليف الطلاب بمهمة تحديد العينات المجهرية والتحدث عن بنية نسيج معين. يُنصح بتخزين شرائح دقيقة متطابقة في حزمة واحدة حتى يمكن توزيعها بسرعة على الطلاب.

يتم تخزين الشرائح الدقيقة بعيدًا عن أجهزة التسخين بحيث تكون الشريحة الزجاجية في وضع أفقي لمنع الشريحة الدقيقة من "الانزلاق".

متطلبات التحضيرات الدقيقة:

1. يجب أن يكون الزجاج عديم اللون وشفافًا. يجب أن يكون زجاج الغطاء أرق من الشريحة الزجاجية التي تعمل كأساس للمنتج.
2. يجب أن يكون الإعداد الدقيق متمركزًا، أي. تقع في منتصف الغطاء الزجاجي. يجب تحديد موقع جسم صغير جدًا بإطار.
3. يجب أن تكون المقاطع المجهرية رفيعة جدًا وأن تحتوي على جميع العناصر اللازمة للدراسة.
4. يجب أن تكون ملطخة الأنسجة الفردية من الشريحة المجهرية بصبغة مشرقة ودائمة.
5. يجب إصدار العينات الدقيقة على شكل مجموعة لكل قسم من مقرر علم الأحياء. يجب أن يكون عدد الأدوية التي تحمل الاسم نفسه في المجموعة كافياً للعمل المختبري لجميع الطلاب في الفصل (15-20 قطعة).
6. يجب أن تكون مجموعة الاستعدادات الدقيقة مصحوبة بتوصيات منهجية، والتي يجب أن تحتوي على رسومات للكائنات الدقيقة التي تتم دراستها ومهام العمل المستقل للطلاب.

إن دراسة الاستعدادات الدقيقة أثناء عملية التعلم تعرّف الطلاب على أساليب العلوم وتجعل من الممكن، من خلال الملاحظة المباشرة، رؤية بنية الكائنات الحية وأجزائها.

الاستعدادات الدقيقة هي كائنات حية صغيرة مجهريا، وهي أنحف أقسام أعضائها وأجزائها. يتم وضع هذه الأشياء بين غطاء زجاجي وزجاج منزلق في محلول خاص. للحصول على رؤية أفضل، يتم تلوين المستحضرات، وبالتالي فإن تلوين الكائنات يكون مصطنعًا.

1. قبل البدء في العمل باستخدام شريحة ميكروسيليد، عليك كتابة اسمها وموضوع الدرس المختبري.

2. تبدأ دراسة أي تحضير دقيق بالفحص تحت المجهر بتكبير منخفض (56x). ثم يختارون مكانًا تكون فيه التفاصيل مرئية بشكل أفضل، ويضبطون التكبير العالي (120-300x) ويبدأون في الرسم. عند رسم شريحة ميكروية، من الضروري مراعاة نسبة أحجام الأجزاء الفردية من الأصل. يساعد الرسم على التذكر بشكل أفضل وإنشاء تمثيل مرئي للكائن.

3. أولا، يتم الإشارة إلى العناصر الرئيسية في الشكل، ثم يتم استكمالها بالتفاصيل. يتم كتابة اسم الشريحة الدقيقة والتكبير الذي تم به الرسم أسفل الرسم. قم بعمل 2-3 رسومات على صفحة واحدة من دفتر الطالب. تتم الإشارة إلى الهياكل الرئيسية للعينات المجهرية بواسطة المؤشرات ويتم كتابة رقم مقابل كل منها، يليه فك تشفيرها. لم تتم الإشارة إلى محيط مجال رؤية المجهر.

وبالتالي، هناك نوعان من الشرائح المجهرية: مؤقتة ودائمة. يكمن الاختلاف بينهما في وقت التخزين وطرق الطهي. يجب أن تستوفي العينات الدقيقة متطلبات معينة يجب مراعاتها بعناية. لإعداد الشرائح الدقيقة، تحتاج إلى معدات خاصة، والتي سيتم وصفها في الفقرة التالية.

§ 2. المعدات اللازمة لتحضير الشرائح الدقيقة

سطح المكتب.

في حالة عدم وجود طاولة خاصة، يمكن تكييف أي طاولة (يفضل أن تكون ذات أدراج) بمساحة سطح عمل لا تقل عن 60*120 سم بنجاح.

إذا لم يكن غطاء الطاولة يحتوي على طلاء خاص، فينبغي أن يكون مصنوعًا من مادة مقاومة للرطوبة. ولكن في كل الأحوال يجب تغطية مساحة الطاولة المخصصة للعمل المباشر على تحضير المستحضرات بالزجاج ووضع تحتها أوراق صغيرة (9*12 سم) من الورق الأبيض أو الأسود. يؤدي هذا إلى إنشاء خلفية مناسبة تسهل العمل مع الكائنات المطلية (الورقة البيضاء) والكائنات غير المطلية (الورقة السوداء). يوصى أيضًا بتطبيق الخطوط العريضة لشريحة زجاجية على كلا الورقتين، مع الإشارة إلى موقع وحجم الغطاء الزجاجي.

من أجل ترتيب المعدات اللازمة بشكل أكثر ملاءمة، يجب أن يكون لديك رف من مستويين للكواشف والمحاليل والأدوات، والذي يتم تثبيته إما أمام الشخص الذي يعمل (على طول الحافة الخلفية للطاولة) أو على الجانب، اعتمادًا على على موقع الطاولة بالنسبة لمصدر الضوء.

الأواني الزجاجية.

مرطبانات واسعة الفم مع سدادات أرضيةتستخدم بسعات مختلفة من 50 إلى 200 مل لتجميع البطاريات النسيجية المخصصة لتحضير قطع الأنسجة لملء الوسائط المختلفة. تُستخدم الجرار الأكبر حجمًا لتثبيت وتخزين قطع الأنسجة في تثبيت السوائل ومعالجة الشرائح الزجاجية وتحضير الفورمالديهايد المحايد وما إلى ذلك.

بدلًا من البرطمانات ذات السدادات الأرضية، يمكنك استخدام مرطبانات منزلية صغيرة ذات أغطية لولبية من الصفيح بأحجام مختلفة.

دلاء أكواب زجاجية مستديرة صغيرة بأقطار وارتفاعات مختلفة بأغطية مصقولة.

الكؤوس البيولوجيةتستخدم مستديرة أو بيضاوية أو رباعية الزوايا (وكذلك الزجاجات الطويلة) لإجراء المقاطع النسيجية المثبتة على شرائح زجاجية. ولإضفاء الاستقرار وضمان الترتيب، يتم وضعها في رفوف خاصة مصنوعة من الخشب أو البلاستيك، عدة قطع متتالية، حسب طريقة المعالجة.

أطباق بتري تعتبر الأطباق الزجاجية المسطحة الواسعة ذات الأغطية مناسبة للعديد من المعالجات (تلطيخ المقاطع والأقسام العائمة الحرة الملصقة على الشرائح الزجاجية، واستخدامها كحامل لوزن الزجاجات، وما إلى ذلك).

أدوات القياس اسطوانات ودوارق بسعات مختلفة (من 10 إلى 250 – 500 مل) وأقماع بأحجام مختلفة.

الأكواب الكيميائيةتستخدم الأكواب الزجاجية المستديرة بدون أغطية بسعة 50-100 مل على نطاق واسع عند إجراء التفاعلات الكيميائية النسيجية، وأجزاء التلوين الملصقة على الزجاج، وما إلى ذلك.

قوارير (مسطحة) بسعة من 50 مل إلى 2 لتر. تستخدم القوارير الصغيرة لتحضير وتخزين محاليل الأصباغ المختلفة، وتستخدم القوارير الكبيرة للمياه المقطرة والسوائل الأخرى المستهلكة بكميات كبيرة.

الماصات وتستخدم التقليدية (المخصصة لتقطير الأدوية) لإسقاط الأصباغ والسوائل المختلفة على المقاطع، وتستخدم المتدرجة (بسعة 0.1-100 مل) لقياس كميات صغيرة من السوائل المختلفة. ويمكن استخدام الماصات الأوتوماتيكية ذات السعات المختلفة والمستخدمة على نطاق واسع حاليًا.

الشرائحصفائح مستطيلة قياس 76*25 ملم، سماكة 1.2-1.4 ملم، مخصصة لوضع المقاطع أثناء تحضير الشرائح الدقيقة. لا تسمح النظارات السميكة بالحصول على صورة حادة لحواف غشاء الإضاءة في مستوى العينة، حيث ينتهي الأمر بسمك الزجاج، وهذا يعطل تركيز المكثف ويقلل بشكل حاد من وضوح الصورة.

زلات الغطاءعبارة عن لوحات رفيعة (سمكها 0.15-0.17 مم، والنظارات السميكة تزيد من جودة الصورة) بأحجام مختلفة. يعمل على تغطية المقاطع المعالجة الموضوعة على شرائح زجاجية. يتم تحديد أحجام نظارات الغطاء حسب مساحة الجسم.

أدوات.

تشمل الأدوات المستخدمة في مختبر الأنسجة الملقط، والمباضع، وملقط مرقئ، وملقط، وحلقات بكتريولوجية، وملاعق، وإبر تشريح - مستقيمة ومنحنية، ومعدنية وزجاجية. الإبر الزجاجية ضرورية لتشريب الفضة، عندما لا يمكن استخدام الإبر المعدنية.

من الضروري أيضًا أن يكون لديك مصباح كحول، وفرشاة شعر لإزالة المقاطع من سكين مشراح، وورق ترشيح، وإبر، وخيوط، وورق سميك لوضع العلامات على المواد، وجص لاصق، وقلم رصاص زجاجي.

إعداد الشرائح.

يجب إعداد الشرائح المستخدمة للحصول على الاستعدادات النسيجية مسبقًا. الاستثناء هو الشرائح المستوردة الجاهزة للاستخدام والمعبأة خصيصًا.

يتم غسل الشرائح بالماء الدافئ والصابون أو غليها لمدة 15 دقيقة في محلول بيكربونات الصوديوم بنسبة 2-3%، ثم يتم شطفها بالماء الساخن وغسلها لعدة ساعات في الماء الجاري. تُمسح الأكواب المغسولة بقطعة قماش قطنية نظيفة وتوضع في كحول 96٪ لعدة أيام. تتم إزالة الكؤوس منزوعة الدهن من هذا الخليط باستخدام ملقط، ومسحها بقطعة قماش نظيفة ووضعها في صندوق.

يمكن أيضًا إزالة الشحوم من الشرائح جيدًا في محلول قوي من حمض الهيدروكلوريك. وبعد بضعة أيام، يتم غسلها بالماء الجاري وتجفيفها.

يمكن التحقق من جودة إزالة الشحوم عن طريق إسقاط الماء من الماصة على شريحة زجاجية: ينتشر الماء في طبقة رقيقة على الزجاج المزيل الشحوم ولا يتجمع في قطرة.

لإصلاح الأجزاء الموجودة على الزجاج بشكل أفضل، يتم تشحيمها مسبقًا بمزيج من البروتين والجلسرين. يتم ضرب بياض البيض الطازج وتصفيته من خلال مرشح خشن المسام مبلل بالماء المقطر، ثم يخلط مع كمية متساوية من الجلسرين ويضاف القليل من بلورات الثيمول. يمكن تخزين الخليط لعدة أشهر. كما يتم استخدام خليط يتضمن 15 مل من مصل الدم و 5 مل من الماء المقطر و 6 مل من الفورمالديهايد 5٪. بعد الترشيح، الخليط جاهز ليتم تطبيقه على الشرائح الزجاجية. ويعطي استخدامه نتائج أفضل من استخدام بياض البيض، حيث لا تتكون خلفية أثناء التلوين.

