قدم. أقدام مسطحة. عظم على الساق. مسمار نام » يضر القدم » العامل المضاد للنواة من النوع المتجانس. تحليل ANF: الغرض والتصنيف وفك التشفير. ماذا تعني هذه النتائج؟

العامل المضاد للنواة من النوع المتجانس. تحليل ANF: الغرض والتصنيف وفك التشفير. ماذا تعني هذه النتائج؟

معلومات عامة عن الدراسة

تحديد العامل المضاد للنواة (ANF) هو "المعيار الذهبي" للكشف عن الأجسام المضادة للنواة (ANA) وتشخيص أمراض المناعة الذاتية.

يرتبط التسبب في أمراض النسيج الضام الجهازي (SCTD) ارتباطًا وثيقًا باضطرابات الجهاز المناعي وزيادة إنتاج الأجسام المضادة لهياكل خلايا الفرد. تتفاعل الأجسام المضادة الذاتية لمكونات نواة الخلية - الأجسام المضادة للنواة - مع الأحماض النووية والبروتينات النووية، والمستضدات السيتوبلازمية، والتي تتجلى في التغيرات الالتهابية في الأنسجة والأعضاء، وآلام في المفاصل والعضلات، والتعب الشديد، وفقدان الوزن، وتغيرات الجلد. تم العثور على ANAs في العديد من أمراض المناعة الذاتية، ولكنها أكثر شيوعًا في الذئبة الحمامية الجهازية (SLE). تحدث الأجسام المضادة للنواة في أكثر من 90٪ من المرضى الذين يعانون من أمراض النسيج الضام الجهازية، وقد تم حاليًا وصف حوالي 200 نوع، والتي توحد باسم واحد - العامل المضاد للنواة.

عند تحديد ANF عن طريق التألق غير المباشر، يتم استخدام الخط المستمر للخلايا الظهارية للسرطان الغدي الحنجري البشري HEp-2 في أغلب الأحيان. تعد خلايا HEp-2 ركيزة مناسبة جدًا للأبحاث المعملية، نظرًا لأنها تحتوي على نوى كبيرة وتنمو في طبقة واحدة على شرائح زجاجية. يتم الكشف عن ANAs عن طريق الارتباط بالمستضدات داخل الخلايا لخلايا HEp-2.

أثناء الدراسة، تمت زراعة الخلايا الظهارية HEp-2 على شرائح زجاجية، وتم تثبيتها وحضنها بمصل المريض المخفف. بعد إزالة المصل الزائد، يتم تحضين الخلايا بأجسام مضادة تحمل علامة الفلورسين، ثم يتم غسلها مرة أخرى وفحصها باستخدام المجهر الفلوري. وفي هذه الحالة يتم تحديد عيار الجسم المضاد ونوع التوهج. يعتبر العيار الذي يزيد عن 1:160 ذا أهمية تشخيصية. أثناء تفاقم الأمراض الروماتيزمية يتجاوز 1:640، وأثناء مغفرة ينخفض ​​إلى 1:160-1:320. كلما زاد عدد الأجسام المضادة، ارتفع العيار. بناءً على نوع التوهج، من الممكن تحديد أهداف الأجسام المضادة للنواة، وهو أمر ذو أهمية سريرية كبيرة ويحدد التكتيكات لمزيد من الفحص للمريض. الأنواع الرئيسية هي الأنواع المحيطية والحبيبية (صغيرة / كبيرة) والأنواع النووية والمركزية والسيتوبلازمية للتلوين النووي. يتميز كل نوع من أنواع التوهج بميزات مميزة للغاية تجعل من الممكن التمييز بين خيار وآخر.

يرتبط التلوين المتجانس (المنتشر) بوجود الأجسام المضادة للحمض النووي المزدوج، والهستونات، وهو من سمات مرض الذئبة الحمراء والذئبة الناجمة عن الأدوية.

يحدث التلألؤ المحيطي بسبب التوزيع المحيطي للكروماتين في النواة، ويرتبط بالأجسام المضادة للحمض النووي وهو خاص بمرض الذئبة الحمراء. ومن المهم التمييز بين هذا النوع من التلألؤ وتلطيخ الغشاء النووي الذي يحدث في أمراض الكبد المناعية الذاتية.

التلوين الحبيبي (المرقش والشبكي) هو الأكثر شيوعًا والأقل تحديدًا، ويتم اكتشافه في العديد من أمراض المناعة الذاتية. المستضدات الذاتية في هذه الحالة هي مجمعات البروتين النووي في النواة (مستضدات Sm وU1-RNP وSS-A وSS-B وPCNA).

غالبًا ما تشير العيارات العالية جدًا من ANF ذات النوع الحبيبي الخشن من التلألؤ إلى مرض النسيج الضام المختلط.

يحدث التلوين النووي (النواة) بسبب تكوين الأجسام المضادة لمكونات النواة (RNA بوليميراز-1، NOR، U 3 RNP، PM/Scl)، المكتشف في تصلب الجلد، ومرض سجوجرن. يزيد ANA في بعض الأحيان في أمراض الغدد الصماء (داء السكري من النوع الأول، التهاب الغدة الدرقية، الانسمام الدرقي، متلازمة الغدد الصماء)، والأمراض الجلدية (الصدفية، الفقاع)، أثناء الحمل، بعد زرع الأعضاء والأنسجة، في المرضى الذين يخضعون لغسيل الكلى.

يظهر تلألؤ السنترومير في وجود الأجسام المضادة لسنتروميرات الكروموسومات وهو سمة من سمات شكل من أشكال تصلب الجلد - متلازمة كريست.

يرتبط نوع التلألؤ السيتوبلازمي بالأجسام المضادة لمركب الحمض النووي الريبوزي الناقل، وخاصة لـ Jo-1، وهو سمة من سمات التهاب الجلد والعضلات والتهاب العضلات. يتم تحديد هذا النوع من التلوين أيضًا في وجود أجسام مضادة لمكونات السيتوبلازم الأخرى في التهاب الكبد المناعي الذاتي وتليف الكبد الصفراوي الأولي.

يشير الكشف المتزامن لأنواع مختلفة من التلألؤ إلى وجود أنواع مختلفة من الأجسام المضادة.

في الأفراد الأصحاء، يمكن اكتشاف التلألؤ الدقيق الحبيبات عند عيارات منخفضة أو متوسطة أو عالية من ANA، ولكن لا ينبغي اكتشاف أنواع التلألؤ ذات الحبيبات الخشنة أو المتجانسة عادةً.

اعتمادًا على نتائج تقييم نوع التوهج، يتم تطوير أساليب علاجية إضافية للمريض وتوصف دراسات إضافية لتوضيح نطاق ANA.

ما هو البحث المستخدم ل؟

  • لتشخيص أمراض النسيج الضام الجهازية.
  • للتشخيص التفريقي للأمراض الروماتيزمية.
  • لتقييم فعالية العلاج لأمراض المناعة الذاتية.
  • لمراقبة مسار أمراض النسيج الضام الجهازية.

متى يتم تحديد موعد الدراسة؟

  • لأعراض أمراض المناعة الذاتية (حمى طويلة الأمد، آلام المفاصل، التعب، فقدان الوزن، تغيرات الجلد).
  • عند تحديد التغيرات المميزة لأمراض النسيج الضام الجهازية (زيادة ESR، ومستوى البروتين سي التفاعلي، والمجمعات المناعية المنتشرة).

طريقة بحث تستخدم الخلايا الظهارية البشرية HEp-2، والتي تسمح باكتشاف الأجسام المضادة للنواة - وهي إحدى علامات أمراض النسيج الضام الجهازية.

المرادفات الروسية

ANF، الأجسام المضادة للنواة، الأجسام المضادة للنواة (ANA).

المرادفات الإنجليزية

الأجسام المضادة للنواة (ANA)، الركيزة Hep-2، ANA-Hep2، الكشف عن الأجسام المضادة الفلورية المضادة للنواة (FANA).

طريقة البحث

رد فعل المناعي غير المباشر.

ما هي المواد الحيوية التي يمكن استخدامها للبحث؟

الدم الوريدي.

كيف تستعد بشكل صحيح للبحث؟

لا تدخن لمدة 30 دقيقة قبل التبرع بالدم.

معلومات عامة عن الدراسة

تحديد العامل المضاد للنواة (ANF) هو "المعيار الذهبي" للكشف عن الأجسام المضادة للنواة (ANA) وتشخيص أمراض المناعة الذاتية.

يرتبط التسبب في أمراض النسيج الضام الجهازي (SCTD) ارتباطًا وثيقًا باضطرابات الجهاز المناعي وزيادة إنتاج الأجسام المضادة لهياكل خلايا الفرد. تتفاعل الأجسام المضادة الذاتية لمكونات نواة الخلية - الأجسام المضادة للنواة - مع الأحماض النووية والبروتينات النووية، والمستضدات السيتوبلازمية، والتي تتجلى في التغيرات الالتهابية في الأنسجة والأعضاء، وآلام في المفاصل والعضلات، والتعب الشديد، وفقدان الوزن، وتغيرات الجلد. تم العثور على ANAs في العديد من أمراض المناعة الذاتية، ولكنها أكثر شيوعًا في الذئبة الحمامية الجهازية (SLE). تحدث الأجسام المضادة للنواة في أكثر من 90٪ من المرضى الذين يعانون من أمراض النسيج الضام الجهازية، وقد تم حاليًا وصف حوالي 200 نوع، والتي توحد باسم واحد - العامل المضاد للنواة.

عند تحديد ANF عن طريق التألق غير المباشر، يتم استخدام الخط المستمر للخلايا الظهارية للسرطان الغدي الحنجري البشري HEp-2 في أغلب الأحيان. تعد خلايا HEp-2 ركيزة مناسبة جدًا للأبحاث المعملية، نظرًا لأنها تحتوي على نوى كبيرة وتنمو في طبقة واحدة على شرائح زجاجية. يتم الكشف عن ANAs عن طريق الارتباط بالمستضدات داخل الخلايا لخلايا HEp-2.

أثناء الدراسة، تمت زراعة الخلايا الظهارية HEp-2 على شرائح زجاجية، وتم تثبيتها وحضنها بمصل المريض المخفف. بعد إزالة المصل الزائد، يتم تحضين الخلايا بأجسام مضادة تحمل علامة الفلورسين، ثم يتم غسلها مرة أخرى وفحصها باستخدام المجهر الفلوري. وفي هذه الحالة يتم تحديد عيار الجسم المضاد ونوع التوهج. يعتبر العيار الذي يزيد عن 1:160 ذا أهمية تشخيصية. أثناء تفاقم الأمراض الروماتيزمية يتجاوز 1:640، وأثناء مغفرة ينخفض ​​إلى 1:160-1:320. كلما زاد عدد الأجسام المضادة، ارتفع العيار. بناءً على نوع التوهج، من الممكن تحديد أهداف الأجسام المضادة للنواة، وهو أمر ذو أهمية سريرية كبيرة ويحدد التكتيكات لمزيد من الفحص للمريض. الأنواع الرئيسية هي الأنواع المحيطية والحبيبية (صغيرة / كبيرة) والأنواع النووية والمركزية والسيتوبلازمية للتلوين النووي. يتميز كل نوع من أنواع التوهج بميزات مميزة للغاية تجعل من الممكن التمييز بين خيار وآخر.

يرتبط التلوين المتجانس (المنتشر) بوجود الأجسام المضادة للحمض النووي المزدوج، والهستونات، وهو من سمات مرض الذئبة الحمراء والذئبة الناجمة عن الأدوية.

يحدث التلألؤ المحيطي بسبب التوزيع المحيطي للكروماتين في النواة، ويرتبط بالأجسام المضادة للحمض النووي وهو خاص بمرض الذئبة الحمراء. ومن المهم التمييز بين هذا النوع من التلألؤ وتلطيخ الغشاء النووي الذي يحدث في أمراض الكبد المناعية الذاتية.

التلوين الحبيبي (المرقش والشبكي) هو الأكثر شيوعًا والأقل تحديدًا، ويتم اكتشافه في العديد من أمراض المناعة الذاتية. المستضدات الذاتية في هذه الحالة هي مجمعات البروتين النووي في النواة (مستضدات Sm وU1-RNP وSS-A وSS-B وPCNA).

غالبًا ما تشير العيارات العالية جدًا من ANF ذات النوع الحبيبي الخشن من التلألؤ إلى مرض النسيج الضام المختلط.

يحدث التلوين النووي (النواة) بسبب تكوين الأجسام المضادة لمكونات النواة (RNA بوليميراز-1، NOR، U 3 RNP، PM/Scl)، المكتشف في تصلب الجلد، ومرض سجوجرن. يزيد ANA في بعض الأحيان في أمراض الغدد الصماء (داء السكري من النوع الأول، التهاب الغدة الدرقية، الانسمام الدرقي، متلازمة الغدد الصماء)، والأمراض الجلدية (الصدفية، الفقاع)، أثناء الحمل، بعد زرع الأعضاء والأنسجة، في المرضى الذين يخضعون لغسيل الكلى.

يظهر تلألؤ السنترومير في وجود الأجسام المضادة لسنتروميرات الكروموسومات وهو سمة من سمات شكل من أشكال تصلب الجلد - متلازمة كريست.

يرتبط نوع التلألؤ السيتوبلازمي بالأجسام المضادة لمركب الحمض النووي الريبوزي الناقل، وخاصة لـ Jo-1، وهو سمة من سمات التهاب الجلد والعضلات والتهاب العضلات. يتم تحديد هذا النوع من التلوين أيضًا في وجود أجسام مضادة لمكونات السيتوبلازم الأخرى في التهاب الكبد المناعي الذاتي وتليف الكبد الصفراوي الأولي.

يشير الكشف المتزامن لأنواع مختلفة من التلألؤ إلى وجود أنواع مختلفة من الأجسام المضادة.

في الأفراد الأصحاء، يمكن اكتشاف التلألؤ الدقيق الحبيبات عند عيارات منخفضة أو متوسطة أو عالية من ANA، ولكن لا ينبغي اكتشاف أنواع التلألؤ ذات الحبيبات الخشنة أو المتجانسة عادةً.

اعتمادًا على نتائج تقييم نوع التوهج، يتم تطوير أساليب علاجية إضافية للمريض وتوصف دراسات إضافية لتوضيح نطاق ANA.

ما هو البحث المستخدم ل؟

  • لتشخيص أمراض النسيج الضام الجهازية.
  • للتشخيص التفريقي للأمراض الروماتيزمية.
  • لتقييم فعالية العلاج لأمراض المناعة الذاتية.
  • لمراقبة مسار أمراض النسيج الضام الجهازية.

متى يتم تحديد موعد الدراسة؟

  • لأعراض أمراض المناعة الذاتية (حمى طويلة الأمد، آلام المفاصل، التعب، فقدان الوزن، تغيرات الجلد).
  • عند تحديد التغيرات المميزة لأمراض النسيج الضام الجهازية (زيادة ESR، ومستوى البروتين سي التفاعلي، والمجمعات المناعية المنتشرة).

ماذا تعني هذه النتائج؟

القيم المرجعية

النتيجة: سلبية.

العنوان: 1:160.

أسباب زيادة عيار ANF على خلايا HEp-2:

  • الذئبة الحمامية الجهازية (في 95٪ من الحالات)،
  • التهاب الجلد والعضلات / التهاب العضلات ،
  • تصلب الجلد الجهازي (في 60-90٪ من الحالات)،
  • متلازمة سجوجرن (في 40-70% من الحالات)
  • مرض النسيج الضام المختلط (متلازمة شارب) ،
  • متلازمة رينود,
  • الذئبة القرصية،
  • الذئبة الناجمة عن المخدرات،
  • التهاب المفصل الروماتويدي،
  • التهاب الأوعية الدموية الناخر ،
  • كريات الدم البيضاء المعدية ،
  • سرطان الدم،
  • الأورام الخبيثة (أساسا سرطان الغدد الليمفاوية) ،
  • الوهن العضلي الوبيل،
  • التهاب الشغاف،
  • التهاب الكبد المناعي الذاتي المزمن،
  • تليف الكبد الصفراوي الأولي ،
  • مرض الدرن،
  • تغبر الرئة,
  • التليف الخلالي في الرئتين.