لتطبيق البروتين على شرائح زجاجية منزوعة الشحوم، خذ 5-6 أكواب على شكل مروحة بيد واحدة، وفي اليد الأخرى قضيب زجاجي نظيف، يستخدم لوضع البروتين عن طريق لمس كل كوب. ثم يُفرك البروتين بالكحول قليل الدسم بإصبعك فوق سطح الزجاج حتى منتصفه، مع تطبيق القليل من القوة. يوصي بعض المؤلفين بتسخين النظارات الممسوحة بالبروتين في منظم الحرارة، لكن التجربة تظهر أن هذا غير ضروري، لأنه بعد نقل المقاطع إلى الكؤوس، يتم وضعها في منظم الحرارة أو على طاولة خاصة للتجفيف، حيث يحدث تخثر البروتين في نفس الوقت .

تم تطوير طريقة لتثبيت مقطع على شريحة زجاجية دون فرك الأخيرة أولاً بالبروتين والجلسرين.

قم بإسقاط بضع قطرات من غراء الكازين السائل في حمام من الماء المقطر الدافئ واخلطه. يتم غمس المقاطع في السائل العكر الناتج، وتقويمها بإبرة تشريح وتثبيتها على زجاج نظيف خالٍ من الشحوم.

تعطي هذه الطريقة دائمًا تأثيرًا جيدًا ولا توجد خلفية ملونة حول القطع، كما هو الحال غالبًا عند استخدام البروتين.

وبالتالي، هناك حاجة إلى معدات وأدوات خاصة لإعداد الشرائح الدقيقة. أهمها الشريحة والغطاء الزجاجي. قبل البدء في إعداد شريحة ميكروسيليد، من الضروري إعداد الشرائح بشكل صحيح. هناك أيضًا متطلبات خاصة لتخزينها. لكن إعداد المعدات وحده لا يكفي لإعداد الشرائح الدقيقة، بل من الضروري أيضًا إعداد المواد اللازمة للبحث. ويتم مناقشة هذا بالتفصيل في الفقرة التالية.

§ 3. تحضير المواد اللازمة لتحضير الشرائح الدقيقة

تنقسم الاستعدادات الدقيقة إلى مؤقتة ودائمة. يشمل إعداد المواد للاستعدادات المؤقتة التثبيت والتلطيخ.

التثبيت هو عملية الحفاظ السريع على الهياكل الخلوية، حيث تتوقف جميع العمليات الفسيولوجية والكيميائية الحيوية، وتنتقل المواد القابلة للذوبان في الماء إلى حالة غير قابلة للذوبان. وبالتالي، فإن التثبيت يجعل من الممكن الحفاظ على الهياكل داخل الخلايا دون تغيير لفترة طويلة. ومع ذلك، أثناء التثبيت، قد تظهر المصنوعات في الخلايا - وهي هياكل جديدة غير موجودة في الخلية الحية، على سبيل المثال، الفجوات المختلفة. لمنع ظهور القطع الأثرية، من الضروري استخدام المحاليل الكيميائية والمثبتات المختارة خصيصا، ويجب أن يتم التثبيت نفسه في ظل ظروف معينة. على وجه الخصوص، من المستحسن استخدام المثبتات المبردة (ما يصل إلى 2-3 درجات)؛ للتثبيت، تحتاج إلى تناول خلايا فردية أو قطع من الأنسجة لا يزيد سمكها عن 5 مم؛ يجب أن يتجاوز حجم المثبت حجم المادة المثبتة بنسبة 50-100 مرة؛ لا ينبغي استخدام التجنيب لتخزين المواد على المدى الطويل؛ يجب عدم إعادة استخدام التجنيب.

دعونا نفكر في تكوين وتطبيق المثبتات الأكثر استخدامًا.

الفورمالين (الفورمالدهيد، أو ألدهيد الفورميك). أبسط وأكثر استخداما التجنيب. يستخدم على شكل محاليل مائية بتركيز 4-10%، بينما يؤخذ تركيز الفورمالين التجاري 100%. يحتوي الفورمالين التجاري على خليط من حمض الفورميك، والذي يتم تحييده بكربونات الكالسيوم خلال 24 ساعة. مدة التثبيت من ساعة إلى 24 ساعة. للتخزين طويل الأمد، يتم نقل المادة إلى الفورمالديهايد الطازج بنسبة 10٪. يتم استخدام الفورمالين النقي في حالة التخطيط لمزيد من الدراسة لتوطين ونشاط الإنزيمات. في كثير من الأحيان، يتم تضمين الفورمالين في صياغة مثبتات أكثر تعقيدا.

مثبتات الكحول. يحتوي على كحول إيثيلي أو ميثيل. نادرًا ما تستخدم المحاليل المائية للكحوليات في شكل نقي (70٪ أو 96٪ أو 100٪). في كثير من الأحيان، يتم استخدام الكحول بنسبة 100٪، والتي يتم خلطها مع مواد أخرى. ويجب أن يؤخذ في الاعتبار أن كحول الميثيل (الميثانول) وأبخرته سامة.

يتم استخدام تركيبات مختلفة تعتمد على الفورمالديهايد والكحول والأحماض العضوية والمواد غير العضوية كمثبتات عالمية.

كحول الخل (كحول الأسيتال). هذه واحدة من أبسط المشابك. يتكون من 3 أجزاء من الكحول المطلق (الإيثيل، أو أفضل من كحول الميثيل) وجزء واحد من حمض الأسيتيك الجليدي. لتحضير كحول 100% (مطلق)، يتم تجفيف الكحوليات الأولية. تستخدم كبريتات النحاس اللامائية لتجفيف الكحول الإيثيلي (الإيثانول)، ويستخدم أكسيد الكالسيوم لتجفيف كحول الميثيل (الميثانول). قم بتخزينها في حاوية محكمة الإغلاق. يجب أن يؤخذ في الاعتبار أن جميع الكحوليات المطلقة سامة بشكل خاص. لتحضير حمض الأسيتيك الجليدي، يتم تبريد الحمض المركز الأصلي في الثلاجة؛ وفي هذه الحالة يتجمد الحمض أبكر من الماء. يتم تصريف السائل، ويتم إذابة الحمض المتجمد واستخدامه لتحضير المثبت. المثبت جاهز للاستخدام بعد 24 ساعة. قم بتخزين المثبت في مكان مظلم وبارد. مدة التثبيت 2...24 ساعة. يتم بعد ذلك نقل المادة إلى مثبت جديد، حيث يمكن تخزينها لمدة تصل إلى شهر واحد في الثلاجة. للتخزين لفترة أطول، يتم نقل المادة إلى 70٪ كحول.

مثبت كارنوي. تكوين الكحول المطلق 10 سم 3 ; كلوروفورم 3 سم 3 ; حمض الخليك 1 سم 3 . فترة التثبيت هي 1-3 ساعات.

المثبتات التي تحتوي على حمض البكريك، على سبيل المثال خليط بوان 15 مل من محلول مائي مشبع من حمض البكريك: 5 أجزاء من الفورمالديهايد: جزء واحد من حمض الأسيتيك الجليدي. يتم تحضير هذا المثبت مباشرة قبل الاستخدام. مدة التثبيت من 1 إلى 24 ساعة (أحيانًا عدة أيام). يتم تخزين المادة الثابتة في 70٪ كحول.

المثبتات التي تحتوي على كلوريد الزئبق (II) HgCl 2 ). يتم استخدام التسامي في شكل محلول مائي مشبع في خليط مع حمض الأسيتيك الجليدي (25:1)، والفورمالديهايد (8.5:1) وتركيبات أكثر تعقيدًا (مثبت سوزا، ومثبت زينكر، وما إلى ذلك). مدة التثبيت من 1 إلى 24 ساعة. ثم تتم إزالة كلوريد الزئبق بمحلول كحول اليود (6 أجزاء من 70٪ كحول: جزء واحد من صبغة اليود)، ويتم إزالة اليود بمحلول 70٪ كحول. يتم تخزين المادة الثابتة في 70٪ كحول.

المثبتات التي تحتوي على الأوزميوم (رباعي أكسيد الأوزميوم، أو حمض الأوزميك). أنها تعطي أفضل النتائج وتستخدم في إعداد الاستعدادات لكل من المجهر الضوئي والإلكتروني. يمكنك استخدام محلول 1-2٪ من حمض الأوزميك، ولكن في كثير من الأحيان يتم استخدام التركيبات، على سبيل المثال، مثبت فليمينغ 15 جزءًا من حمض الأوزميك 2٪: جزء واحد من حمض الأسيتيك الجليدي. يستمر التثبيت ببطء (من 24 ساعة إلى عدة أيام).

بالإضافة إلى المزالج المخصصة للأغراض العامة، هناك أيضًا مزالج خاصة. على سبيل المثال، يحتوي مثبت الميتوكوندريا على 4 أجزاء من محلول 3% من ثاني كرومات البوتاسيوم وجزء واحد من 40% فورمالدهايد. يحتوي مثبت البلاستيدات الخضراء على 15 جزءًا من محلول مشبع من كبريتات النحاس وجزء واحد من 40٪ فورمالين و5 أجزاء من الماء.

في بعض الحالات، بدلاً من التثبيت الكيميائي، يتم استخدام التجميد السريع للعينات، على سبيل المثال، عند درجة حرارة النيتروجين السائل (196 0 ) أو عند درجة حرارة الجليد الجاف (78 0 ). يمكن تجفيف الأجسام المجمدة عن طريق تسامي الماء في الفراغ عند درجات حرارة أقل من 40 0 (وتسمى هذه العملية بالتجفيد).

يتيح التلوين إمكانية تحديد الهياكل داخل الخلايا التي لها صلة متزايدة بأصباغ معينة. الأصباغ عبارة عن مواد عضوية ذات وزن جزيئي منخفض نسبيًا ولها قابلية متزايدة لمكونات كيميائية معينة في الخلية.

هناك العديد من الأصباغ التي تستخدم لأغراض مختلفة. يجب أن يؤخذ في الاعتبار أن اختيار الصبغة يرتبط بطبيعة التثبيت والطرق المختلفة للمعالجة المسبقة للخلايا.

قد تتوافق أسماء الأصباغ مع اللون الناتج (ياقوتي، قرمزي، أزرق الميثيل، أزرق الميثيلين، البنفسجي الجنطياني، أخضر الميثيل، الذهب البرتقالي). في بعض الأحيان يتم استبدال أسماء الزهور الروسية بأسماء ألمانية، على سبيل المثال: ميثيلبلاو، البنفسج الجنطيانا. وفي حالات أخرى تكون الأسماء مجردة، تاريخية بطبيعتها، على سبيل المثال: بايرونين، فوشسين، سفرانين، فلوروغلوسينول، السودان الثالث. في بعض الأحيان لا يتوافق اسم الصبغة مع اللون الناتج، على سبيل المثال، يعطي الثيونين الأزرق اللون البنفسجي الأحمر. نادرا ما تستخدم أسماء التسميات الكيميائية للأصباغ، على سبيل المثال: ثنائي ميثيل أمينوبنزالدهيد، 8-أمينو-1-نفثول-5-حمض السلفونيك.

هناك أصباغ أساسية (قلوية) وحمضية ومحايدة. الأصباغ الأساسية تصبغ بشكل انتقائي الهياكل الخلوية القاعدية (أي الهياكل ذات الخصائص الحمضية). الأصباغ الحمضية تصبغ بشكل انتقائي الهياكل الخلوية المحبة للحموضة أو الأكسجين (أي الهياكل ذات الخصائص القلوية). تصبغ الأصباغ المحايدة الهياكل القاعدية والحموضة.

يتم استخدام الأصباغ الأقل سمية لتلوين الخلايا أثناء الحياة. تستخدم هذه الأصباغ عادة على شكل محاليل مائية، على سبيل المثال: أزرق الميثيلين (تركيز من 1:1000 إلى 1:10000)، أزرق التريبان (محلول 0.5٪)، أحمر محايد (من 1:50000 إلى 1:200000).

يمكن استخدام أصباغ الخلايا الثابتة بشكل نقي (محاليل مائية أو كحولية، تركيز من 0.1% إلى 1%)، على سبيل المثال: الأيوسين، الفوكسين. غالبا ما تستخدم مخاليط الأصباغ، على سبيل المثال، خليط رومانوفسكي-جيمسا (يحتوي على الميثيلين الأزرق، الميثيلين البنفسجي، الميثيلين الأزرق ويوزين)، صبغة مالوري (الاستخدام المتسلسل لحمض الفوشين S، ثم خليط من الأنيلين الأزرق والذهب البرتقالي G) ، أزور-يوزين، ميثيل بلويوسين.

ومع ذلك، في كثير من الأحيان يتم تشكيل الصبغة أثناء تحضيرها. على سبيل المثال، مادة الهيماتوكسيلين النباتية المعروفة تصبح صبغة فقط بعد أكسدتها إلى الهيماتين. تُستخدم الأصباغ الممزوجة بالأحماض العضوية على نطاق واسع لصبغ النوى والكروموسومات. دعونا نلقي نظرة على طرق تحضير بعض من أبسط الأصباغ.

تحضير 2% أسيتوفوسين. يذوب 1 جرام من الفوكسين الأساسي في 50 مل من حمض الأسيتيك 40٪ عند تسخينه في حمام مائي.

تحضير 1% أسيتورسين. أضف 50 مل من حمض الأسيتيك الجليدي إلى 1 جرام من الأورسين واتركه لمدة 12 ساعة تقريبًا. ثم يسخن الخليط حتى الغليان ويضاف 50 مل من الماء المقطر. ثم قم بتسخينه حتى الغليان ثم تبريده، وكرر هذا الإجراء 10 مرات. بعد 24 ساعة، يتم تصفية الصبغة. قبل الصباغة، أضف جزءًا واحدًا من 1 N إلى 9 أجزاء من الصبغة. حمض الهيدروكلوريك.

تحضير أسيتوكارمين 4%. يتم تحضير المحلول في دورق مقاوم للحرارة مزود بمبرد ماء. يتم خلط 4 جرام من الأسيتوكارمين مع 100 مل من حمض الأسيتيك بنسبة 50٪ ويتم غليها لمدة ساعة واحدة. بعد 24 ساعة، يتم تصفية الصبغة. يتم تحضير الأسيتولاكموايد بطريقة مماثلة.

بدلا من حمض الخليك، غالبا ما تستخدم الأحماض العضوية الأخرى، على سبيل المثال، 40٪ حمض اللبنيك.

بعد التحضير، يتم تصفية جميع الأصباغ وتخزينها في مكان بارد ومظلم. يعتمد وقت تلطيخ المستحضرات على درجة الحرارة (عادة من 20 دقيقة إلى يوم واحد). عند التسخين أو الغليان، يتم تقليل وقت التلوين.

بالإضافة إلى تلطيخ الأصباغ العضوية، يمكن تمييز الهياكل الفردية باستخدام تشريبها بالفضة والمعادن الأخرى.

وبالتالي، عند تحضير بعض الشرائح الدقيقة المؤقتة، من الضروري تثبيت وتلطيخ المادة قيد الدراسة. بفضل هذا، يمكنك رؤية الجسم بشكل أفضل تحت المجهر. سنتحدث بشكل خاص عن طرق تحضير الشرائح الدقيقة في الفقرة الرابعة.

§ 4. طرق تحضير الشرائح الدقيقة

عند عمل شرائح دقيقة مؤقتة، يجب مراعاة تسلسل العمليات التالي:

1. اغسل وجفف الشريحة والشفة جيدًا. لتجنب كسر الغطاء الهش للغاية، ضعه في طية منديل بين إبهام وسبابة يدك اليمنى وامسحه بلطف بحركة دائرية بأصابعك.

2. ضع قطرة من السائل (ماء، جليسرين، محلول، كاشف أو صبغة) على الشريحة باستخدام ماصة.

3. قم بعمل جزء من العضو الذي تتم دراسته باستخدام الشفرة. يجب أن تكون الشفرة حادة جدًا.

4. حدد القسم الأنحف وانقله باستخدام إبرة تشريح أو فرشاة رفيعة إلى منتصف الشريحة إلى قطرة من السائل.

5. تغطية القسم بغطاء زجاجي حتى لا يدخل الهواء تحته. للقيام بذلك، قم بإمساك الغطاء الزجاجي من الحواف بإصبعين وقم بإحضار الحافة السفلية بزاوية إلى حافة قطرة السائل وقم بخفضها بسلاسة.

6. إذا كان هناك الكثير من السائل ويتدفق من تحت الغطاء الزجاجي، فقم بإزالته باستخدام ورق الترشيح. إذا كانت هناك فراغات مملوءة بالهواء أسفل زجاج الغطاء، فقم بإضافة السائل بوضع قطرة منه بالقرب من حافة زجاج الغطاء، وورق الترشيح على الجانب الآخر.

عاجلاً أم آجلاً، يواجه معلمو الأحياء وقادة الحلقات مهمة إنشاء شريحة تعليمية صغيرة. ما هي المادة القادرة على تثبيت الجسم البيولوجي لفترة طويلة، وكيفية جعل هذا الإجراء بسيطًا ويمكن الوصول إليه. لم يتم اعتبار المسكنات المعروفة (الراتنجات المثبتة) مواد يمكن الوصول إليها بسهولة، خاصة بعيدا عن المدن الكبيرة. وبالإضافة إلى ذلك، يقولون أن هذه المواد ليست ضارة. وأخيرا، فإن عملية استخدامها صعبة للغاية.

لتصنيع الدواء، يمكنك استخدام الغراء PVA. من المهم أن يكون المستحضر رطبًا ومبللًا جيدًا وأن يكون الغراء طازجًا ومخففًا قليلاً بالماء المغلي البارد النظيف إلى التركيز المطلوب (الغراء مستحلب ويمكن تخفيفه بسهولة). وبعد عدة تجارب وأخطاء، يمكن تجميع التركيز المطلوب وتحديده دون صعوبة.

ثم يتم وضع قطرة من الماء المغلي أو المقطر على شريحة زجاجية نظيفة. يجب إزالة الماء بعناية بقطعة قماش نظيفة وخالية من الشعر أو ورق ترشيح حتى يصبح الزجاج رطبًا قليلاً. وهذا، بالإضافة إلى رطوبة العينة، يعزز التبول الموحد (الخالي من الفقاعات). ضع قطرة صغيرة من غراء PVA المُجهز مسبقًا على السطح المُجهز حتى لا تظهر فقاعات هواء. في بعض الأحيان لا يتدخلون، لكنهم يفسدون مظهر الدواء. يتم نقل قطعة أو عينة معدة مسبقًا، على سبيل المثال، برغوث الماء الذي تم قتله مسبقًا بالماء الساخن، بعناية إلى هذه القطرة. ثم، بحركة مائلة سلسة، ضع غطاءًا زجاجيًا في الأعلى، نظيفًا ورطبًا قليلاً أيضًا. يجب أن تكون طبقة الغراء بين النظارات رقيقة قدر الإمكان.

إذا فشل شيء ما، وكانت العينة ذات قيمة وكبيرة بما فيه الكفاية، دائما تقريبا، على عكس الراتنجات، فمن الممكن غسلها بالماء العادي وتكرار الإجراء. يتم غسل الغراء الزائد بعناية بتيار رقيق من الماء. عليك التأكد من أنه لا يتدفق بين النظارات. يجب أن يتم عقد الغطاء الزجاجي. يمكن إزالة بقايا الماء العكرة قليلاً بعناية باستخدام ورق الترشيح أو شريط من القماش الرقيق الخالي من الوبر.

يجب وضع الاستعدادات المحضرة في مكان دافئ وجاف. مؤشر جاهزية الدواء هو شفافيته. اعتمادًا على العديد من العوامل، يستمر التجفيف حتى يصبح شفافًا من أسبوع إلى أربعة أسابيع. يحدث أن طبقة الغراء السميكة جدًا أو الغراء الملوث بالشوائب لا تصبح شفافة تمامًا، وهذا يؤدي إلى تدهور الصورة إلى حد ما، ولكن بفضل عمق مجال المجهر الضحل، حتى هذه الاستعدادات متاحة للدراسة.

ليس هناك ما يضمن إمكانية استخدام هذه الطريقة لإجراء أي تحضيرات، حيث أن بعضها يتطلب الصباغة وقد تتفاعل الأصباغ مع الغراء.

ت.ن. تقدم لاشكينا، معلمة الأحياء والبيئة بالمدرسة الثانوية رقم 23 من مدينة سيزران، الطريقة التالية لإعداد الشرائح الدقيقة. يمكنك أن تأخذ الجيلاتين العادي وتملأه بالماء حتى ينتفخ. ثم خذ القليل من الجيلاتين المتورم (بدون ماء) في ملعقة كبيرة وقم بتسخينه على النار. عندما يذوب الجيلاتين (لا تريد أن يغلي)، أسقطه على شريحة زجاجية. ضع العينة في هذه القطرة وقم بتغطيتها بغطاء، واضغط عليها جيدًا بإصبعك لتوزيع الجيلاتين بالتساوي. التحضير الدقيق جاهز.

يمكن استخدام السيلوفان بدلاً من ساترة إذا لم تكن ساترة متوفرة. بالإضافة إلى ذلك، يتمتع السيلوفان بميزة واحدة: لا يمكن سحق التحضير الدقيق، لأنه السيلوفان مرن ولا يتشقق مثل الغطاء الزجاجي.

من الضروري العمل مع الجيلاتين بسرعة، وإلا فإنه يتصلب. ولكن إذا حدث هذا، فما عليك سوى وضع الزجاج فوق النار وسيصبح الجيلاتين سائلاً مرة أخرى. الجيلاتين غير ضار ويمكن الوصول إليه واقتصادي للغاية.

تحضير قطع النبات

لعمل المقاطع، يتم أخذ الجسم بإبهام وسبابة اليد اليسرى ويتم تنعيم سطحه باستخدام مشرط أو سكين. خذ شفرة أو ماكينة حلاقة في يدك اليمنى وقم بحركة سلسة وسريعة فوق الجسم باتجاهك وإلى اليمين (انظر الملحق الشكل 1، أ). يجب أن تكون التخفيضات صغيرة ورقيقة. تتم إزالتها من الشفرة بفرشاة ناعمة ونقلها إلى شريحة زجاجية في قطرة متوسطة (انظر الملحق الشكل 1، ب).

لعمل أقسام من الأشياء الصغيرة، يتم وضع الأخير في قلب البلسان (انظر الملحق الشكل 2)، بعد أن قام مسبقًا بعمل قطع أو اكتئاب فيه، ويتم تنفيذ العملية الموصوفة أعلاه. يجب أن تكون الشفرة المستخدمة في إجراء القطع حادة (يجب أن تقص الشعر بسهولة).

الاستعدادات الدقيقة في علم النبات

تحضير قطع من البشرة من الجانب السفلي من ورقة Tradescantia virginiana في قطرة ماء.