أنواع التوهج

نوع الوهج

ما هو نموذجي ل؟

متجانس

بالنسبة لمرض الذئبة الحمراء، ومرض الذئبة الناجم عن الأدوية، وتصلب الجلد الجهازي، والتهاب الكبد المزمن النشط

محيطية

حبيبي

بالنسبة لمرض الذئبة الحمراء، ومتلازمة سجوجرن، ومرض النسيج الضام المختلط، والتهاب المفاصل الروماتويدي

نووي

بالنسبة لالتهاب العضلات/التهاب الجلد والعضلات، وتصلب الجلد، ومتلازمة سجوجرن، ومرض الذئبة الحمراء (SLE)

مركزي

لمتلازمة كريست (الكلس الجلدي، متلازمة رينود، ضعف المريء، تصلب الأصابع، توسع الشعريات)

السيتوبلازم

بالنسبة لالتهاب الجلد والعضلات/التهاب العضلات، وأمراض الكبد المناعية الذاتية، وتليف الكبد الصفراوي الأولي

ما الذي يمكن أن يؤثر على النتيجة؟

  • النتيجة الإيجابية الكاذبة تنتج عن:
    • العمر أكثر من 60-65 سنة (في 10-37٪ من الحالات)؛
    • استخدام الأدوية التي يمكن أن تؤدي إلى مرض الذئبة الناجم عن المخدرات (أسيتازولاميد، كاربيدوبا، كلوروثيازيد، كلوربرومازين، كلوفيبرات، إيثوسوكسيميد، أملاح الذهب، جريزوفولفين، هيدرالازين، أيزونيازيد، أملاح الليثيوم، ميثيل دوبا، وسائل منع الحمل عن طريق الفم، البنسلين، فينيل بوتازون، الفينيتوين، بريميدون، بروكاييناميد). ، بروبيلوراسيل، كينيدين، ريزيربين، ستربتومايسين، سلفوناميد، تتراسيكلين، مدرات البول الثيازيدية).
  • يؤدي تناول الجلوكورتيكوستيرويدات (بريدنيزولون، ديكساميثازون، ميتيبريد) في بعض الأحيان إلى نتيجة سلبية كاذبة.

ملاحظات هامة

  • في 5% من حالات مرض الذئبة الحمراء، من الممكن أن تكون النتيجة سلبية لهذا الاختبار (ANF-negative SLE). في مثل هذه الحالات، لتوضيح التشخيص، من الضروري تحديد الأجسام المضادة لمستضدات SS (Ro).
  • نتيجة الاختبار الإيجابية ليست دليلاً مطلقًا على وجود مرض مناعي ذاتي. في الأشخاص الأصحاء، في 3-13٪ من الحالات، يزداد عيار ANF ويصل إلى 1:320.
  • يجب تقييم نتائج الاختبار بالتزامن مع البيانات السريرية والمعايير المخبرية الأخرى.
  • إذا كانت نتيجة الاختبار إيجابية، فمن المستحسن تحديد خصوصية ANA عن طريق التطعيم المناعي.
  • فحص الحمض النووي المضاد للحمض النووي المزدوج (anti-dsDNA).
  • فحص الأجسام المضادة للمستضدات النووية (ANA).
  • الأجسام المضادة للمستضد النووي القابل للاستخراج (شاشة ENA)
  • الأجسام المضادة للكارديوليبين، IgG وIgM
  • الأجسام المضادة للنواة (anti-Sm، RNP، SS-A، SS-B، Scl-70، PM-Scl، PCNA، CENT-B، Jo-1، الهستونات، الجسيمات النووية، Ribo P، AMA-M2)، كتلة مناعية

ينتمي إلى مجموعة الكولاجينوز الكبيرة التي تتميز بتلف منتشر في الأنسجة الضامة والأوعية الدموية. يعد التشخيص المبكر لهذا المرض مشكلة خطيرة، حيث يمكن أن يبدأ مرض الذئبة الحمراء تحت "قناع" أمراض أخرى. وبما أن مرض الذئبة الحمراء مرض مناعي ذاتي، فإن آلية ظهوره السريري حسب المفاهيم الحديثة يمكن توضيحها من المواقف التالية:

  • تؤدي المجمعات المناعية المنتشرة (CIC)، والتي تشمل الأجسام المضادة للنواة، المترسبة في رابط الدورة الدموية الدقيقة، إلى تطور اعتلال الأوعية الدموية وتلف الأنسجة.
  • تؤدي الأجسام المضادة لخلايا الدم إلى نقص الكريات البيض ونقص الثرومبين اللمفاوي وفقر الدم.
  • تؤدي الأجسام المضادة للفوسفوليبيد إلى تطور متلازمة مضادات الفوسفوليبيد (APS).

تتيح الطرق الحديثة للتشخيص المختبري المناعي تحديد جميع مكونات التسبب في مرض الذئبة الحمراء وبالتالي التحقق من تشخيص المرض بدقة غير عادية تصل إلى 100٪ تقريبًا. ومع ذلك، فإن وجود أي تغييرات في التحليلات يسمح بتفسيرها فقط مع مراعاة الصورة السريرية الفردية.

تجدر الإشارة إلى أن الطريقة السابقة لتشخيص مرض الذئبة الحمراء من خلال وجود خلايا LE في الدم لم تصمد أمام اختبار الزمن، حيث أظهرت حساسية ونوعية منخفضة للغاية، وبالتالي تم التخلي عنها. لا يتم تضمين خلايا LE في نظام معايير SLE.

العلامات الرئيسية لمرض الذئبة الحمراء هي:

مؤشرات لوصف فحص الدم لعلامات الذئبة الحمامية الجهازية

  • الذئبة الجلدية.
  • الذئبة الناجمة عن المخدرات.
  • فرفرية نقص الصفيحات.
  • حمامي.
  • تلف الكبد الشديد.
  • متلازمة كريست
  • التهاب العضلات.
  • التهاب الجلد والعضلات.
  • التهاب المفاصل المزمن عند الأطفال.
  • التهاب الكبد المناعي الذاتي
  • التهاب الأقنية الصفراوية المصلب؛
  • اعتلال الأعصاب.
  • التهاب النخاع.

كيف يتم الإجراء؟

يتم سحب الدم من الوريد الزندي على معدة فارغة في الصباح.

التحضير للتحليل

الذئبة تخثر

تعد مضادات التخثر الذئبية (LA) أحد اختبارات الفحص والتأكيد المهمة لتشخيص APS. تتشكل VA في الجسم نتيجة لتطور عمليات المناعة الذاتية بعد التأثيرات المعدية وقمع تفاعل تحويل البروثرومبين إلى الثرومبين في الدم. عندما يتم الكشف عن هذه الأجسام المضادة في الدم عن طريق إطالة أمد اختبارات التخثر، يتم تعريفها على أنها "مضادات التخثر الذئبية".

نتيجة ايجابية:

  • الأورام.

العامل المضاد للنواة

العامل المضاد للنواة على خط الخلايا HEp-2 (ANF HEp-2، التتر؛ ANA IF، التتر). لوحظ وجود نتيجة إيجابية لـ ANF في أكثر من 90٪ من المرضى الذين يعانون من مرض الذئبة الحمراء والأشكال الجلدية لهذا المرض، وتصلب الجلد، ومرض النسيج الضام المختلط، ومتلازمة سجوجرن. نتيجة تحديد ANF هي العيار، وهو قيمة التخفيف النهائي للمصل الذي يبقى فيه مضان نووي كبير. كلما زاد مقام الكسر، زاد تخفيف المصل، وزاد عدد الأجسام المضادة في مصل المريض. تصل حساسية هذا الاختبار لمرض الذئبة الحمراء إلى 95%.

ارتفاع عيار ANF (1/640 وما فوق):

  • احتمال كبير للإصابة بمرض الروماتيزم الجهازي.
  • احتمال كبير للإصابة بأمراض الكبد المناعية الذاتية.
  • تشير الزيادة في عيار ANF بمرور الوقت إلى تفاقم مرض جهازي.
  • في مرض الذئبة الحمراء، يرتبط العيار بحدة المرض ويتناقص مع العلاج الفعال.

عيار منخفض من ANF (حتى 1/160):

  • في 1-2% من الأفراد الأصحاء؛
  • في أقارب المرضى الذين يعانون من أمراض جهازية.
  • العديد من أمراض المناعة الذاتية والمعدية والأورام.

الأجسام المضادة للنوكليوسومات

تعد الأجسام المضادة النووية (NCAs) واحدة من أولى الأجسام المضادة التي تتشكل في الجسم أثناء تطور مرض الذئبة الحمراء. يرتبط عيار NCA بنشاط المرض. تبلغ خصوصية تحديد هذه الأجسام المضادة الذاتية لتشخيص مرض الذئبة الحمراء أكثر من 95٪.

فك نتيجة التحليل

مستويات عالية من الأجسام المضادة للنيوكليوسومات (إيجابية):

  • الذئبة الناجمة عن المخدرات.
  • مرض الذئبة الحمراء النشط يرافقه التهاب الكلية.
  • احتمال منخفض لمرض الذئبة الحمراء.
  • انخفاض خطر تلف الكلى في مرض الذئبة الحمراء.

الأجسام المضادة IgG للحمض النووي المزدوج تقطعت بهم السبل

يعد وجود الأجسام المضادة IgG للحمض النووي المزدوج (anti-dsDNA IgG؛ anti-dsDNA IgG) محددًا بدرجة كبيرة لمرض الذئبة الحمراء، وبدرجة أقل لأمراض النسيج الضام المنتشرة الأخرى أو مرض الذئبة الحمراء الناجم عن الأدوية. تبلغ حساسية اختبار مرض الذئبة الحمراء (SLE) 85%. يعد التحديد الكمي للأجسام المضادة لـ dsDNA IgG هو الأكثر ملاءمة لمراقبة الحالة والتشخيص والسيطرة على العلاج لدى المرضى الذين يعانون من مرض الذئبة الحمراء، لأنه يرتبط بنشاطه وشدة التهاب كبيبات الكلى.

فك نتيجة التحليل

المستوى الأعلى:

  • عدوى فيروس ابشتاين بار.

تخفيض:

  • معيار.

الأجسام المضادة للكارديوليبين IgG

تعد الأجسام المضادة لـ Anticardiolipin IgG (aCL IgG) أحد أنواع الأجسام المضادة لمضادات الفوسفوليبيد المناعية الذاتية المدرجة في التسبب في متلازمة مضادات الفوسفوليبيد. ويتجلى وجودها في الدم من خلال إطالة أمد اختبارات التخثر المعتمدة على الفسفوليبيد (البروثرومبين، aPTT)، والتي يشار إليها باسم "مضاد تخثر الذئبة".

فك نتيجة التحليل

  • الذئبة الناجمة عن المخدرات.
  • التهاب الكبد ج؛
  • البورليات.
  • عدوى فيروس نقص المناعة البشرية.

الأجسام المضادة للكارديوليبين IgM

تشير الأجسام المضادة للكارديوليبين IgM (aCL IgM)، عند اكتشافها، إلى وجود خطر كبير للإصابة بمرض الذئبة الحمراء (SLE)؛ تم الكشف عن ACL IgM في 20-50% من المرضى الذين يعانون من الذئبة الحمامية الجهازية و3-20% من المرضى الذين يعانون من أمراض روماتيزمية جهازية أخرى.

تفسير

إيجابية (تم اكتشاف الأجسام المضادة):

  • التهاب الكبد ج؛
  • البورليات.
  • عدوى فيروس نقص المناعة البشرية؛
  • أمراض النسيج الضام الجهازية.

أعراف

فِهرِس معيار
مضادات التخثر الذئبة (LA، مضادات التخثر الذئبة، LA) نفي
العامل المضاد للنواة على خط الخلايا HEp-2 (ANF HEp-2، التتر؛ ANA IF، التتر) < 1:160
الأجسام المضادة للنوكليوسومات < 20 отн. ед./мл
الأجسام المضادة IgG للحمض النووي المزدوج تقطعت بهم السبل < 20 МЕ/мл (отрицательно)
الأجسام المضادة لـ Anticardiolipin IgG (aCL IgG) سلبي أو< 12 GPL-ед./мл
الأجسام المضادة لمضادات الكارديوليبين IgM (aCL IgM) < 12 MPL-ед./мл

الأمراض الروماتيزمية الجهازية
العامل المضاد للنواة (ANF) ونوع التلألؤ

تحديد العامل المضاد للنواة (ANF) هو الطريقة الرئيسية للكشف عن الأجسام المضادة للنواة، والتي تسمح باكتشاف معظم أنواع الأجسام المضادة للنواة، بما في ذلك الأجسام المضادة الذاتية للأحماض النووية (dsDNA، ssDNA، RNA)، والمستضدات المطابقة وغير القابلة للذوبان. نتيجة تحديد ANF هي وجود الأجسام المضادة الذاتية في العيار التشخيصي، وهو العيار النهائي لتخفيف المصل، مما يعكس تقارب وتركيز الأجسام المضادة الذاتية، وكذلك نوع تلألؤ نواة الخلية. (اختبار 01.02.15.005). تعتمد خصائص تقنية معينة في المقام الأول على اختيار الركيزة، والتي يمكن أن تختلف من عمليات التجميد (كبد الفئران أو الكلى) إلى خطوط الخلايا المتكاثرة المزروعة (Hep2، Kb، HeLa)، بالإضافة إلى طريقة تثبيت الأنسجة، والتي يمكن أن تؤثر على الحفاظ على عدد من المستضدات النووية ANA.

تاريخ تطور اختبارات الكشف عن الأجسام المضادة للنواة:

بداية القرن العشرين - "الأجسام الزجاجية" في سيتوبلازم الكريات البيض

1948 هارجريفز، ريتشموند، مورتون - طريقة للكشف المختبري عن خلايا LE أثناء الحضانة طويلة الأمد لسرطان الدم لدى مرضى الذئبة الحمراء.

1951 لي، مايكل، فورال - اكتشف عامل المصل الذي يحفز بلعمة نواة الخلايا الليمفاوية عن طريق كريات الدم البيضاء الطرفية

في عام 1957، استخدم هولوبورو وير جونسون طريقة التألق المناعي غير المباشر التي طورها كونز في عام 1950 للكشف عن ANF في عمليات التجميد للكبد البشري.

1961 بيك - الأنسجة المستخدمة من حيوانات المختبر

1982 تان - استخدم خط الخلايا البشرية المستمر HEp-2، وأصبح هذا الاختبار هو المعيار الذهبي للكشف عن ANA

1958 جونز - اكتشف في دماء المرضى الذين يعانون من متلازمة سجوجرن عاملًا قادرًا على ترسيب مستخلصات نواة الخلية، والذي كان بمثابة قوة دافعة لوصف معظم أنواع الأجسام المضادة للنواة.

التألق المناعي غير المباشر على خط الخلايا المستمر Hep2

تم تطوير طريقة للكشف عن ANF بواسطة Tan (1982)، الذي استخدم خط الخلايا الظهارية البشرية المستمرة HEp-2 (ATCC، رقم المرجع CCL-23) كركيزة. هذا الخط الخلوي، المشتق من سرطان الحنجرة الغدي البشري، عبارة عن خلية ظهارية حرشفية كبيرة متعددة الصيغة الصبغية غير كيراتينية تشكل طبقة أحادية على البلاستيك والزجاج.

الشكل: خلايا خط الخلايا HEp-2، ملطخة بصبغة الدم.

إن البساطة المقارنة لهذا الخط والنوى الكبيرة ووجود جميع المستضدات البشرية جعلت طريقة التألق المناعي غير المباشر باستخدام خط الخلايا المستمر HEp-2 هي الطريقة الرئيسية للكشف عن ANF. في الأدبيات باللغة الإنجليزية لا يوجد اسم واحد لهذه الطريقة؛ في بعض الأحيان يشار إلى هذه الطريقة باسم FANA (كشف الأجسام المضادة الفلورية المضادة للنواة) للإيجاز. أدى عدم وجود وحدة في التسميات إلى حدوث ارتباك في أسماء الاختبارات المعملية. في بعض الأحيان يتم استخدام مصطلح "الأجسام المضادة للنواة" من قبل المختبرات المناعية للإشارة إلى الاختبارات المعتمدة على المقايسة المناعية الإنزيمية وطرق التحليل الكيميائي المناعي، بالإضافة إلى طريقة التألق المناعي. في الأدبيات باللغة الروسية، نعتبر أنه من الضروري الحفاظ على الاسم المحلي لهذا المؤشر - "العامل المضاد للنواة" (ANF) من أجل التمييز بين طريقة الفلورسنت المناعي وبين الاختبارات الأخرى للكشف عن ANA.

من الضروري تحديد ANF من فئة IgG، نظرًا لأن اكتشاف ANF الذي تمثله فئات أخرى من الغلوبولين المناعي ليس له قيمة تشخيصية مستقلة. يتم تحضين التخفيفات القياسية لمصل المريض مع ركيزة الأنسجة، مما يسمح للأجسام المضادة للنواة من مصل المريض بالارتباط بالأهداف النووية المناسبة. يتم بعد ذلك الكشف عن مواقع ربط الأجسام المضادة الذاتية باستخدام مصل مضاد للإنسان يحمل علامة الفلورسين.

على الرغم من أنه يمكن استخدام خطوط الخلايا البشرية الأخرى كركائز، نظرًا لشكلها الجيد وسهولة زراعتها، فقد أصبح Hep-2 ركيزة مقبولة بشكل عام للتألق المناعي غير المباشر. يؤدي استخدامه إلى تحسين حساسية الاختبار بسبب التألق الساطع حتى مع التخفيفات الكبيرة لمصل المريض، كما تسمح النواة الكبيرة الغنية بالأكروماتين بوصف دقيق لنوع التألق. بالإضافة إلى ذلك، فإن استخدام خط خلايا Hep-2 يسهل اكتشاف الأجسام المضادة Ro/SS-A، بالإضافة إلى الأجسام المضادة للمستضدات النووية، والتي تكون ضعيفة عند استخدام عمليات التجميد للأنسجة الحيوانية المختبرية. تشمل المزايا الأخرى لـ HEp-2 التردد العالي لانقسام الخلايا، مما يجعل من الممكن اكتشاف الأجسام المضادة للمستضدات التي يتم التعبير عنها فقط أثناء انقسام الخلايا، وغياب المصفوفة الخلوية النسيجية، مما يجعل من الصعب تصور تلألؤ محدد عند مقارنته بالنسيجي. أقسام.