لتحضير المستحضر، قم بلف ورقة ترادسكانتيا حول إصبع السبابة بيدك اليسرى بحيث يكون الجانب السفلي الأرجواني متجهًا للخارج. بيدك اليمنى، وباستخدام إبرة تشريح، تمزيق البشرة التي فوق الضلع الأوسط في الجزء الأوسط من الورقة، وتنزع قطعة منها بالملقط. في هذه الحالة، يتم أيضًا التقاط جزء من لب الورقة (النسيج المتوسط) بشكل لا إرادي، ولكن عادةً ما يمكنك العثور على منطقة رقيقة على المحيط تتكون من صف واحد من خلايا البشرة. ضع القطعة الممزقة على شريحة زجاجية في قطرة ماء بحيث يكون الجانب الخارجي للأعلى ثم قم بتغطيتها بغطاء.

تحضير خلايا أوراق نبات Elodea الكندية.

في الجزء العلوي من براعم Elodea، استخدم الملقط لتمزيق الورقة ونقلها إلى قطرة ماء على شريحة زجاجية. يجب وضع الورقة بحيث يكون الجانب السفلي مواجهًا للشريحة الزجاجية.

تحضير البلاستيدات الملونة في خلايا الثمار الناضجة.

باستخدام إبرة تشريح، خذ قطعًا صغيرة من لب زنبق الوادي الناضج ورماد الجبل وثمر الورد. ضع كل قطعة في قطرة ماء على شريحة زجاجية وافصل الخلايا بعناية. تغطية مع زلة الغطاء.

تحضير حبات نشاء البطاطس.

قطع درنة البطاطس. من سطح مقطوع حديثًا، خذ كمية صغيرة من السائل الناشئ بمشرط وانقله إلى قطرة ماء على شريحة زجاجية، وقم بتغطيته بغطاء.

تحضير الخلايا الحجرية لقشر الكمثرى.

ابحث عن مجموعة من الخلايا الصخرية وقم بإزالتها على جزء من غلاف الكمثرى الطازج أو المثبت بالكحول. مكان على شريحة زجاجية وسحق مع طرف مشرط.

ضع قطرة من محلول 1% من الفلوروجلوسينول في 50% من الإيثانول على الخلايا الصخرية، ثم أضف بضع قطرات من حمض الهيدروكلوريك المركز (يجب اتباع احتياطات السلامة عند العمل مع الحمض المركز).

سوف تأخذ الأصداف الخشبية لونًا أحمر الكرز أو قرمزيًا.

بعد ظهور اللون، قم بإزالة الكاشف بورق الترشيح، وأضف قطرة من الجلسرين وقم بتغطية المستحضر بغطاء.

تحضير ثغور الخلايا النباتية.

تحضير عدة أقسام من البشرة السفلية للورقة ووضعها في محلول جلسرين 5% لمدة ساعتين. يتم وضع المقاطع على شريحة زجاجية في نفس المحلول. إنهم يفكرون في الدواء.

ثم استبدل الجلسرين بالماء، ثم أخرجه من تحت الزجاج بورق الترشيح. ينظرون إلى ما تغير.

بعد ذلك، يتم استبدال الماء بمحلول جلسرين 20٪ أو محلول سكروز 1 م. وقد لوحظت التغييرات (انظر الملحق الشكل 3).

تحضير الاستعدادات الدقيقة في علم الحيوان

تحضير مستحضر أبسط الكائنات الحية من منقوع القش.

باستخدام قضيب زجاجي، ضع قطرة من محلول ميثيل السليلوز على الشريحة.

باستخدام ماصة، قم بإسقاط منقوع التبن في هذا المحلول. تغطية الانخفاض مع ساترة. فحص تحت المجهر[ 6 ] .

إعداد شرائح دقيقة لعلم وظائف الأعضاء البشرية

تحضير اللطاخة الدم لدراسة صيغة الكريات البيض.يتم وضع قطرة من الدم على شريحة زجاجية جافة (انظر الملحق الشكل 4، أ). يتم ضبط زجاج الطحن بزاوية 45 درجة على الجسم. عندما يتلامس الدم مع زجاج الطحن، فإنه ينتشر على طول حافته (انظر الملحق، الشكل 4، ب). بعد ذلك، وبحركة سريعة، يتم تحريك زجاج الطحن للأمام، وينزلق على طول سطح الشريحة الزجاجية. في هذه الحالة، يتم تلطيخ الدم على الشريحة الزجاجية في طبقة رقيقة موحدة (انظر الملحق الشكل 4، ج).

تبدو مسحة الدم المجهزة جيدًا صفراء وموحدة وشفافة عند فحصها. في هذه الحالة، تقع عناصر الدم المشكلة في طبقة واحدة.

تحضير الشرائح الدقيقة طبقا لعلم الأحياء الدقيقة

تحضير مستحضرات الخلايا الميكروبية الميتة.

لإجراء دراسة مفصلة للكائنات الحية الدقيقة، يتم استخدام الاستعدادات الدقيقة الثابتة. عند إصلاحها، يتم قتل الميكروبات ثم تلطيخها.

يتكون تحضير المستحضرات الثابتة من العمليات التالية: تحضير اللطاخة، تجفيف المستحضر، تثبيته، صبغه وتجفيفه.

المرحلة 1: تقنية تحضير المسحات (انظر الملحق الشكل. 5).

1. تحضير مسحة من وسط غذائي كثيف

• يتم تطبيق قطرة صغيرة من المياه المالحة في حلقة على شريحة زجاجية منزوعة الشحوم؛
• خذ في يدك اليمنى حلقة بكتريولوجية وأنبوب اختبار مع ثقافة في يدك اليسرى ؛
• ويتم تعقيم الحلقة بوضعها في لهب الموقد في وضع عمودي (أحمر حار) (انظر الملحق الشكل 5-1)؛
• قم بإزالة السدادة من أنبوب الاختبار، وأمسكها بإصبع اليد اليمنى الصغير، واحرق حافة أنبوب الاختبار على مصباح الكحول (انظر الملحق الشكل 5-2،3)؛
• يتم إدخال الحلقة في أنبوب الاختبار، ويتم تبريدها عن طريق ملامسة الجدران، وبعد ذلك تتم إزالة كمية صغيرة من الثقافة من سطح الوسط (انظر الملحق الشكل 5-4)؛
• تتم إزالة الحلقة دون لمس جدران أنبوب الاختبار، ويتم حرق حواف أنبوب الاختبار فوق مصباح الكحول وإغلاقها بسدادة (انظر الملحق الشكل 5-5،6)؛
• تتم إضافة الثقافة الميكروبية الملتقطة إلى قطرة من المحلول الفسيولوجي، ويتم تقليبها جيدًا وتوزيعها بالتساوي على الزجاج على شكل بيضاوي أو دائرة أو مربع بمساحة 1-1.5 سم 2 (انظر ملحق الشكل 5-7)؛
• عند الانتهاء من تحضير اللطاخة، يتم تعقيم الحلقة مرة أخرى (انظر الملحق الشكل 5-8).

1. عند إجراء مسحة من الثقافات من الوسائط المغذية السائلة، يتم تطبيق 1-3 حلقات من مادة الاختبار على شريحة زجاجية وتوزيعها بالتساوي عليها؛ وفي هذه الحالة لا يشترط استخدام المحلول الملحي. ثم تابع كما هو موضح أعلاه.

المرحلة الثانية: تجفيف المسحات.

يتم تجفيف اللطاخة المحضرة في الهواء، فوق لهب الموقد (ولكن ليس في اللهب)، في تيار من الهواء الدافئ أو في منظم الحرارة.

عليك أن تعرف أن التسخين يمكن أن يعطل بنية الميكروبات، وأن المستحضر المجفف بشكل غير كامل سوف يفسد عند إصلاحه.

المرحلة 3: تثبيت السكتات الدماغية.

هناك طرق فيزيائية وكيميائية. عند التثبيت باستخدام الطريقة الفيزيائية، يتم تمرير الزجاج ذو اللطاخة لأعلى ببطء عبر اللهب 3-4 مرات. في هذه الحالة، تموت الكائنات الحية الدقيقة، وتعلق اللطاخة على الزجاج ولا يتم غسلها. يتم غسل الميكروبات من اللطاخة غير المثبتة، وفي اللطاخة المفرطة التثبيت، يلاحظ تدمير الكائنات الحية الدقيقة، أي التفكك إلى أجزاء منفصلة.

يتم التثبيت بالطريقة الكيميائية عن طريق غمر المسحات في سائل التثبيت، والذي يمكن أن يكون بمثابة:

الكحول (15-20 دقيقة)

إيثر الكحول (10-15 دقيقة)

كحول الميثيل (5 دقائق)

الكلوروفورم (بضع ثوان)

الأسيتون المبرد (5 دقائق)

المرحلة الرابعة: تلوين المسحات.

إن تلطيخ الكائنات الحية الدقيقة له قيمة تشخيصية كبيرة. إنها عملية فيزيائية وكيميائية معقدة، حيث تلعب ظواهر الامتزاز والشعيرات الدموية والتقارب الكيميائي بين الأصباغ والجسم المطلي دورًا مهمًا، ودرجة الحموضة في البيئة التي توجد فيها.

هناك طرق بسيطة (إرشادية) ومعقدة (تفاضلية) لتلوين الكائنات الحية الدقيقة.

تلوين بسيط.

يكشف التلوين البسيط للبكتيريا فقط عن شكلها (الشكل والحجم والموقع النسبي للميكروبات). عادة ما يتم استخدام صبغة واحدة فقط (أزرق الميثيلين أو البنفسجي الجنطياني). هناك طرق تلطيخ إيجابية وسلبية.

إيجابي:

• توضع اللطاخة المجهزة والثابتة في جسر خاص فوق الحمام.
• قم بتطبيق أي صبغة لفترة معينة (يجب أن تكون كمية الطلاء بحيث تغطي كامل سطح اللطاخة، بضع قطرات كافية). في هذه الحالة، من الضروري التأكد من أن الصبغة الموجودة على اللطاخة لا تجف، إذا لزم الأمر، يتم سكب أجزاء جديدة من الصبغة على اللطاخة.
• ثم شطف جيدا وبسرعة بالماء.
• يجفف بورق الترشيح.
• يتم وضع قطرة من زيت الغمر وفحصها تحت المجهر.

تعتبر اللطاخة ذات جودة عالية إذا كانت البكتيريا معزولة عن بعضها البعض وذات ألوان متساوية.

سلبي:

باستخدام هذه الطريقة، يتم تلطيخ خلفية اللطاخة، لكن الكائنات الحية الدقيقة تظل غير ملوثة. يتم استخدامه لدراسة الكائنات الحية الدقيقة التي لا تقبل أصدافها أصباغ الأنيلين بسهولة (البيتوسبيرس، اللولبيات).

• يتم تطبيق قطرة من الحبر على حافة الشريحة وخلطها مع قطرة من الثقافة باستخدام حلقة.
• يتم إجراء اللطاخة باستخدام حافة شريحة زجاجية مصقولة بنفس طريقة تحضير لطاخة الدم (انظر الملحق الشكل 6). يتم وضع الشريحة على سطح أفقي وإمساكها باليد اليسرى؛ باليد اليمنى، حركه نحو السقوط بزاوية 45 0 طحن الزجاج ، على طول الحافة التي تنتشر فيها القطرة بالتساوي ؛ على الفور، اضغط على زجاج الطحن بإحكام في نفس الموضع بزاوية، وحركه إلى اليسار على طول الشريحة، والحصول على مسحة موحدة.
• السماح ليجف والمجهر.

التلوين التفاضلي (المعقد).