عيار العامل المضاد للنواة

يتم تعريف عيار ANF على أنه التخفيف الأخير لمصل المريض، والذي يحتوي على مضان واضح لنواة الخلية. عند استخدام الأنسجة الحيوانية المختبرية، يكون عيار ANF التشخيصي 1:8-1:10، بينما عند استخدام خط الخلايا HEp-2، يوصى باستخدام عيار أولي قدره 1:80. في هذه الحالة، يكون عيار ANF الطبيعي أقل من 1:160.

عند استخدام عيار أقل من 1:160، فإن تكرار النتائج الإيجابية الضعيفة لدى الأفراد الأصحاء سريريًا لن يزيد عن 5%، وفي الوقت نفسه لن يسمح بفقدان عيارات كبيرة من ANA في المرضى الذين يعانون من أمراض النسيج الضام المنتشرة.

لتحديد المعايرة النهائية، عادةً ما يتم استخدام المعايرة بخطوات x2 (1:160-1:320 - 1:640 - 1:1280 - 1:2560 - 1:5120، وما إلى ذلك. ويمكن أيضًا استخدام معايرة أكثر صرامة. على الخلفية في تفاقم الأمراض الروماتيزمية، عادة ما يتم ملاحظة عيار ANF أكثر من 1:640، وأثناء مغفرة التتر ينخفض ​​إلى 1:160-1:320.

هناك توصيات لتسجيل نتائج تحديد ANF، مع الإشارة إلى المحتوى "في الصلبان". وهذا يسمح للمختبرات بتوفير الكواشف وتقليل تكاليف العمالة للبحث. في هذه الحالة، تحديد العيار النهائي غير ممكن. يجب أن يؤخذ في الاعتبار أن العيار النهائي أكثر أهمية من كمية الأجسام المضادة الذاتية المرتبطة بالركيزة، لأنه يرتبط بشكل مباشر بتقارب تفاعلها مع المستضد. من المستحسن تحديد العيار النهائي في جميع المرضى الإيجابيين، مما يجعل من الممكن توضيح وجود الأجسام المضادة الذاتية عالية الألفة في المصل، والتي ترتبط ارتباطًا وثيقًا بنشاط العملية.

نوع التلألؤ في نواة العامل المضاد للنواة

بالفعل في التجربة الأولى للاستخدام السريري للتألق المناعي غير المباشر للكشف عن ANF باستخدام عمليات التجميد للأنسجة المختبرية، لوحظ أن مصل المرضى الذين يعانون من أمراض المناعة الذاتية "يصبغ" نواة الخلية بشكل مختلف، مما أدى إلى التلألؤ الانتقائي لبعض الهياكل النووية. وأدى توضيح هذه الظاهرة إلى وصف ما يسمى "أنواع التألق" للنواة في اختبار التألق المناعي. ويرجع ذلك إلى حقيقة أن كل نوع من أنواع ANA له أهداف خلوية محددة، ونتيجة لذلك يعكس نوع تألق النواة والنواة والسيتوبلازم في الخلية تفاعل ANA في مصل المريض مع الهياكل المحتوية على المستضد بالداخل. الخلية. يعتمد نوع التلألؤ على وجود أجسام مضادة ذاتية محددة في مصل دم المريض، والتي على أساسها يمكن التوصل إلى استنتاج أولي فيما يتعلق بأنواع ANA الموجودة في هذا المصل. ومع ذلك، فإن استخدام المقاطع النسيجية من أنسجة حيوانات المختبر لا يسمح بتحديد نوع التلألؤ بشكل موثوق. وفي الوقت نفسه، فإن استخدام خطوط الخلايا المستمرة، مثل Hep-2، يجعل من الممكن وصف عدد كبير من المتغيرات في تلطيخ النووية والسيتوبلازمية. هناك ثلاث مجموعات رئيسية من المستضدات، ووجود الأجسام المضادة هو الذي يحدد أنواع مختلفة من التلألؤ:

يزيد نوع تلألؤ نواة الخلية بشكل كبير من محتوى المعلومات لتحديد ANF، وبالتالي يجب تحديده بشكل روتيني عند تحديد هذا المؤشر. إن استخدام خلايا HEp-2 يجعل من الممكن وصف أكثر من 20 نوعًا مختلفًا من الصبغة النووية، والتي تعتمد على طيف الأجسام المضادة المضادة الموجودة في المصل قيد الدراسة. ومع ذلك، بالنسبة للمختبر العملي، يكفي التمييز بين 6 خيارات رئيسية لربط الأجسام المضادة الذاتية بهياكل الخلايا المحتوية على المستضد.

هناك أنواع متجانسة، محيطية، حبيبية (صغيرة / كبيرة)، نووية، مركزية وسيتوبلازمية من التلألؤ النووي. يحتوي كل نوع من أنواع التلألؤ على سمات مميزة للغاية تجعل من الممكن التمييز بين خيار وآخر، بالإضافة إلى مجموعة من المستضدات التي تتفاعل بها الأجسام المضادة الذاتية في أمصال المرضى. إن وصف أنواع التلألؤ يوفر معلومات سريرية قيمة في حد ذاته، بالإضافة إلى أن نوع التلألؤ قد يشير إلى الحاجة إلى اختبارات معملية معينة في المستقبل.

في نوع متجانسيشع تتفاعل الأجسام المضادة الذاتية مع تلك المستضدات التي يتم توزيعها بشكل منتشر في النواة، أي. هي جزء من الكروماتين. عادة، عندما يتم الكشف عن نوع متجانس من التلألؤ، يتم تلوين الكروموسومات المكثفة بألوان زاهية في الخلايا المنقسمة. الوحدات الهيكلية الرئيسية للكروماتين هي النيوكليوزومات - مجمعات الحمض النووي والهستونات. وبالتالي، فإن النوع المتجانس من التلألؤ يشير إلى وجود أجسام مضادة ضد النيوكليوزومات، وdsDNA، والأجسام المضادة للهستونات. ويحدث ذلك في المرضى الذين يعانون من مرض الذئبة الحمراء والذئبة الناجمة عن الأدوية، وكذلك في المرضى الذين يعانون من تصلب الجلد. عادةً ما يشير اكتشاف عيار مرتفع من ANF مع نوع متجانس من التلألؤ إلى تشخيص مرض الذئبة الحمراء.

النوع المحيطي غالبًا ما يتم عزل التوهج بشكل منفصل، على الرغم من أنه نوع من التوهج المتجانس. اكتشافه هو قطعة أثرية من تثبيت الخلية، الأمر الذي يؤدي إلى إعادة توزيع الكروماتين في النواة إلى المحيط. من المهم التمييز بين نوع التلألؤ المحيطي وتلطيخ الغشاء النووي، والذي يتم ملاحظته في أمراض الكبد المناعية الذاتية. تم العثور على النوع المحيطي من التلألؤ في المرضى الذين لديهم أجسام مضادة للحمض النووي المزدوج تقطعت بهم السبل ويتم اكتشافه بشكل رئيسي في المرضى الذين يعانون من مرض الذئبة الحمراء.

النوع الحبيبي هو الأكثر شيوعا، وفي الوقت نفسه، الأكثر غير محددة. أحيانًا يُطلق على هذا النوع من التوهج في الأدب الروسي اسم "المرقط" أو "الشبكة". يعكس الاسم "الحبيبي" هذه الظاهرة بشكل أكثر دقة، لأنه في هذه الحالة تتفاعل الأجسام المضادة الذاتية مع الحبيبات الموجودة في النواة، وهي عبارة عن مجمعات البروتين النووي فوق الجزيئي. تؤدي هذه المجمعات من البروتينات والأحماض النووية عددًا من الوظائف في النواة الضرورية للعمل الطبيعي للخلية. تشتمل هذه المجمعات، على وجه الخصوص، على جسيمات التضفير، التي تقوم بإعادة ترتيب ما بعد النسخ للmRNA الضروري لتخليق البروتين على الريبوسومات. تحتوي التركيبة على العديد من البروتينات النووية المختلفة، والتي تحدد تنوع الأهداف المستضدية عند اكتشاف نوع حبيبي من التلألؤ. المستضدات الذاتية الرئيسية، والأجسام المضادة التي تؤدي إلى تصور النوع الحبيبي من التألق، تشمل مستضدات Sm وU1-RNP وSS-A وSS-B وPCNA. أثناء عملية انقسام الخلايا، تفقد الخلايا معظم مجمعات البروتين النووي المتكونة؛ لذلك، لا يتم تلوين الأشكال الانقسامية في خط الخلية ذات النوع الحبيبي من التلألؤ. ويلاحظ النوع الحبيبي من التلألؤ النووي في المرضى الذين يعانون من مرض الذئبة الحمراء، وSS، وSS، وDM/PM، وRA وعدد من أمراض المناعة الذاتية الأخرى. تسود التتر المنخفضة من النوع الحبيبي ANF في أمصال الدم لدى الأفراد الأصحاء سريريًا المصابين بـ ANF دون وجود علامات على مرض جهازي.

الكشف عن عيارات ANF العالية جدًا (1:2560-1:10000) باستخدام نوع حبيبي خشن يشير التلألؤ النووي عادةً إلى تشخيص مرض النسيج الضام المختلط ويتطلب مزيدًا من الفحص لتحديد مستضد RNP، وهو العلامة المصلية الرئيسية لهذا المرض.

يمكن أن تعمل المستضدات النووية كأهداف للـ ANA، مما يؤدي إلى الكشف النوع النوويضوئي. يعد تحديد نوع التوهج النووي من سمات تصلب الجلد وأنواعه. النوع النووي ضوئي يتم تحديده في المرضى الذين لديهم أجسام مضادة لمكونات النواة، مثل بوليميريز RNA 1، NOR، U 3 RNP، PM/Scl.

النوع المركزي ويلاحظ التألق عندما تظهر الأجسام المضادة في السنتروميرات من الكروموسومات، ولا توجد إلا في الخلايا المنقسمة. وجوده هو سمة من سمات نوع CREST من تصلب الجلد.

نوع السيتوبلازم يشير التوهج إلى وجود أجسام مضادة لمركبات الحمض الريبي النووي النقال، وخاصة Jo-1، والتي يتم ملاحظتها في التهاب العضلات. بالإضافة إلى ذلك، تم اكتشافه في المرضى الذين يعانون من ANA الموجه ضد المكونات الأخرى لسيتوبلازم الخلية: الأجسام المضادة للأكتين في التهاب الكبد المناعي الذاتي، والأجسام المضادة للميتوكوندريا في تليف الكبد الصفراوي الأولي.

يمكن تمييز عدد من الأنواع الأخرى من التلألؤ، وقد تكون هذه الأنواع من تلطيخ نواة الخلية مميزة لنوع معين من ANA. وبالتالي، فإن الأجسام المضادة لـ Scl-70 في اختبار الفلورسنت المناعي على خلايا HEp-20 تعطي تلطيخًا دقيقًا للنواة والنواة، ومضادات p80 - نقاط مضيئة في النواة، والتي تكون غائبة في الخلايا الانقسامية. ومع ذلك، لا بد من الإشارة إلى ندرة وتنوع مثل هذه الظواهر، مما يجعل التعرف عليها أثناء البحث الروتيني غير ضروري.

غالبًا ما يمكن أن يحدث مزيج من عدة أنواع من التلألؤ، على سبيل المثال، الحبيبات الدقيقة والنووية، وهو أمر نموذجي بالنسبة للأجسام المضادة لـ Scl-70. علاوة على ذلك، غالبًا في التخفيفات المنخفضة، يسود نوع واحد من التألق، على سبيل المثال الحبيبي، ومع التخفيفات الإضافية يتم الكشف عن أنواع متجانسة أو مركزية من التألق، مما يشير إلى وجود أنواع مختلفة من ANA في مصل المريض. على الرغم من أن نوع التوهج يزود الطبيب ببيانات معينة لصالح تشخيص معين، إلا أنه من الضروري مراعاة خصوصيته المنخفضة نسبيًا وتنوع الظواهر التي تمت مواجهتها، الأمر الذي يتطلب المزيد من الفحص المختبري.

يعد اكتشاف ANA هو الأساس لاستخدام الاختبارات المعملية الأخرى التي توضح طيف ANA في دم المرضى. نظرًا لمحتوى المعلومات الشديد لهذا الاختبار، يجب تفسير المزيد من الاختبارات والتحليل لنتائج الفحص اللاحق اعتمادًا على نتائج تقييم نوع التلألؤ وعيار ANF.

على الرغم من أن عدم وجود عيارات كبيرة من ANA غالبًا ما يستبعد تشخيص مرض الروماتيزم الجهازي النشط، عند استخدام خط الخلايا HEp-2، في 2-4٪ من المرضى الذين يستوفون معايير تشخيص مرض الذئبة الحمراء، لا يتم الكشف عن ANA أو التتر. منخفضة. يتم تصنيف هؤلاء المرضى أحيانًا على أنهم " ANF-SLE سلبي"لتوضيح التشخيص لدى هؤلاء المرضى، يلزم إجراء مزيد من الفحص، وفي المقام الأول تحديد الأجسام المضادة لمستضدات SS-A. هذه المستضدات قابلة للذوبان بدرجة عالية ويمكن فقدها من نواة الخلية. وللحد من هذه الفئة من المرضى، يتم استخدام اختبارات معقدة، بما في ذلك تحديد الأجسام المضادة للمستضدات النووية المستخرجة، ما يسمى “ فحص أمراض النسيج الضام», اختبار 000723. تسمح النتيجة السلبية لمثل هذا الفحص، مع احتمال كبير جدًا، باستبعاد تشخيص مرض الذئبة الحمراء والأمراض الروماتيزمية الجهازية الأخرى.

الأمراض الروماتيزمية الجهازية
العامل المضاد للنواة (ANF) ونوع التلألؤ

تحديد العامل المضاد للنواة (ANF) هو الطريقة الرئيسية للكشف عن الأجسام المضادة للنواة، والتي تسمح باكتشاف معظم أنواع الأجسام المضادة للنواة، بما في ذلك الأجسام المضادة الذاتية للأحماض النووية (dsDNA، ssDNA، RNA)، والمستضدات المطابقة وغير القابلة للذوبان. نتيجة تحديد ANF هي وجود الأجسام المضادة الذاتية في العيار التشخيصي، وهو العيار النهائي لتخفيف المصل، مما يعكس تقارب وتركيز الأجسام المضادة الذاتية، وكذلك نوع تلألؤ نواة الخلية. (اختبار 01.02.15.005). تعتمد خصائص تقنية معينة في المقام الأول على اختيار الركيزة، والتي يمكن أن تختلف من عمليات التجميد (كبد الفئران أو الكلى) إلى خطوط الخلايا المتكاثرة المزروعة (Hep2، Kb، HeLa)، بالإضافة إلى طريقة تثبيت الأنسجة، والتي يمكن أن تؤثر على الحفاظ على عدد من المستضدات النووية ANA.

تاريخ تطور اختبارات الكشف عن الأجسام المضادة للنواة:

بداية القرن العشرين - "الأجسام الزجاجية" في سيتوبلازم الكريات البيض

1948 هارجريفز، ريتشموند، مورتون - طريقة للكشف المختبري عن خلايا LE أثناء الحضانة طويلة الأمد لسرطان الدم لدى مرضى الذئبة الحمراء.

1951 لي، مايكل، فورال - اكتشف عامل المصل الذي يحفز بلعمة نواة الخلايا الليمفاوية عن طريق كريات الدم البيضاء الطرفية

في عام 1957، استخدم هولوبورو وير جونسون طريقة التألق المناعي غير المباشر التي طورها كونز في عام 1950 للكشف عن ANF في عمليات التجميد للكبد البشري.

1961 بيك - الأنسجة المستخدمة من حيوانات المختبر

1982 تان - استخدم خط الخلايا البشرية المستمر HEp-2، وأصبح هذا الاختبار هو المعيار الذهبي للكشف عن ANA

1958 جونز - اكتشف في دماء المرضى الذين يعانون من متلازمة سجوجرن عاملًا قادرًا على ترسيب مستخلصات نواة الخلية، والذي كان بمثابة قوة دافعة لوصف معظم أنواع الأجسام المضادة للنواة.

التألق المناعي غير المباشر على خط الخلايا المستمر Hep2

تم تطوير طريقة للكشف عن ANF بواسطة Tan (1982)، الذي استخدم خط الخلايا الظهارية البشرية المستمرة HEp-2 (ATCC، رقم المرجع CCL-23) كركيزة. هذا الخط الخلوي، المشتق من سرطان الحنجرة الغدي البشري، عبارة عن خلية ظهارية حرشفية كبيرة متعددة الصيغة الصبغية غير كيراتينية تشكل طبقة أحادية على البلاستيك والزجاج.