تعتمد الطرق المعقدة أو التفاضلية لتلطيخ البكتيريا على خصائص التركيب الفيزيائي الكيميائي للخلية الميكروبية. إنها تسمح باستخدام العديد من محاليل الأصباغ والكواشف لتحديد الخصائص المورفولوجية والمكونات الهيكلية للخلية (الجراثيم، الكبسولات، الأسواط، إلخ).

واحدة من أهم الطرق هي تلوين جرام للميكروبات. هذه طريقة تلوين تشخيصية تفاضلية عالمية اقترحها العالم الدنماركي غرام في عام 1884. يتم استخدامه كأحد المفاتيح في المعرفات الميكروبية.

تلوين غرام من الميكروبات.

تعتمد الهوية الجرامية للميكروبات على التركيب الكيميائي للخلية البكتيرية وبنية جدار الخلية.

• ضعي قطعة صغيرة من ورق الترشيح على اللطاخة الثابتة واسكبي فيها محلول بنفسجي الجنطيانا لمدة 1-2 دقيقة.
• قم بإزالة الورق، واستنزاف الطلاء، وبدون شطفه بالماء، اسكب محلول لوغول على المستحضر لمدة دقيقة واحدة (تتحول اللطاخة إلى اللون الأسود).
• عالج اللطاخة بالكحول لمدة 30 ثانية (اغمرها في كوب 2-3 مرات).
• يغسل بالماء.
• بالإضافة إلى ذلك، قم بصبغ الفوكسين المخفف لمدة 1-2 دقيقة.
• يتم تجفيف الطلاء، وغسله بالماء، وتجفيفه بورق الترشيح، وفحصه بنظام الغمر.

الكائنات الحية الدقيقة موجبة الجرام تصبغ اللون البنفسجي، ولا يتم تبييضها بالكحول ولا ترى الفوكسين الأساسي. يتم تغيير لون الكائنات الحية الدقيقة سالبة الجرام بالكحول وتكتسب اللون الوردي والأحمر من تلطيخ الفوكسين.

الكشف عن الكبسولات باستخدام التباين السلبي.

يتم وضع عدد صغير من الخلايا من وسط غذائي صلب في حلقة على شريحة زجاجية في قطرة من الفوكسين المخفف، ممزوجة بقطرة من الحبر، ومغطاة بغطاء ساترة ويتم فحصها تحت المجهر. على الخلفية الرمادية للدواء، تكون الكبسولات عديمة اللون مرئية بوضوح، والخلايا المحيطة بالكائنات الحية الدقيقة ملونة باللون الوردي.

تلطيخ الإندوسبور.

• يُسكب أزرق الميثيلين (حسب ليفلر) على مسحة ثابتة.
• يتم إحضار الصبغة حتى الغليان عن طريق وضع الشريحة بالملقط فوق لهب الموقد. عندما تتبخر الصبغة، تتم إضافتها. مدة الرسم ثلاث مرات، مدة كل منها 10-15 ثانية.
• يتم تبريد الشريحة وغسلها جيدًا بالماء.
• بالإضافة إلى ذلك، في غضون 30 ثانية، قم بإنهاء الطلاء بمحلول مائي 0.5% من السفرانين (أو زيل فوكسين).
• يتم تصفية الصبغة، وغسل المستحضر بالماء، وتجفيفه وفحصه تحت المجهر.

عندما يتم صبغها بشكل صحيح، تكون الخلايا النباتية حمراء والجراثيم زرقاء (وردي فاتح).

المرحلة الخامسة: التجفيف.

تتم إزالة الماء المتبقي على الزجاج بعد الغسيل بعناية باستخدام ورق الترشيح، أو عن طريق امتصاصه بحافة الورقة، أو عن طريق الضغط برفق على قطعة من الورق على اللطاخة. يجب أن تكون اللطاخة المطلية جافة تماما، حيث أن الماء المتبقي يشكل مستحلب غائم مع زيت الأرز المطبق على اللطاخة، مما يتداخل مع الفحص المجهري.

تحضير مستحضرات الخلايا الحية للكائنات الحية الدقيقة.

تتمتع طريقة دراسة الميكروبات في حالة حية غير ملوثة بالمزايا التالية:

• تتم دراسة الميكروبات في شكلها السليم.
• تتيح لنا مراقبة الميكروبات في شكل حي تحديد عدد من الخصائص غير الموجودة في الميكروبات المقتولة (الحركية النشطة).

ومع ذلك، فإن الطريقة لها أيضًا عدد من العيوب:

• من الصعب دراسة الميكروبات غير الملوثة بسبب صغر حجمها.
• عدم القدرة على التركيز على الميكروب لفترة طويلة، حيث أنه يتحرك بسرعة بعيداً عن الأنظار.

وفي الحالة الحية، يتم فحص الميكروبات في "قطرة مسحوقة" و"قطرة معلقة" و"بصمة"، كما يتم النظر في "فيلم أجار"؛ في بعض الحالات، يتم استخدام تلطيخ الميكروبات (الحيوية) داخل الحياة.

المخدرات "قطرة سحقت".

يتم وضع قطرة ماء على شريحة زجاجية، ويتم وضع عدد صغير من خلايا الكائنات الحية الدقيقة قيد الدراسة فيها، وتحريكها وتغطيتها بغطاء. يتم نقل الكائنات الحية الدقيقة التي تنمو على سطح مسطح وفي وسط غذائي سائل إلى قطرة ماء بواسطة حلقة بكتريولوجية. ويمكن أيضًا نقلها المزروعة في وسط سائل باستخدام ماصة معقمة. عند دراسة جسم مجهري لفترة طويلة، يوصى بملء حواف الغطاء الزجاجي بطلاء الأظافر، مما يمنع المستحضر من الجفاف بسرعة (انظر الملحق الشكل 7).

إعداد قطرة معلقة.

يتم تطبيق قطرة من تعليق الكائنات الحية الدقيقة بحلقة أو قلم عادي على غطاء زجاجي، والذي يتم قلبه لأسفل ووضعه على شريحة زجاجية خاصة مع فجوة (بئر) في المنتصف. يجب أن تتدلى القطرة بحرية، دون لمس الحواف وأسفل الحفرة. يتم تشحيم حواف الحفرة مسبقًا بالفازلين. ويتم غلق القطرة في غرفة رطبة، مما يجعل مراقبة الجسم ممكنًا لعدة أيام. بالنسبة للملاحظات طويلة المدى، يتم استخدام النظارات المعقمة، ويتم إعداد تعليق الكائنات الحية الدقيقة في وسط غذائي سائل. ونادرا ما يستخدم عند العمل مع البكتيريا (انظر الملحق الشكل 8).

إعداد "البصمة".

من وسط أجار تنمو فيه الكائنات الحية الدقيقة في حديقة مستمرة أو على شكل مستعمرات فردية، قم بقطع مكعب صغير بمشرط ونقله إلى شريحة زجاجية بحيث يكون السطح الذي يحتوي على الكائنات الحية الدقيقة متجهًا لأعلى. ثم يتم وضع غطاء زجاجي نظيف على العشب أو المستعمرة، ويتم الضغط عليه برفق بحلقة أو ملاقط وإزالته على الفور، مع الحرص على عدم تحريكه إلى الجانب. يتم وضع المستحضر الناتج بحيث تكون الطباعة متجهة لأسفل في قطرة ماء أو أزرق الميثيلين (1:40) على شريحة زجاجية. يمكن أيضًا الحصول على بصمة على شريحة زجاجية عن طريق لمس سطح المستعمرة أو العشب بالشريحة الزجاجية. يتم استخدامها بشكل رئيسي في دراسة تبوغ العقديات.

تحضير "فيلم الآجار" (أو "الزراعة الدقيقة").

يتم تطبيق 0.2-0.3 مل من وسط المغذيات الساخن على شريحة زجاجية رفيعة ومعقمة ومسخنة باستخدام ماصة ساخنة معقمة ويتم توزيعها على كامل سطح الزجاج. بعد أن يتصلب الوسط، قم بإزالة الأجار الزائد بحلقة، تاركًا قسمين رفيعين من الفيلم، كل منهما بحجم غطاء زجاجي. يتم تطبيق قطرة من الثقافة السائلة أو تعليق خلايا الكائنات الحية الدقيقة على مركز المربعات باستخدام حلقة بكتيرية أو ماصة. يتم وضع الزجاج في غرفة رطبة (طبق بتري مع طبقة من ورق الترشيح المبلل)، والتي يتم وضعها في منظم الحرارة. قبل النسخ المجهري، يتم وضع قطرة من الصبغة أو قطرة ماء على الفيلم باستخدام الزراعة الدقيقة المزروعة إذا جف الفيلم ثم يتم تغطيته بعناية بغطاء.

تلوين Intravital للميكروبات.

عند العمل باستخدام قطرة مسحوقة، من أجل رؤية أفضل للميكروبات، يمكن تلوين السائل قليلاً عن طريق إدخال قطرة صغيرة من الصبغة تحت الغطاء. في هذه الحالة، سوف تصبح البكتيريا ملونة وستكون مرئية بشكل أكثر وضوحًا في مجال الرؤية بالمجهر.

1 طريقة التلوين:

• يتم تطبيق محلول مائي مشبع من أزرق الميثيلين على شريحة زجاجية نظيفة.
• يسمح له بان يجف.
• امسح الزجاج بورق الترشيح حتى يأخذ الطلاء لونًا أزرق فاتحًا.
• يتم وضع قطرة من مادة الاختبار على شريحة زجاجية ومغطاة بغطاء.
• تتحول الميكروبات تدريجياً إلى اللون الأزرق، وتبقى على قيد الحياة.

طريقة التلوين الثانية:

يتم خلط قطرة من مادة الاختبار على شريحة زجاجية مع الطلاء (0.1-0.01٪)، وتغطيتها بغطاء ساترة ويتم فحصها تحت المجهر.

وهكذا، قمنا بدراسة الطرق الموجودة لإعداد كل من المستحضرات الدقيقة المؤقتة والدائمة، ومن أي الكائنات الحية يمكن تحضيرها. لقد اكتشفنا أن الاستعدادات الدقيقة تستخدم على نطاق واسع في جميع العلوم البيولوجية.

خاتمة

سمحت لنا دراسة الأدبيات العلمية والمنهجية بالتوصل إلى استنتاج مفاده أن الاستعدادات الدقيقة تستخدم على نطاق واسع في دروس علم الأحياء ولهذا من الضروري أن تكون قادرًا على صنعها.

تنقسم الاستعدادات الدقيقة إلى مؤقتة ودائمة. لا يتم تخزين الاستعدادات المؤقتة، ويتم إعدادها أثناء العمل المختبري، مباشرة قبل دراسة الكائن. يمكن تخزين الاستعدادات الدائمة لسنوات عديدة. يتم إنتاجها بشكل رئيسي صناعيا، ولكن يمكنك إعدادها بنفسك.

تخضع المستحضرات الدقيقة لمتطلبات معينة للإنتاج والتخزين والاستخدام والتي يجب مراعاتها.

قبل الفصل، يجب على المعلم إرشاد الطلاب حول كيفية التعامل مع الشرائح الدقيقة بشكل صحيح.

لإعداد الاستعدادات الدقيقة لعلم الأحياء، يلزم وجود معدات وأدوات خاصة: الشرائح، ونظارات التغطية، والماصات، وأطباق بيتري، وقوارير مختلفة، وإبر التشريح، والملاقط، والمشارط، ومصابيح الكحول، وما إلى ذلك. المعدات المستخدمة في تحضير العينات الدقيقة، وكذلك تحتوي الشرائح الدقيقة على متطلبات تخزين وإعداد يجب مراعاتها أيضًا.