الشكل: خلايا خط الخلايا HEp-2، ملطخة بصبغة الدم.

إن البساطة المقارنة لهذا الخط والنوى الكبيرة ووجود جميع المستضدات البشرية جعلت طريقة التألق المناعي غير المباشر باستخدام خط الخلايا المستمر HEp-2 هي الطريقة الرئيسية للكشف عن ANF. في الأدبيات باللغة الإنجليزية لا يوجد اسم واحد لهذه الطريقة؛ في بعض الأحيان يشار إلى هذه الطريقة باسم FANA (كشف الأجسام المضادة الفلورية المضادة للنواة) للإيجاز. أدى عدم وجود وحدة في التسميات إلى حدوث ارتباك في أسماء الاختبارات المعملية. في بعض الأحيان يتم استخدام مصطلح "الأجسام المضادة للنواة" من قبل المختبرات المناعية للإشارة إلى الاختبارات المعتمدة على المقايسة المناعية الإنزيمية وطرق التحليل الكيميائي المناعي، بالإضافة إلى طريقة التألق المناعي. في الأدبيات باللغة الروسية، نعتبر أنه من الضروري الحفاظ على الاسم المحلي لهذا المؤشر - "العامل المضاد للنواة" (ANF) من أجل التمييز بين طريقة الفلورسنت المناعي وبين الاختبارات الأخرى للكشف عن ANA.

من الضروري تحديد ANF من فئة IgG، نظرًا لأن اكتشاف ANF الذي تمثله فئات أخرى من الغلوبولين المناعي ليس له قيمة تشخيصية مستقلة. يتم تحضين التخفيفات القياسية لمصل المريض مع ركيزة الأنسجة، مما يسمح للأجسام المضادة للنواة من مصل المريض بالارتباط بالأهداف النووية المناسبة. يتم بعد ذلك الكشف عن مواقع ربط الأجسام المضادة الذاتية باستخدام مصل مضاد للإنسان يحمل علامة الفلورسين.

على الرغم من أنه يمكن استخدام خطوط الخلايا البشرية الأخرى كركائز، نظرًا لشكلها الجيد وسهولة زراعتها، فقد أصبح Hep-2 ركيزة مقبولة بشكل عام للتألق المناعي غير المباشر. يؤدي استخدامه إلى تحسين حساسية الاختبار بسبب التألق الساطع حتى مع التخفيفات الكبيرة لمصل المريض، كما تسمح النواة الكبيرة الغنية بالأكروماتين بوصف دقيق لنوع التألق. بالإضافة إلى ذلك، فإن استخدام خط خلايا Hep-2 يسهل اكتشاف الأجسام المضادة Ro/SS-A، بالإضافة إلى الأجسام المضادة للمستضدات النووية، والتي تكون ضعيفة عند استخدام عمليات التجميد للأنسجة الحيوانية المختبرية. تشمل المزايا الأخرى لـ HEp-2 التردد العالي لانقسام الخلايا، مما يجعل من الممكن اكتشاف الأجسام المضادة للمستضدات التي يتم التعبير عنها فقط أثناء انقسام الخلايا، وغياب المصفوفة الخلوية النسيجية، مما يجعل من الصعب تصور تلألؤ محدد عند مقارنته بالنسيجي. أقسام.

عيار العامل المضاد للنواة

يتم تعريف عيار ANF على أنه التخفيف الأخير لمصل المريض، والذي يحتوي على مضان واضح لنواة الخلية. عند استخدام الأنسجة الحيوانية المختبرية، يكون عيار ANF التشخيصي 1:8-1:10، بينما عند استخدام خط الخلايا HEp-2، يوصى باستخدام عيار أولي قدره 1:80. في هذه الحالة، يكون عيار ANF الطبيعي أقل من 1:160.

عند استخدام عيار أقل من 1:160، فإن تكرار النتائج الإيجابية الضعيفة لدى الأفراد الأصحاء سريريًا لن يزيد عن 5%، وفي الوقت نفسه لن يسمح بفقدان عيارات كبيرة من ANA في المرضى الذين يعانون من أمراض النسيج الضام المنتشرة.

لتحديد المعايرة النهائية، عادةً ما يتم استخدام المعايرة بخطوات x2 (1:160-1:320 - 1:640 - 1:1280 - 1:2560 - 1:5120، وما إلى ذلك. ويمكن أيضًا استخدام معايرة أكثر صرامة. على الخلفية في تفاقم الأمراض الروماتيزمية، عادة ما يتم ملاحظة عيار ANF أكثر من 1:640، وأثناء مغفرة التتر ينخفض ​​إلى 1:160-1:320.

هناك توصيات لتسجيل نتائج تحديد ANF، مع الإشارة إلى المحتوى "في الصلبان". وهذا يسمح للمختبرات بتوفير الكواشف وتقليل تكاليف العمالة للبحث. في هذه الحالة، تحديد العيار النهائي غير ممكن. يجب أن يؤخذ في الاعتبار أن العيار النهائي أكثر أهمية من كمية الأجسام المضادة الذاتية المرتبطة بالركيزة، لأنه يرتبط بشكل مباشر بتقارب تفاعلها مع المستضد. من المستحسن تحديد العيار النهائي في جميع المرضى الإيجابيين، مما يجعل من الممكن توضيح وجود الأجسام المضادة الذاتية عالية الألفة في المصل، والتي ترتبط ارتباطًا وثيقًا بنشاط العملية.

نوع التلألؤ في نواة العامل المضاد للنواة

بالفعل في التجربة الأولى للاستخدام السريري للتألق المناعي غير المباشر للكشف عن ANF باستخدام عمليات التجميد للأنسجة المختبرية، لوحظ أن مصل المرضى الذين يعانون من أمراض المناعة الذاتية "يصبغ" نواة الخلية بشكل مختلف، مما أدى إلى التلألؤ الانتقائي لبعض الهياكل النووية. وأدى توضيح هذه الظاهرة إلى وصف ما يسمى "أنواع التألق" للنواة في اختبار التألق المناعي. ويرجع ذلك إلى حقيقة أن كل نوع من أنواع ANA له أهداف خلوية محددة، ونتيجة لذلك يعكس نوع تألق النواة والنواة والسيتوبلازم في الخلية تفاعل ANA في مصل المريض مع الهياكل المحتوية على المستضد بالداخل. الخلية. يعتمد نوع التلألؤ على وجود أجسام مضادة ذاتية محددة في مصل دم المريض، والتي على أساسها يمكن التوصل إلى استنتاج أولي فيما يتعلق بأنواع ANA الموجودة في هذا المصل. ومع ذلك، فإن استخدام المقاطع النسيجية من أنسجة حيوانات المختبر لا يسمح بتحديد نوع التلألؤ بشكل موثوق. وفي الوقت نفسه، فإن استخدام خطوط الخلايا المستمرة، مثل Hep-2، يجعل من الممكن وصف عدد كبير من المتغيرات في تلطيخ النووية والسيتوبلازمية. هناك ثلاث مجموعات رئيسية من المستضدات، ووجود الأجسام المضادة هو الذي يحدد أنواع مختلفة من التلألؤ:

يزيد نوع تلألؤ نواة الخلية بشكل كبير من محتوى المعلومات لتحديد ANF، وبالتالي يجب تحديده بشكل روتيني عند تحديد هذا المؤشر. إن استخدام خلايا HEp-2 يجعل من الممكن وصف أكثر من 20 نوعًا مختلفًا من الصبغة النووية، والتي تعتمد على طيف الأجسام المضادة المضادة الموجودة في المصل قيد الدراسة. ومع ذلك، بالنسبة للمختبر العملي، يكفي التمييز بين 6 خيارات رئيسية لربط الأجسام المضادة الذاتية بهياكل الخلايا المحتوية على المستضد.

هناك أنواع متجانسة، محيطية، حبيبية (صغيرة / كبيرة)، نووية، مركزية وسيتوبلازمية من التلألؤ النووي. يحتوي كل نوع من أنواع التلألؤ على سمات مميزة للغاية تجعل من الممكن التمييز بين خيار وآخر، بالإضافة إلى مجموعة من المستضدات التي تتفاعل بها الأجسام المضادة الذاتية في أمصال المرضى. إن وصف أنواع التلألؤ يوفر معلومات سريرية قيمة في حد ذاته، بالإضافة إلى أن نوع التلألؤ قد يشير إلى الحاجة إلى اختبارات معملية معينة في المستقبل.

في نوع متجانسيشع تتفاعل الأجسام المضادة الذاتية مع تلك المستضدات التي يتم توزيعها بشكل منتشر في النواة، أي. هي جزء من الكروماتين. عادة، عندما يتم الكشف عن نوع متجانس من التلألؤ، يتم تلوين الكروموسومات المكثفة بألوان زاهية في الخلايا المنقسمة. الوحدات الهيكلية الرئيسية للكروماتين هي النيوكليوزومات - مجمعات الحمض النووي والهستونات. وبالتالي، فإن النوع المتجانس من التلألؤ يشير إلى وجود أجسام مضادة ضد النيوكليوزومات، وdsDNA، والأجسام المضادة للهستونات. ويحدث ذلك في المرضى الذين يعانون من مرض الذئبة الحمراء والذئبة الناجمة عن الأدوية، وكذلك في المرضى الذين يعانون من تصلب الجلد. عادةً ما يشير اكتشاف عيار مرتفع من ANF مع نوع متجانس من التلألؤ إلى تشخيص مرض الذئبة الحمراء.

النوع المحيطي غالبًا ما يتم عزل التوهج بشكل منفصل، على الرغم من أنه نوع من التوهج المتجانس. اكتشافه هو قطعة أثرية من تثبيت الخلية، الأمر الذي يؤدي إلى إعادة توزيع الكروماتين في النواة إلى المحيط. من المهم التمييز بين نوع التلألؤ المحيطي وتلطيخ الغشاء النووي، والذي يتم ملاحظته في أمراض الكبد المناعية الذاتية. تم العثور على النوع المحيطي من التلألؤ في المرضى الذين لديهم أجسام مضادة للحمض النووي المزدوج تقطعت بهم السبل ويتم اكتشافه بشكل رئيسي في المرضى الذين يعانون من مرض الذئبة الحمراء.

النوع الحبيبي هو الأكثر شيوعا، وفي الوقت نفسه، الأكثر غير محددة. أحيانًا يُطلق على هذا النوع من التوهج في الأدب الروسي اسم "المرقط" أو "الشبكة". يعكس الاسم "الحبيبي" هذه الظاهرة بشكل أكثر دقة، لأنه في هذه الحالة تتفاعل الأجسام المضادة الذاتية مع الحبيبات الموجودة في النواة، وهي عبارة عن مجمعات البروتين النووي فوق الجزيئي. تؤدي هذه المجمعات من البروتينات والأحماض النووية عددًا من الوظائف في النواة الضرورية للعمل الطبيعي للخلية. تشتمل هذه المجمعات، على وجه الخصوص، على جسيمات التضفير، التي تقوم بإعادة ترتيب ما بعد النسخ للmRNA الضروري لتخليق البروتين على الريبوسومات. تحتوي التركيبة على العديد من البروتينات النووية المختلفة، والتي تحدد تنوع الأهداف المستضدية عند اكتشاف نوع حبيبي من التلألؤ. المستضدات الذاتية الرئيسية، والأجسام المضادة التي تؤدي إلى تصور النوع الحبيبي من التألق، تشمل مستضدات Sm وU1-RNP وSS-A وSS-B وPCNA. أثناء عملية انقسام الخلايا، تفقد الخلايا معظم مجمعات البروتين النووي المتكونة؛ لذلك، لا يتم تلوين الأشكال الانقسامية في خط الخلية ذات النوع الحبيبي من التلألؤ. ويلاحظ النوع الحبيبي من التلألؤ النووي في المرضى الذين يعانون من مرض الذئبة الحمراء، وSS، وSS، وDM/PM، وRA وعدد من أمراض المناعة الذاتية الأخرى. تسود التتر المنخفضة من النوع الحبيبي ANF في أمصال الدم لدى الأفراد الأصحاء سريريًا المصابين بـ ANF دون وجود علامات على مرض جهازي.

الكشف عن عيارات ANF العالية جدًا (1:2560-1:10000) باستخدام نوع حبيبي خشن يشير التلألؤ النووي عادةً إلى تشخيص مرض النسيج الضام المختلط ويتطلب مزيدًا من الفحص لتحديد مستضد RNP، وهو العلامة المصلية الرئيسية لهذا المرض.

يمكن أن تعمل المستضدات النووية كأهداف للـ ANA، مما يؤدي إلى الكشف النوع النوويضوئي. يعد تحديد نوع التوهج النووي من سمات تصلب الجلد وأنواعه. النوع النووي ضوئي يتم تحديده في المرضى الذين لديهم أجسام مضادة لمكونات النواة، مثل بوليميريز RNA 1، NOR، U 3 RNP، PM/Scl.

النوع المركزي ويلاحظ التألق عندما تظهر الأجسام المضادة في السنتروميرات من الكروموسومات، ولا توجد إلا في الخلايا المنقسمة. وجوده هو سمة من سمات نوع CREST من تصلب الجلد.

نوع السيتوبلازم يشير التوهج إلى وجود أجسام مضادة لمركبات الحمض الريبي النووي النقال، وخاصة Jo-1، والتي يتم ملاحظتها في التهاب العضلات. بالإضافة إلى ذلك، تم اكتشافه في المرضى الذين يعانون من ANA الموجه ضد المكونات الأخرى لسيتوبلازم الخلية: الأجسام المضادة للأكتين في التهاب الكبد المناعي الذاتي، والأجسام المضادة للميتوكوندريا في تليف الكبد الصفراوي الأولي.

يمكن تمييز عدد من الأنواع الأخرى من التلألؤ، وقد تكون هذه الأنواع من تلطيخ نواة الخلية مميزة لنوع معين من ANA. وبالتالي، فإن الأجسام المضادة لـ Scl-70 في اختبار الفلورسنت المناعي على خلايا HEp-20 تعطي تلطيخًا دقيقًا للنواة والنواة، ومضادات p80 - نقاط مضيئة في النواة، والتي تكون غائبة في الخلايا الانقسامية. ومع ذلك، لا بد من الإشارة إلى ندرة وتنوع مثل هذه الظواهر، مما يجعل التعرف عليها أثناء البحث الروتيني غير ضروري.

غالبًا ما يمكن أن يحدث مزيج من عدة أنواع من التلألؤ، على سبيل المثال، الحبيبات الدقيقة والنووية، وهو أمر نموذجي بالنسبة للأجسام المضادة لـ Scl-70. علاوة على ذلك، غالبًا في التخفيفات المنخفضة، يسود نوع واحد من التألق، على سبيل المثال الحبيبي، ومع التخفيفات الإضافية يتم الكشف عن أنواع متجانسة أو مركزية من التألق، مما يشير إلى وجود أنواع مختلفة من ANA في مصل المريض. على الرغم من أن نوع التوهج يزود الطبيب ببيانات معينة لصالح تشخيص معين، إلا أنه من الضروري مراعاة خصوصيته المنخفضة نسبيًا وتنوع الظواهر التي تمت مواجهتها، الأمر الذي يتطلب المزيد من الفحص المختبري.

يعد اكتشاف ANA هو الأساس لاستخدام الاختبارات المعملية الأخرى التي توضح طيف ANA في دم المرضى. نظرًا لمحتوى المعلومات الشديد لهذا الاختبار، يجب تفسير المزيد من الاختبارات والتحليل لنتائج الفحص اللاحق اعتمادًا على نتائج تقييم نوع التلألؤ وعيار ANF.

على الرغم من أن عدم وجود عيارات كبيرة من ANA غالبًا ما يستبعد تشخيص مرض الروماتيزم الجهازي النشط، عند استخدام خط الخلايا HEp-2، في 2-4٪ من المرضى الذين يستوفون معايير تشخيص مرض الذئبة الحمراء، لا يتم الكشف عن ANA أو التتر. منخفضة. يتم تصنيف هؤلاء المرضى أحيانًا على أنهم " ANF-SLE سلبي"لتوضيح التشخيص لدى هؤلاء المرضى، يلزم إجراء مزيد من الفحص، وفي المقام الأول تحديد الأجسام المضادة لمستضدات SS-A. هذه المستضدات قابلة للذوبان بدرجة عالية ويمكن فقدها من نواة الخلية. وللحد من هذه الفئة من المرضى، يتم استخدام اختبارات معقدة، بما في ذلك تحديد الأجسام المضادة للمستضدات النووية المستخرجة، ما يسمى “ فحص أمراض النسيج الضام», اختبار 000723. تسمح النتيجة السلبية لمثل هذا الفحص، مع احتمال كبير جدًا، باستبعاد تشخيص مرض الذئبة الحمراء والأمراض الروماتيزمية الجهازية الأخرى.

مقالات مماثلة