في بعض الأحيان، تحتاج المواد المستخدمة في الشرائح المجهرية إلى أن تكون ثابتة وملونة، حيث يتم استخدام الأصباغ والمثبتات الخاصة.

يمكن تحضير الشرائح الدقيقة بطرق مختلفة. يتضمن ذلك إعداد المقاطع والمسحات والمطبوعات وإعداد الشرائح الدقيقة للخلايا الحية للكائنات الحية (قطرة معلقة، قطرة مسحوقة، طباعة، فيلم أجار) - كل هذه شرائح دقيقة مؤقتة. يمكن أن تكون المواد الخاصة بهم أجزاء مختلفة من النباتات والأنسجة والكائنات الحية الدقيقة.

القائمة الببليوغرافية

1. بافتوتو ج. ورشة عمل حول تشريح وتشكل النبات [النص] / ج.أ. بافتوتو، إل إم. ييري. م: طبعة جديدة، 2002. ص 464. : سوف.
2. علم الأحياء الدقيقة [النص]: توصيات منهجية لإجراء الفصول المعملية لطلاب الأحياء / شركات. N. V. Sharypova - مصحح ومكمل - شادرينسك، 2009. - 47 ص، مريض.
3. ورشة عمل حول تشريح وتشكل النباتات [النص]: كتاب مدرسي. المساعدات للطلاب أعلى كتاب مدرسي المؤسسات / ف.ب. فيكتوروف، م. جولينكوفا ، إل.ن. دوروخين وآخرون؛ إد. إل. إن. دوروخينا. - م: الأكاديمية، 2001. 176 ص.
4. ورشة عمل حول علم الأحياء الدقيقة [النص]: كتاب مدرسي. المساعدات للطلاب أعلى كتاب مدرسي المؤسسات / أ. نيتروسوف، م.أ. إيجوروفا، إل إم. زاخارشوك وآخرون؛ إد. منظمة العفو الدولية. نيتروسوفا. م: الأكاديمية، 2005. 608 ص.
5. ورشة عمل حول فسيولوجيا النبات [النص]: كتاب مدرسي. المساعدات للطلاب أعلى رقم التعريف الشخصي. كتاب مدرسي المؤسسات / IV. بلوتنيكوفا، إ. زيفوخينا، أو.بي. ميخاليفسكايا وآخرون؛ إد. في.ب. ايفانوفا. م: الأكاديمية، 2001. 144 ص.
6. سوخانوفا إل. دفتر ملاحظات للعمل المخبري (الصفوف 7-8) [نص] / L.V. سوخانوفا // 1 سبتمبر: أد. منزل 1 سبتمبر. 2004. رقم 25-26. ص36-46.
7. بارينوف أو جي. [المصدر الإلكتروني]. وضع وصول:http://bio.1september.ru/articlef.php?ID=200104304. - العنوان من الشاشة.
8. ويكيبيديا [مصدر إلكتروني]. - وضع وصول:http://ru.wikipedia.org/wiki/Micropreparation- العنوان من الشاشة.
9. التوصيات المنهجية [المورد الإلكتروني]. - وضع وصول:http://freecode.pspo.perm.ru/080/work/التوصيات المنهجية. هتم- العنوان من الشاشة.
10. http://labx.narod.ru/documents/micropreparaty.html- العنوان من الشاشة.
11. التكنولوجيا المجهرية في علم الأحياء [مصدر إلكتروني]. - وضع وصول:http://labx.narod.ru/documents/micrscope_slides.html- العنوان من الشاشة.
12. التكنولوجيا المجهرية في علم الأحياء [مصدر إلكتروني]. - وضع وصول:http://labx.narod.ru/documents/prigotovlenie_micropreparatov.html- العنوان من الشاشة.
13. موقع مدرس الأحياء [مصدر إلكتروني]. - وضع وصول:http://tana.ucoz.ru/load/436-1-0-354- العنوان من الشاشة.
14. ركن روسيا. طبيعة كوزباس [مصدر إلكتروني]. - وضع وصول:http://prirodakem.narod.ru/Biblioteka/My_st/doci/kl_ob.htm- العنوان من الشاشة.
15. شركة "نيو ليسيوم" [مورد إلكتروني]. - وضع وصول:http://novylicey.narod.ru/microprep_3_5.htm - العنوان من الشاشة.
16. المكتبة الإلكترونية لـ GAGU (جامعة ولاية جورنو ألتاي) [مصدر إلكتروني]. - وضع وصول:http://elib.gasu.ru/eposobia/papina/malprak1/R_1_2.html- العنوان من الشاشة.

طلب

أرز. 1. وضع اليدين عند إجراء القطع (أ) وإزالة الجروح من ماكينة الحلاقة (ب)

أرز. 2. ضع الجسم في قلب نبات البلسان.

أرز. 3. إعداد شريحة مجهرية.

تغطية جسم ما بغطاء زجاجي.

أرز. 4. مخطط لإعداد مسحة الدم

أرز. 5. تحضير تحضير اللطاخة

أرز. 6. تحضير اللطاخة.

أرز. 7. "القطرة المسحوقة": منظر علوي وجانبي

أرز. 8. "قطرة معلقة": مناظر علوية وجانبية

1) الأدوية المؤقتة

لدراسة الكائنات النباتية باستخدام المجهر الضوئي، من الضروري إعداد شريحة مجهرية. تسمى الاستعدادات الدقيقة غير المخصصة للتخزين طويل الأمد بالمؤقتة. يتم وضع الكائن المراد دراسته على شريحة زجاجية في قطرة ماء أو جلسرين أو محلول أو كاشف أو صبغة وتغطيته بغطاء. يمكن تخزين هذه المستحضرات لعدة أيام بوضعها في جو رطب.

2) الأدوية الدائمة

يتم تحضير المستحضرات الدائمة باستخدام طرق خاصة تضمن تخزينها لعقود من الزمن. تشمل الاستعدادات الدائمة المسحات والتركيبات الكلية والأقسام. تُستخدم المسحات لدراسة خلايا الدم ومزارع الكائنات الحية الدقيقة وخلايا الأنسجة المعزولة. الاستعدادات الإجمالية عبارة عن أجسام شفافة ورقيقة منفصلة، ​​ويمكن إجراء أقسام الدراسة يدويًا باستخدام ماكينة الحلاقة. ومع ذلك، عادةً ما يتم تصنيع المقاطع عالية الجودة بسمك معين يبلغ 10...22 ميكرومتر باستخدام أجهزة خاصة - الميكروتومات. غالبًا ما تسمى هذه الأقسام بالتحضيرات المشراح. للحصول على مقاطع أرق (0.01...0.05 ميكرون، أو 10...50 نانومتر)، يتم استخدام الميكروتومات الفائقة.

دعونا نفكر بإيجاز في المراحل الرئيسية لإعداد الاستعدادات الدائمة.

1. تحديد المواد. مباشرة بعد اكتمال التثبيت، يتم غسل المادة إما بالماء (بعد مثبتات الماء)، أو 80٪ كحول (بعد مثبتات الكحول). عدد التغييرات في سوائل التنظيف لا يقل عن 3. الوقت يصل إلى 24 ساعة.

2. الجفاف في الكحولات ذات التركيز المتزايد. في نفس الوقت يتم ضغط المادة. تسمى الحركة المتتابعة للمادة عبر سلسلة من الحلول بالأسلاك. بعد مثبتات الماء، يتم استخدام 8 تغييرات للكحول: 20%، 40%، 80%، نوبتين 96%، نوبتين 100%. بعد مثبتات الكحول - 4 تغييرات للكحول: نوبتان بنسبة 96% ونوبتان بنسبة 100%. في كل نوبة، يتم الاحتفاظ بالمواد لمدة ساعة واحدة.

3. تنوير. هذا هو تشريب المادة بمذيب البارافين - الزيلين (البنزين والكلوروفورم). يتم وضع العينة لمدة ساعة بالتتابع في كل من المحاليل التالية: 3 أجزاء كحول + جزء واحد زيلين، ثم جزأين كحول + جزأين زيلين، ثم جزء واحد كحول + 3 أجزاء زيلين، ثم تغييرين من الزيلين.

4. صب في البارافين. هذا هو استبدال الزيلين بالبارافين. توضع العينة في خليط من الزيلين والبارافين عند درجة حرارة 55...57 درجة وتترك في منظم الحرارة عند درجة الحرارة هذه حتى يتبخر الزيلين تمامًا (من عدة ساعات إلى عدة أيام). بعد ذلك، عند درجة حرارة 55...57 درجة، يتم توصيل الأسلاك من خلال البارافين I (6...12 ساعة)، البارافين II (6...12 ساعة) وتصب في البارافين III. تختلف البارافينات الأول والثاني والثالث فقط في النقاء: البارافين الثالث هو الوسط النهائي الذي يجب أن يتمتع بأكبر قدر من النقاء. والنتيجة هي كتل البارافين التي تحتوي على عينات من المادة. يمكن قطع هذه الكتل في أي اتجاه.

5. تلطيخ المقاطع. يتم لصق أقسام البارافين على شريحة زجاجية نظيفة. كغراء، يمكنك استخدام خليط من بياض بيض الدجاج مع الجلسرين (بنسبة 1: 2) مع إضافة مطهر (الثيمول أو الفينول). عادة ما تكون الأقسام خالية من الكافيين. للقيام بذلك، يتم تمرير الزجاج مع المقاطع الملصقة من خلال الزيلين والكحولات ذات التركيزات المتناقصة (100٪، 96٪، 80٪، 70٪) والماء المقطر. الوقت المستغرق في كل بيئة هو 2...3 دقيقة. بعد ذلك يتم رسمها وفقا للطرق.

6. الجفاف وتطهير الأجزاء الملطخة. ويتم ذلك عن طريق المرور عبر الكحولات ذات التركيز المتزايد ومن ثم عبر الزيلين.

7. الحبس في وسائل الإعلام (ملء). لتخزين الأدوية على المدى الطويل، يجب أن تكون محاطة ببيئة تحمي الدواء من الأكسدة عن طريق الهواء ومن التلف الذي تسببه الفطريات. للصب، يتم استخدام راتنجات خاصة (بلسم كندا، بلسم التنوب)، والتي يتم حلها في الزيلين لاتساق العسل السائل. يتم وضع قطرة من هذا المحلول على القطع وتغطيتها بغطاء.

6. التركيب الكيميائي للمادة الخلوية. العناصر الدقيقة والكبيرة.

تم العثور على أكثر من 80 عنصرًا كيميائيًا في تركيب الخلية، بينما لم يتم تحديد أي عناصر خاصة مميزة للكائنات الحية فقط. ومع ذلك، بالنسبة لـ 27 عنصرًا فقط، من المعروف ما هي الوظائف التي تؤديها. ومن المحتمل أن العناصر الـ 53 المتبقية تدخل الجسم من البيئة الخارجية.

1. المغذيات الكبيرة

أنها تشكل الجزء الأكبر من مادة الخلية. وهي تمثل حوالي 99٪ من كتلة الخلية بأكملها. تركيز أربعة عناصر مرتفع بشكل خاص: الأكسجين (65-75٪)، الكربون (15-18٪)، النيتروجين (1.5-3٪)، والهيدروجين (8-10٪). تشتمل العناصر الكبيرة أيضًا على العناصر التي يتم حساب محتواها في الخلية بأجزاء من أعشار ومئات من النسبة المئوية. وهي، على سبيل المثال، البوتاسيوم والمغنيسيوم والفوسفور والكبريت والحديد والكلور والصوديوم.

2. العناصر الدقيقة وتشمل بشكل رئيسي ذرات المعادن التي تشكل جزءًا من الإنزيمات والهرمونات و

مواد حيوية أخرى. وتوجد هذه العناصر في الجسم بكميات صغيرة جداً: من 0.001 إلى 0.000001%؛ ومن بين هذه العناصر البورون والكوبالت والنحاس والموليبدينوم والزنك واليود والبروم وغيرها.

3. العناصر الدقيقة للغاية

تركيزها لا يتجاوز 0.000001٪. وتشمل هذه العناصر اليورانيوم والراديوم والذهب والزئبق والبريليوم والسيزيوم وغيرها من العناصر النادرة. ولم يتم بعد تحديد الدور الفسيولوجي لمعظم هذه العناصر في الكائنات الحية من النباتات والحيوانات والفطريات والبكتيريا.

العمل المختبري رقم 1

موضوع: "تحضير ووصف الاستعدادات الدقيقة لخلايا الكائنات الحية المختلفة."

الهدف من العمل:تعزيز القدرة على تحضير العينات المجهرية وفحصها تحت المجهر، وإيجاد السمات الهيكلية لخلايا الكائنات الحية المختلفة، وإتقان مصطلحات الموضوع.

معدات:جلد قشور البصلة، الخلايا الظهارية من تجويف الفم البشري، ثقافة العصوية الرقيقة، كوب من الماء، مجهر، ملعقة صغيرة، غطاء زجاجي وشريحة زجاجية، حبر أزرق، يود، تحضيرات دقيقة لخلايا كائن حيواني متعدد الخلايا، دفتر ملاحظات، قلم، قلم رصاص مسطرة,

تقدم:

العمل 1.

1. ضع في اعتبارك في الشكل تسلسل تحضير قشر البصل.
2. قم بتحضير الشريحة عن طريق مسحها جيداً بالشاش.
3. استخدم ماصة لوضع 1-2 قطرات من الماء على الشريحة.
4. باستخدام إبرة تشريح، قم بإزالة قطعة صغيرة من الجلد الشفاف بعناية من السطح الداخلي لقشور البصل. ضع قطعة من القشر في قطرة ماء وقم بتصويبها بطرف الإبرة.
5. قم بتغطية القشرة بغطاء قابل للانزلاق كما هو موضح في الصورة.
6. افحص المستحضر المُجهز بتكبير منخفض. لاحظ أجزاء الخلية التي تراها.
7. صبغ المستحضر بمحلول اليود. للقيام بذلك، ضع قطرة من محلول اليود على شريحة زجاجية. استخدم ورق الترشيح على الجانب الآخر لسحب المحلول الزائد.
8. افحص المستحضر الملون. ما هي التغييرات التي حدثت?

9. افحص المستحضر بتكبير عالي. ابحث عن البلاستيدات الخضراء في خلايا الأوراق، والشريط الداكن المحيط بالخلية، والغشاء؛ يوجد أسفلها مادة ذهبية - السيتوبلازم (يمكن أن تشغل الخلية بأكملها أو تقع بالقرب من الجدران). النواة واضحة للعيان في السيتوبلازم. ابحث عن الفجوة التي تحتوي على عصارة الخلية (وهي تختلف عن السيتوبلازم في اللون).

10. ارسم 2-3 خلايا من قشر البصل. قم بتسمية الغشاء والسيتوبلازم والنواة والفجوة باستخدام عصارة الخلية.
يوجد في سيتوبلازم الخلية النباتية العديد من الأجسام الصغيرة - البلاستيدات. عند التكبير العالي تكون مرئية بوضوح. في خلايا الأعضاء المختلفة يختلف عدد البلاستيدات.
في النباتات، يمكن أن تكون البلاستيدات بألوان مختلفة: أخضر، أصفر أو برتقالي وعديم اللون. في خلايا جلد قشور البصل، على سبيل المثال، تكون البلاستيدات عديمة اللون.

العمل 2.

1. تحضير عينة مجهرية من بكتيريا Bacillus subtilis.

2. فحص المستحضرات تحت المجهر.

3. النظر في الاستعدادات الدقيقة الجاهزة لخلايا كائن حيواني متعدد الخلايا.

4. قارن ما تراه مع صورة الكائن الموجود في الصورة.

الوظيفة 3

1. 
   النظر في الاستعدادات الدقيقة الجاهزة للخلايا الحيوانية متعددة الخلايا
2. 
   قارن ما تراه مع صورة الكائن الموجود في الصورة.

3. قم بتسمية عضيات الخلية الموضحة في الشكل. 4

العمل المختبري رقم 2

موضوع: ""ملاحظة ظاهرة انحلال البلازما وانحلال البلازما""

هدف:التحقق من وجود ظاهرة انحلال البلازما وإزالة البلازما في الخلايا النباتية الحية وسرعة العمليات الفسيولوجية.

معدات:مجاهر، شرائح وأغطية أكواب، قضبان زجاجية، أكواب ماء، ورق ترشيح، محلول ملح الطعام، بصل.

تقدم

1. 
   إزالة الجلد السفلي من قشور البصل (4 مم 2)؛
2. 
   قم بإعداد شريحة صغيرة، وافحص وارسم 4-5 خلايا لما تراه؛
3. 
   على جانب واحد من زجاج الغطاء، ضع بضع قطرات من محلول ملح الطعام، وعلى الجانب الآخر، اسحب الماء باستخدام شريط من ورق الترشيح؛
4. 
   فحص الشريحة الدقيقة لبضع ثوان. انتبه إلى التغييرات التي حدثت لأغشية الخلايا والوقت الذي حدثت فيه هذه التغييرات. ارسم الكائن الذي تم تغييره.
5. 
   ضع بضع قطرات من الماء المقطر على حافة الغطاء واسحبه من الجانب الآخر بورق الترشيح، ثم اشطف محلول تحلل البلازما.
6. 
   افحص الشريحة تحت المجهر لعدة دقائق. لاحظ التغيرات في موضع أغشية الخلايا والوقت الذي حدثت فيه هذه التغييرات.
7. 
   قارن ما تراه مع صورة الكائن في الشكل 1.
8. 
   ارسم الكائن الذي تدرسه.
9. 
   استخلص استنتاجًا يتوافق مع غرض العمل، مع ملاحظة معدل انحلال البلازما وانحلال البلازما. اشرح الفرق في سرعة هاتين العمليتين.

الإجابة على الأسئلة:

1. أين يتحرك الماء (داخل الخلايا أو خارجها) عندما يتم وضع الأنسجة في محلول ملحي؟

2. كيف يمكننا تفسير هذا الاتجاه لحركة الماء؟

3. أين يتحرك الماء عند وضع القماش في الماء؟ ما الذي يفسر هذا؟

4. ما رأيك يمكن أن يحدث في الخلايا إذا تركت في محلول ملحي لفترة طويلة؟

5. هل يمكن استخدام المحلول الملحي لقتل الحشائش الضارة؟

6. تعريف المصطلحات - تحلل البلازما، تحلل البلازما، التناضح، التورم.
7. اشرح لماذا يصبح التفاح أقل عصارة عند طهيه في المربى؟

الشكل 1. تحلل البلازما وتحلل البلازما

العمل المختبري رقم 3

موضوع: "مقارنة بنية الخلايا النباتية والحيوانية والفطريات والبكتيريا."

هدف:تعلم كيفية العثور على السمات الهيكلية لخلايا الكائنات الحية المختلفة ومقارنتها مع بعضها البعض؛ إتقان مصطلحات الموضوع.

معدات:المجاهر، الشرائح والأكواب المغطاة، أكواب الماء، القضبان الزجاجية، أوراق نبات Elodea، الخميرة، ثقافة Bacillus subtilis، الاستعدادات الدقيقة لخلايا الحيوانات متعددة الخلايا.

العمل 1.

1. تحضير مستحضر من خلايا أوراق نبات الإيلوديا. للقيام بذلك، افصل الورقة عن الساق، وضعها في قطرة ماء على شريحة زجاجية وقم بتغطيتها بشفة ساترة.
2. فحص المستحضر تحت المجهر. العثور على البلاستيدات الخضراء في الخلايا.
3. ارسم هيكل الخلية الورقية لنبات Elodea. اكتب تعليقًا على الرسم الخاص بك. 4. انظر إلى الشكل 1. ارسم استنتاجًا حول شكل الخلايا وحجمها أعضاء نباتية مختلفة

أرز. 1. لون وشكل وحجم خلايا أعضاء النبات المختلفة

العمل 2.

1. قم بإزالة بعض المخاط من داخل خدك بملعقة صغيرة. 2. ضع المخاط على شريحة وصبغه بالحبر الأزرق المخفف في الماء. تغطية التحضير مع ساترة. 3. فحص المستحضر تحت المجهر.

الوظيفة 3

1. 
   فكر في شريحة مجهرية جاهزة لخلايا كائن حيواني متعدد الخلايا.

2. قارن ما رأيته في الدرس بصور الأشياء الموجودة على الجداول.

1. 
   قارن هذه الخلايا مع بعضها البعض.
2. 
   أدخل نتائج المقارنة في الجدول 1

الإجابة على الأسئلة:

• 
  ما هي أوجه التشابه والاختلاف بين الخلايا؟
• 
  ما أسباب التشابه والاختلاف بين خلايا الكائنات الحية المختلفة؟

العمل التطبيقي

موضوع : "رسم أبسط مخططات العبور."

هدف:تعلم كيفية كتابة أنواع الأمشاج التي تتكون من كائنات ذات أنماط وراثية معينة؛ اكتب بإيجاز شروط المهام الوراثية؛ حل المشاكل الظرفية في علم الوراثة. مهارات استخدام المصطلحات الوراثية.

معدات:الكتاب المدرسي، دفتر الملاحظات، شروط المهمة، القلم.

تقدم:

التمرين 1

اكتب جميع أنواع الأمشاج التي تكونتها الكائنات الحية التي لها الأنماط الجينية التالية: AAbb، Aa، MmPP، PPKk، AabbCc، AabbCcPP، AaBbCc.

عند كتابة الأمشاج، من الضروري أن نتذكر أنه في كائن متماثل الزيجوت لجين واحد (AA) أو عدة جينات (AAbbcc)، تكون جميع الأمشاج متطابقة في هذه الجينات، لأنها تحمل نفس الأليل.

في حالة تغاير الزيجوت لجين واحد (Aa)، يشكل الكائن نوعين من الأمشاج تحمل أليلات مختلفة. ينتج الكائن الحي ثنائي الزيجوت (AaBb) أربعة أنواع من الأمشاج. بشكل عام، ينتج الكائن الحي عددًا أكبر من أنواع الأمشاج كلما زاد عدد الجينات المتغايرة. العدد الإجمالي لأنواع الأمشاج هو 2 أس n، حيث n هو عدد الجينات في الحالة المتغايرة. عند كتابة الأمشاج، من الضروري الاسترشاد بقانون "نقاوة" الأمشاج، والذي بموجبه يحمل كل مشيج واحدًا من كل زوج من الجينات الأليلية.

المهمة 2

تعلم كيفية كتابة شروط المشكلة الظرفية الوراثية وحلها بإيجاز.

عند كتابة شروط مشكلة وراثية بإيجاز، تتم الإشارة إلى الصفة السائدة بحرف كبير (A)، والصفة المتنحية بحرف صغير (أ) يشير إلى المتغير المقابل للسمة. يتم تحديد النمط الجيني للكائن الذي لديه سمة سائدة، دون مؤشرات إضافية على تماثله أو تغايره في ظروف المشكلة، بـ A؟ حيث يعكس السؤال الحاجة إلى تحديد النمط الجيني في سياق حل المشكلة. إن النمط الجيني للكائن الحي ذو السمات المتنحية يكون دائمًا متماثلًا بالنسبة للأليل المتنحي - أأ. يتم تحديد السمات المرتبطة بالجنس في حالة الميراث المرتبط بـ X كـ Xª أو XA

مثال على تسجيل مختصر للحالة وحل المشكلة

مهمة. في البشر، يكون متغير لون العين البني هو المهيمن على متغير لون العين الزرقاء. امرأة ذات عيون زرقاء تتزوج من رجل بني العينين متغاير الزيجوت. ما هو لون العين الذي يمكن أن يمتلكه الأطفال؟

وصف مختصر للحالة وصف مختصر للحل

أ - لون عين بني الوالدين - ر أأ س أأ

أ – لون العين الأزرق للأمشاج – G a A, a

الآباء: أأ س أأ ذرية - ف أ أأ

النسل؟ اللون البني اللون الأزرق

المهمة 3

اكتب بإيجاز حالة المشكلة الظرفية الوراثية وحلها.

المشكلة: عند البشر، يهيمن قصر النظر على الرؤية الطبيعية. أنجب الوالدان المصابان بقصر النظر طفلاً يتمتع برؤية طبيعية. ما هو النمط الجيني للوالدين؟ ما الأطفال الآخرين يمكن أن يكون هناك من هذا الزواج؟

العمل التطبيقي

موضوع : "حل المشاكل الوراثية."

هدف:تعلم كيفية حل المشاكل الوراثية. شرح تأثير العوامل الخارجية على ظهور السمة؛ مهارات استخدام المصطلحات الوراثية.

المعدات: كتاب مدرسي، دفتر، شروط المهمة، قلم.

تقدم:

1. تذكر القوانين الأساسية لوراثة السمات.

2. التحليل الجماعي للمشاكل المتعلقة بالعبور الأحادي والثنائي الهجين.

3. الحل المستقل للمشكلات المتعلقة بالعبور أحادي الهجين وثنائي الهجين، مع وصف عملية الحل بالتفصيل وصياغة إجابة كاملة.

4. المناقشة الجماعية لحل المشكلات بين الطلاب والمعلم.

5. استنتج.

مشاكل العبور الأحادي الهجين

المشكلة رقم 1. في الماشية، الجين الذي يحدد لون المعطف الأسود هو المهيمن على الجين الذي يحدد اللون الأحمر. ما نوع النسل الذي يمكن توقعه من تهجين ثور أسود متماثل وبقرة حمراء؟

دعونا نلقي نظرة على الحل لهذه المشكلة. أولا، دعونا نقدم بعض التدوين. في علم الوراثة، يتم استخدام الرموز الأبجدية للجينات: يتم تحديد الجينات السائدة بأحرف كبيرة، ويتم تعيين الجينات المتنحية بأحرف صغيرة. إن جين اللون الأسود هو السائد، لذلك سوف نسميه A. جين لون المعطف الأحمر متنحي - أ. لذلك، فإن النمط الجيني للثور الأسود المتماثل سيكون AA. ما هو النمط الجيني للبقرة الحمراء؟ لها سمة متنحية يمكن أن تظهر نفسها ظاهريًا فقط في حالة متماثلة الزيجوت (الكائن الحي). وبالتالي، فإن النمط الجيني لها هو أأ. إذا كان النمط الجيني للبقرة يحتوي على جين سائد واحد على الأقل A، فلن يكون لون معطفها أحمر. الآن بعد أن تم تحديد الأنماط الجينية للأفراد الوالدين، فمن الضروري وضع مخطط التهجين النظري

ينتج الثور الأسود نوعًا واحدًا من الأمشاج وفقًا للجين قيد الدراسة - ستحتوي جميع الخلايا الجرثومية على الجين أ فقط. ولتسهيل الحساب، نكتب فقط أنواع الأمشاج، وليس كل الخلايا الجرثومية لحيوان معين. تحتوي البقرة المتجانسة أيضًا على نوع واحد من الأمشاج - أ. عندما تندمج هذه الأمشاج مع بعضها البعض، يتم تشكيل النمط الجيني الوحيد الممكن - Aa، أي. سيكون جميع النسل موحدًا وسيحمل سمة أحد الوالدين ذوي النمط الظاهري السائد - الثور الأسود.

وبالتالي، يمكن كتابة الإجابة التالية: عند تهجين ثور أسود متماثل وبقرة حمراء، يجب توقع عجول سوداء متجانسة فقط في النسل

يجب حل المشكلات التالية بشكل مستقل، مع وصف الحل بالتفصيل وصياغة إجابة كاملة.

المشكلة رقم 2. ما نوع النسل الذي يمكن توقعه من تهجين بقرة وثور متغاير الزيجوت في لون المعطف؟

المشكلة رقم 3. في خنازير غينيا، يتم تحديد الشعر المجعد بواسطة الجين السائد، ويتم تحديد الشعر الناعم بواسطة الجين المتنحي.

1. أدى تهجين خنزيرين مجعدين مع بعضهما البعض إلى إنتاج 39 فردًا ذو شعر مجعد و11 حيوانًا ذو شعر ناعم. كم عدد الأفراد ذوي النمط الظاهري السائد الذين يجب أن يكونوا متماثلين في هذه الصفة؟

2. خنزير غينيا ذو الشعر المجعد، عند تهجينه مع فرد ذو شعر ناعم، أنتج 28 ذرية مجعدة و 26 ذرية ذات شعر ناعم. تحديد الطرز الجينية للآباء والأبناء.

مشاكل في معبر ثنائي ومتعدد الهجين

المهمة رقم 7. اكتب أمشاج الكائنات الحية ذات الأنماط الجينية التالية: AABB؛ اب. ААББ؛ آآب. آب. آب. أأب. أببس. AALCC؛ آابكك؛ آابكس.

دعونا ننظر إلى مثال واحد. عند حل مثل هذه المشاكل، من الضروري الاسترشاد بقانون نقاء الأمشاج: الأمشاج نقي وراثيا، لأنه يحتوي على جين واحد فقط من كل زوج أليلي. لنأخذ، على سبيل المثال، شخصًا يحمل النمط الجيني AaBbCc. من الزوج الأول من الجينات - الزوج أ - يدخل الجين أ أو الجين أ إلى كل خلية جرثومية أثناء عملية الانقسام الاختزالي. تتلقى نفس الأمشاج الجين B أو b من زوج من الجينات B الموجودة على كروموسوم آخر. يقوم الزوج الثالث أيضًا بتزويد كل خلية جرثومية بالجين السائد C أو أليله المتنحي - c. وبالتالي، يمكن أن تحتوي الأمشاج إما على جميع الجينات السائدة - ABC، أو الجينات المتنحية - ABC، بالإضافة إلى مجموعاتها: ABC، و AbC، و Abe، و aBC، و aBc، و bC.

لكي لا نخطئ في عدد أصناف الأمشاج التي يشكلها كائن ذو النمط الوراثي قيد الدراسة، يمكنك استخدام الصيغة N = 2n، حيث N هو عدد أنواع الأمشاج، و n هو عدد أزواج الجينات غير المتجانسة. من السهل التحقق من صحة هذه الصيغة باستخدام الأمثلة: يحتوي الزيجوت المتغاير Aa على زوج واحد متغاير الزيجوت؛ وبالتالي، N = 21 = 2. وهي تشكل نوعين من الأمشاج: A وa. يحتوي Diheterozygote AaBb على زوجين متخالفين: N = 22 = 4، ويتم تشكيل أربعة أنواع من الأمشاج: AB، Ab، aB، ab. وفقًا لهذا، يجب أن تشكل Triheterozygote AaBCCc 8 أنواع من الخلايا الجرثومية N = 23 = 8)، وقد تم كتابتها بالفعل أعلاه.

المشكلة رقم 8. في الماشية، يهيمن الجين الملوث على الجين المقرن، ويهيمن الجين الخاص بلون المعطف الأسود على الجين الخاص باللون الأحمر. يقع كلا الزوجين من الجينات على أزواج مختلفة من الكروموسومات.

1. ما هو نوع العجول الذي سيصبح إذا عبرت متغاير الزيجوت لكلا الزوجين؟

علامات الثور والبقرة؟

2. ما هو نوع النسل المتوقع من تهجين ثور أسود اللون، متغاير الزيجوت في كلا الزوجين من الصفات، مع بقرة ذات قرن أحمر؟

مهام إضافية للعمل المختبري

المشكلة رقم 1. تم الحصول على فضلات مكونة من 225 من المنك في مزرعة الفراء. من بين هذه الحيوانات، هناك 167 حيوانًا لها فراء بني، و58 حيوانًا من المنك ذات لون رمادي مزرق. تحديد الطرز الجينية للأشكال الأصلية إذا علم أن جين اللون البني هو السائد على الجين الذي يحدد لون الغلاف الرمادي المزرق.

المشكلة رقم 2. في البشر، يهيمن الجين الخاص بالعيون البنية على الجين المسبب للعيون الزرقاء. رجل ذو عيون زرقاء، وكان أحد والديه ذو عيون بنية، تزوج من امرأة ذات عيون بنية، كان والدها ذو عيون بنية وأمها ذات عيون زرقاء. ما نوع النسل الذي يمكن توقعه من هذا الزواج؟

المهمة رقم 3. المهق موروث في البشر كصفة متنحية. في عائلة يكون فيها أحد الزوجين ألبينو والآخر ذو شعر مصبوغ، هناك طفلان. طفل واحد ألبينو والآخر مصبوغ الشعر. ما هو احتمال إنجاب طفلك المهق القادم؟

المشكلة رقم 4. في الكلاب، يهيمن لون المعطف الأسود على القهوة، والشعر القصير يهيمن على الشعر الطويل. يقع كلا الزوجين من الجينات على كروموسومات مختلفة.

1. ما هي النسبة المئوية للجراء قصيرة الشعر السوداء التي يمكن توقعها من تهجين فردين متخالفين في كلتا الصفتين؟

2. اشترى صياد كلبًا أسود ذو شعر قصير ويريد التأكد من أنه لا يحمل جينات معطف طويل بلون القهوة. ما هو النمط الظاهري والنمط الوراثي الشريك الذي يجب اختياره لعملية التهجين للتحقق من النمط الجيني للكلب الذي تم شراؤه؟

المشكلة رقم 5. في البشر، يهيمن الجين الخاص بالعيون البنية على الجين الذي يحدد تطور العيون الزرقاء، ويتغلب الجين الذي يحدد القدرة على استخدام اليد اليمنى بشكل أفضل على الجين الذي يحدد تطور استخدام اليد اليسرى . يقع كلا الزوجين من الجينات على كروموسومات مختلفة. أي نوع من الأطفال يمكن أن يكونوا إذا كان آباؤهم متخالفين؟

المهمة رقم 6. في البشر، يحدد الجين المتنحي الصمم والبكم الخلقي. تزوج رجل أصم أبكم وراثيًا من امرأة ذات سمع طبيعي. هل من الممكن تحديد النمط الجيني لأم الطفل؟

المهمة رقم 7. ومن بذور البازلاء الصفراء تم الحصول على نبات أنتج 215 بذرة، منها 165 صفراء و50 خضراء. ما هي الأنماط الجينية لجميع أشكالها؟

المهمة رقم 8. يشعر الأب والأم بالطعم المر للفينيلثيوريا. اثنان من كل أربعة أطفال لا يشعرون بطعم هذا الدواء. بافتراض أن الاختلافات في الحساسية للفينيل ثيوريا هي أحادية المنشأ، حدد ما إذا كانت عدم الحساسية للفينيل ثيوريا سائدة أم متنحية.